3. 3 ^h ^.■k.' 7 . » t >» ,.r*4. ■*r - >'< y ^^ '> 23. that very marked interference effects take place , as rays from the slot B in the direction of the lines jBI, i?II, jBIII, traverse a path one two and tliree half wave lengths respectively, longer than rays at the corresponding slants from slot A. Consequently it is only in the direction B\l that we get the double intensity etfect from the two slots, whilst at the slant B\ and Z>III they completely neutra- lise one another. Intermediate slants of course give intermediate effects. We now plot the curve p" 123 r showing the result, and find that the general effect has been to divide up the single broadeued ^) Care must be taken not to confiise the intensity curve with the amplitude curve. The intensity is as the Square of the amplitude, and the dotted line shown is a sufficient approximation for the purpose here in view. 22 Rbeinberg: Common Basis ofthe Theories ofMicroscopic Vision. XIX, 1. out central Image into 3 Images approximately equal in widtli and mueb more abrupt in their transition from liglit to darkness. (The diagram of course only shows the effect on one side.) A further outside band on each side, 3 r, of only half the width of the others is formed, but is of relatively so little luminosity as to be invisible, and may be neglected. The effect just described is easily denion- strated experimentally, see figure 21, which should be compaved with ligure 1 7 . Now see what takes place if we double or treble the width ot the Space between the two slots, as shown diagrammatically in 24. figures 24 and 25 respectively , and actually in figure 22 and 23 respectively. In the first case just twice, and in the second just three times as many directions arise in which the interference etfects of the two Slots produce total destruction of the light. Consequently we get the space occupied by the broadened out central Image of one Slot divided into 5 bands or 7 bands respectively, moreover the transitions from light to darkness increase in abruptness. It has therefore become apparent that a doubling or trebliug of the distance between the slots has produced a doubling or trebling of the number of bands on each side of the central one, and any further increase of the distance separating the two, would result in a further proportional addition to the number of bands. We can XIX, 1. Rheinberg: Common Bcasis ofthe Theoreis ofMicroscopic Vision. 23 (leduce from this that the ceutres of tlie bands from one auother Vary inversely as tlie distance separatiug the slots, and we then more clearly see the rehitionship both as to result and cause, to the case of the extension or contraction of the bands formed from a siugle slot, with which we fully dealt in the previous chapter. We have only spoken thus far of the rearrangement of light of the central band from a Single slot. Natnrally the bauds flanking this one also get broken up in like manner, but it is to be noted that with these only half as many maxima of light are 2t formed on each side of their central point, owing to the faet that the central band from a Single slot is twice as wide as the other ones (see fig. 7). ^ 1) This pcculiarity that tlie central band of a single slot is twice as wide as the others is worthy of notice. It may be looked upon as diie to the foUowing reason: With Single slots we have seen that we get our brightest light at all points at which rays arrive from the two ends of the slot with a difference of an odd number of half wave lengths, and that from these points the light gradually decreases tili the nearest point in the same plane at which they arrive with a diflference of half a wave length more, or half a wave length less. But there is one exception, viz. : l)e- tween the point Q where there is a difference of one half wave length, and P' where there is a ditference of no half wave length, for from Q to P' 24 Rheinberg: Common Basis ofthe Theories ofMicroscopic Vision. XIX, 1. Next let US consider the case of three slots , this being one of special interest, and suppose the slots A, B and C to be equally wlde and separated by a distance eqnal to their width. We can find the Joint eflfect of these three sh;)ts by regarding it as the elTect due A*ß to every combination of two of thera. ß^C There are firstly A and B^ which aäC would produee the intensity cnrve of figure 20 with one maxininm on each side of the central band. Then there are B and 6', which would produee the same curve. The addition of these two similar curves produee one with every point double as luminous , as shown in figure 26. Then there is the 26. 27. 28. eflfect of the combination A and 6', viz. : the curve shown in figure 25 with three maxima on each side. Adding this to the other one, we see (fig. 26 and 27) that the position of the maxima the light increases, and this accounts for the double width of the central band as eompared to the others. Although the point Q thus forms an exeeption to the general rule in not being the brightest point of the band in which it is situated, yet it is usual and convenient to designate as „maxima" all the points at which rays arrive froui the two ends of the slot with an odd nuinber of half wave lengths difterence, and in what foUows () will be spoken of as the Position of first maximum formed by a single slot. XIX, 1. Rheinberg: Common Basis ofthe Theories ofMicroscopic Vision. 25 produced by pairs of adjacent slots is left iinaltered, without new ones being formed wliich in any way approach them as regards brightness, but that they are somewhat narrowed in width and separated by a greater distance in consequeuce. w cc -f in to r-'co '^ «o <ä i^:'^ iO v* \\n co i>'CO i> iH N W -^ iO tol-r- Tl « t lO '< -^ Oi CC '^l^ IM «^ W The same method of representation might be nsed for a larger number of slots, figure 29 and 28 shows the action of seven slots. ^ The Chief point to note about these is the fnrther decrease in width of the bright bands. 1) In this tigure the dotted line RP represents the intensity curve for a Single slot. For greater convenience, it is taken as being straight. 26 Rlieinberg: Common Basis of the Theories ofMicroscopic Vision, XIX, 1. Now lastly we come to consider the result of a very large inimber of sh:)ts, say some thousauds. We here get the bright bands reduced in width to their lowest limits , tliey are eacli of them au absolutely sharp Image of the slot used as an object. Though figure 29 already shows that any further increase of slots would not alter the intensity curve much, as by the construction there employed it would only meau addiug more lines of very small height with greater numbers of maxima, there is auotlier and perhaps still simpler way of regarding the matter. Suppose we have 1000 slots. Consider a point so exceedingly close to any maximum of light, that waves reaching it from the first and second slot ditfer in phase by only one-thousandth wave length. Then the waves reaching that point from the !*'• and .501**- slot will dilfer by just ^ wave length, and therefore neutralise one another. The same with the 2^"^- and 502 "'^•, and so forth. At very slightly dilfering slants the 1^'and 500*^- the 2^^^- and 501^^- slot neutralise each other etc. Thus everywhere except at the maxima themselves (at wbich points waves arriving from any and every two slots differ by an exact even number of wave lengths) , the effect of one slot will be neu- tralised by the effect of some other slot, and therefore the bright lines or Images of the slot are perfectly sharp. Already in figure 28 it will be observed that the contours of the central and first Image on each side are fairly sharp Images of the irregulär slot which served as the object. That the width of all the Images is nearly the same, is due to the fact of the photo being taken with approximately monochromatic light. ^ Just as with a Single slot, the maxima for dift'erent wave lengths are formed at difterent points, and therefore spectra are formed. Only that with a Single slot the spectra are impure by reason of overlapping of broadened out bands formed by each wave length (fig. 11), whereas now, the overlapping is very greatly di- minished because the spectra consist of a series of sharp Images of the slot corresponding to each wave length. We have in fact arrived at the principle of the diffraction spectroscope. It may here be pointed out that the length or dispersion of the spectra are directly proportionate to their distance from the central Image for : ') AU the photos (%. 15—17, 21—23, 27, 28) were taken through a malachite green screen, passing a moderately narrow band of the spectrum about the F line. XIX, 1. Kbeinberg: Common Basis of the Theories of Microscopic Vision. 2 7 — ( nun If the Position of the 1 st. 2 nd. 3 rd. 4 th. etc. maximum of the violet rays are ... 1 — 3 — 5 respectively from the central image, then the Position of corresponding maxima for the red rays are about 1*/., — 4\, — 7\., — 10'/., „ and consequently the length of the spec- tra are V, - l^/, - 2 V. - 3V, „ One or two rules about the Images formed by a uumber of regularly spaced slots are wortb noting: 1) The Position of the maxima depends solely ou the number of the slots in a g-iven width, it is independeut of the relative width of the slots to the interspaces. Thus all the rows in figure 30 give their maxima at the same points. This follows because the position of the maxima depends lipon the distance of auy point in one slot 30. 31. to a corresponding point in the uext (see figs. 20, 24, 25) which is the same tliing as the sum of the width of one slot plus one iuterspace. In this respect all the rows in figure 30 are similar. 2) With an equal number of slots the brightness of the maxima is directly dependent on the relative width of the slots to the interspaces. For reference to figures 20, 24, 25, 26, and 29 will show that the maxima must be located on a ciirve formed by mul- tiplying the intensity curve of a Single slot by the number of slots in question, and the intensity curve of the Single slot over any given distance varies greatly according to its width. Figure 3 1 represents the intensity - curves of three series of slots A, B and C, slots B being one half, and slots C one third the width of Ä. P' Q S U s,how the Position of the chief image and maxima, and it may be seen at a glance how the narrower slots Ä tend to equalize the brightness of the first few maxima. 28 Rheinberg: Common Basis oftheTheories ofMicroscopic Vision. XIX, 1. 3) The brightness of a maximnm may be zero , if I may be allowed such a paradoxical expressiou. For suppose that the Posi- tion where a number of slots reinforce one another to form a maxinuim happens to coincide with the position of a minimum on the iutensity curve of the Single slots , then it is evident that Ave can have uo light there, and the maximum is in fact missing. This occurs when the width of the interspaces are just an even number of times as wide as the slots. In figure 24 and 22 where the interspace is twice as wide as the slot, there is a missing maxi- mum at R. 4) The number of maxima is theoretically one less than the number of wave lengths separating corresponding points in two slots. ^ Figures 32 and 33 in which the distance is 1 and 4 wave lengths 1 32. respectively, show this. It is seen that the direction of the tirst maximum in figure 32 and the 4th. maximum in figure 33 would be horizontal and in the plane of the slots themselves. Praetically we usually get less maxima, because if the distance apart equals a large number of wave lengths, the light intensity of all but the first few on each side is too small to be noticeable, moreover they may fall too near togetber for the eye or Photographie plate to resolve tliem. It has perhaps been remarked that throughout this chapter no use has yet been made of the expression „diffraction grating", only rows or series of slots having been spoken of. That has been done intentionally. A diffraction grating is nothing other than a series of slots, but it is ordinarily used in the restricted sense of a very 1) Excepting the case that any spectra should be missing, as per preceding paragraph. XIX, 1. Rheinberg: Common Basis ofthe Theories ofMicroscopic Vision. 29 large number of such slots of very small width. It would be imusual to speak of a diffratioii gratiug of 2 or 3 or 4 slots per iuch of ^/^o" or ^/oq" width. But in this chapter I have endeavoured to show the action of a plane wave front of liglit on any number of slots from two upwards , tracing the eftect of the larger number from that of the smaller, the action of the two ouly having been iirst deduced from that of a Single slot. Moreover no restriction has been implied as to width. It would be quite correct therefore, if we please, to designate all rows of slots from two upwards as diftraction gratings ; whether 2, 3, or 3000, and no matter what Avidth, we have seen that they all foUow the same law, and the action of one evolves itself from the action of the othej. I invite attention to this as it is one of those matters which have created some confusion on the subject of microscopic vision. Chapter IV. On Obliquity of Inoidence and Cones of Liglit. AaDQ.^P'DP' In the previous chapter we have considered the diffractive action of lenses and gratings when the wave front is normal to their plane like the wave front Ä in figure 34. But if the wave front fall upon the slot obliquely as shown by B it ar- rives with a difference of phase at the various points in the plane of the slot, the ditference being measured by the distance WX. The result is that the position of the Chief image and maxima get shifted to DP' and DQj the former always being perpeu- dicular to the wave front, and the first maximum such that IV X -\- J\II^ = ^ wave length. Now if the position of the iutensity curve gets shifted according to the obliquity of the incident wave front, then when we have a wave front of very many degrees of obliquity or in other words a converging cone of light, there is an overlapping of all the intensity curves and such au overlapping causes an evenly illuminated central 30 Rheinberg: Common Basis ofthe Theories ofMicroscopic Vision. XIX, 1. area , with fading off edges , whicli may or may not include the envelope of some of the overlapping rings or maxima , as ex- plained in chapter IL The experiment is easily made. Place a ruling of 500 to 1000 per centimetre on the stage, and let the light impinge on it through a narrow slot, placed in the diaphragm holder of the condenser. It is immaterial whether the condenser lenses are used or not. Then the ruling will give rise to a central Image of the narrow slot with dif- fraction spectra on each side as previously explained. These may be viewed by focussing a l" objective on the lines, removing the eye- piece and looking down the microscope tiibe. Now gra- dually widen the slot and the consequent overlapping of the spectra from each point of it caiises a cor- responding widening of the central Image and spectra tili at last they overlap and form the even illumination of surface. Figure 35 illustrates in another way how the same intensity of light arises in each direction when a slot is illuminated by a converging aplanatic cone of light. Points A, B, C etc. are taken on the grand wave front such that from each consecutive point its wave front would arrive at the two extremities of the slot with half a wave length greater difference than the preceding one, then the light pro- ceeding from Ä gives its chief Image towards äP\ first maximum towards A Q , and first minimum towards A R. The ray from B is the one representing the wave front which arrives at the two ends of the slot with just 4- wave length difterence ; it gives its chief Image at BP'^ its first maximum at B Q and first minimum 35. XIX, 1. Rheinberg: Common Basis ofthe Theories ofMicroscopic Vision. ;}1 at BR etc.^ From C the light reaches the extremities of the slot with a whole wave length difference and tlie iraages are at CP\ CQ^ CE, etc. From this we see that the amplitude in any direction, due to one point is reinforeed by the light due to certain other points, and diminished by that due to certain others. Since however there falls in the direction of e a c h of the rays of the illnminating cone, one Chief Image, one first maximum, one first minimum etc. there is always the same total resultant of light in each of these directions. As soon as we get to directions more oblique than those of the rays proceeding from the illnminating cone we still get maxima and minima formed by some of the rays interacting and producing a cer- tain resultant light, but that resultant is in every case much feebler owing to the absence of its most intense component viz.: the chief image. And as we get to more and more oblique directions fewer and fewer of the rays of the illuminating cone give rise to any etfect there, for we have already seen that the light intensity of the maxima diminishes very rapidly, and is inappreciable after the first few. So that again we see how the cone ot light converging on the slot produces on the other side of it an evenly illuminated surface of angular extension very nearly equal to itself^ surrounded by a surface of unequal luminosity. We may now note that so far as the evenly illuminated portion of the image is concerned the effect produced corresponds precisely to that which would have resulted if the slot itself were seif lumi- nous, whenever therefore, we may be dealing solely with this evenly illuminated portion, we shall be perfectly justified in treating of the action of the slot itself as being seif luminous. But if we have to deal with other portions of the cone besides, or with the latter only. ^) The word ray is here and elsewhere used simply to indicate the direction of the light, and it is to be borne in mind that we are always really dealing with wave fronts proceeding from the points on the grand wave front. But after the investigations in chapters II and III, we need not make the diagrams more complicated, by depicting these other than by Single line or „ray" nor need the action of the slot as a whole be shown other than by „rays" proceeding from its central point. -) It is not quite equal to the illuminating cone because each ray gives maxima and minima on both sides of it, and in the direction of its outermost rays, there are of course wanting in the resultant, the maxima or minima which, had there been incident rays of still greater obliquity, would have been formed by these. Moreover the illuminating cone itselt must have slightly less luminous edges for a similar reason. 32 Strehl: Strenge Theorie der Lupe. XIX, 1. then the consideration of their action must be treated diflereutly. This is an important matter, forming as it does the basis of two distinct tlieories of microscopic vision. It remains to be meutioned, that as the results demoustrated in this chapter rest ou the assumption that the slot is in the focus of a converging spherical wave front, in other words of au aplanatic lens, when this condition is deviated from, certain modifications will ensiie. [Eingegangen am 16. März 1902.] Strenge Theorie der Lupe. Von Karl Strehl in Erlangen. Hierzu ein Holzschnitt. Einem Schriftchen von M. G. Quesneville „Nouvelle theorie de la loupe" (Paris, A. Hermann 1902), mit welchem ich nicht 1 y / L "^^--^.^ ' f f : _d 1 1 f SL ^"^ V ^ '^j^'""'^ völlig übereinzustimmen vermag, verdanke ich die Anregung zu folgen- den Ausführungen. Die strenge Theorie der Lupe ist der Art ein- fach, dass es unbegreiflich erscheint, sie selten zu linden. XIX, 1. Strehl: Strenge Theorie der Lupe. 33 1. Vergrössenmy der Lupe. Aus der Figur folgt unmittelbar und augenblicklieli Sjj 3= ] : L = — d : f. Von welchem Tunkt des Auges aus man auch die Seinveite s und den Abstand e der hinteren Hauptebene der Lupe messen mag, stets ist — d = s — e-|-f=s — a, wobei a = e — f, mithin $ß = (s — e) : f 4- 1 = (s — a) : f. Hauptfälle : e ■ ii3' — + s : f + 1 Bild: aufrecht f + s : f 11 75 s -\- 1 11 11 s + f s -4- 2 f 1 1^ verkehrt (Die Messung von a ist von der hinteren Hauptebeue unabhängig.) 2. Vergrössening des Mikroskopes. Wenn f = Objectivbrennweite, f = Ocularbrennweite, p = op- tische Tubuslänge (Abstand der zugewendeten Brennpunkte), (p = Ge- sammtbrennweite ist, dann ist 99 = >-^ f f : P ; der hintere Brennpunkt des Mikroskopes (zugleich das Bild des hinteren Brennpunktes des Objectives) liegt um f '^ : p über dem hinteren Brennpunkt des Oculars ; £ beziehungsweise e = Abstand der hinteren Hauptebene des Mikro- skops beziehungsweise Oculars vom Ursprung der Sehweite ; wenn für gewöhnlich £ = 99 ist, dann ist speciell iß = s : ,p = HH (s p) : (f f ). Allgemein ist Ü? = — [(p — D) : f] • ((s — e) : f + l), wobei D ^ f - : d ^ — f ' : (s — e -f" 5 mithin iö = ^ {(s — e + f) p -|- f-} : (ff). 3. Vergrössening des Fernrohres. Sei f = Objectivbrennweite , f = Ocularbrennweite , co = Seh- winkel, 1 = Grösse des Xetzhautbildes, ^ beziehungsweise ! = vor- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XIX, 1. 3 34 Strehl: Strenge Theorie der Lupe. XIX, 1. dere bezieliungsweise hintere Knotenweite des Auges , Index 1 für Fernsicht beziehungsweise 2 für Nahesicht ; es ist 1 = f tau co und es liefert ein Objectiv von der Brennweite ^.^ ^i • ^-2 ®"^ Bild, welches für Nahesicht ein ebenso grosses (verkehrtes) Netzhautbild erzeugt, wie die Sache selbst für Fernsicht. Mithin ist die Objectivvergrösse- rung = H-( (f f^) : (^o^i)' ^^^ Ocularvergrösserung =(^o — ^) • ^ "1" 1 i e = Abstand zwischen der hinteren Hauptebene des Oculars und dem vorderen Knotenpunkt des Auges. « = - [ff fo) : (tj,)] . (ß, — e) : f + 1>. ! schwankt nach Messungen von Helmholtz zwischen 15'5 mm (Fernsicht) und 15*8 mm (Nahesicht); wenn die Sehweite U.^ = oc wird (mithin fo = f^), dann ergiebt sich « = ^ f : f . Da der Beobachter gewöhnlich nicht auf oo accommodirt, so ist dieser Grenzwerth der Fernrohrvergrösserung für den Fall, dass der vordere Knotenpunkt des Auges sich im hinteren Brennpunkt des Oculars befindet, im Verhältniss f., : f^ zu vergrössern. [Eingegangen am 9. Juni 1902.] XIX,1. Bourguet: Dispositifpenu.d'eviterl'ecrasement despreparations. 35 Nouveau dispositif permettant d'eviter l'ecrasement des pre])arations microscopiques par le fait de leur mise au ])oint prati(|uee avec les forts grossissenients. Par A. Bourguet Ti Jtontiiollier. Avec deiix gravures sur bois. Le moyen de preservation des preparations que nous allons faire connaitre , est iudependant du plus ou moius d'habilete ou d'attention des personnes qui fönt usage du microscope. II presente la menie etftcacite entre les mains des debutants et Celles des pra- ticieus experimentes , parce qu'il place automatiquement les uns et les autres dans l'impossibilite d'alterer, par une descente trop pro- noncee de l'objectif pendant la mise au point, les preparations qu'ils ont a examiner, ainsi que les leutilles frontales des objectifs et celles des eclairages condensateurs dont ils se servent. Ce moyen consiste dans l'emploi d'uu dispositif compose d'un entonnoir special pour chaque objectif fort et d'uu Systeme d'arret unique pour limiter la descente du tube du microscope. Entonnoir. On sait qu'on desigue sous ce uom la partie su- perieure de la monture d'un objectif: celle qui ne contient pas de lentilles. Les entonnoirs qui fönt partie de uotre dispositif sont destines ä remplacer les entonnoirs ordinaires des objectifs forts seulement-, ils en ditferent en ce qu'ils sont formes de deux pieces tul)ulaires mobiles rentrant l'une dans l'autre (Fig. 1), au lieii d'etre d'une seule piece fixe. La piece superieure, J., porte en haut, couime d'habitude, le pas de vis universel servant a lixer Tobjectif au revolver ou au tube du microscope; en bas, eile se retrecit en cone pour recevoir et retenir dans son inferieur l'autre piece. Celle-ci, ^, est formee de deux parties cylindriques d'inegal diametre raccordees par une 3* 36 Boiirguet: Dispositifperra. d'eviterrecrasementdespreparations. XIX, 1. partie coiiique s'emboitant exactement dans le eone de la piece pre- cedeute ; eile preseute a son extremite inferieure le pas de vis siir lequel se fixe le Systeme des leutilles objectives L. Un ressort Spiral tres faible , i?, agissant de haut eii bas et appuye , d'ime part, contre la face inferieure du diaphragme DD, d'autre part, eontre un epaulement interieur de la piece B^ maintient cette piece appliquee par sa partie conique contre la premiere, qu'elle depasse inferieurement de quelques mil- limetres (5 mm, par exemple, non compris la partie filetee). Tour empeclier la rota- tion sur lui-meme du Systeme lenticulaire qui se fixe sur la piece B et mieux assurer le maintien de sou centrale , on peut regulariser son mouve- ment vertical au moyen d'un coulisseau forme d'une petite rainure pratiquee sur l'une des deux pieces de l'entonnoir et dans laquelle s'engage une pointe fixee ä l'autre piece. L'entonnoir que nous ve^ nons de decrire s'applique aux objectifs ayant moins de 5 mm de distance frontale : il est inutile pour les autres. Son fonnctiounement est le suivant. 1. Lorsque , pendant la mise au point, l'objectif qui en est pourvu vient a appuyer sur la preparation, la pression qu'il exerce sur eile , au lien de se faire par une partie rigide qui l'ecraserait, se fait , au contraire , par une partie qui flecliit facilemeut et qui rentre dans la piece superieure de l'entonnoir au für et a mesure que l'objectif descend. Tant que dure la flexion, la preparation ne Supporte que le poids de la moitie inferieure de l'objectif et la teusion miuime du ressort qui la pousse : pression legere et insuffisaute pour l'endommager. Mais, des que la partie rentrante de l'entonnoir est arrivee a bout de course, toute flexion cesse d'etre possible et l'objectif, entierement raccourci et devenu rigide comme s'il etait XIX, 1. Bourg-uet: Dispositifpenu.(revitcrrecraseiiientdesi)r(.'"i)arations. 37 ä monture fixe, ecraserait infailliblem?nt h\ proparation sil poiivait continuer a descendre. C'est afin de prevenir eet inconvenient qu'il a ete necessaire d'adjoiudre aux objectifs a monture rentrante un Systeme d'arret imposant iine limite deterrainee a leur descente. S/jstcme d'arret. L'idee de placer un Systeme d'arret tixe pour limiter la descente des objectifs et les empeclier d'atteindre les preparations , est une idee simple qui se presente naturellement a l'esprit, mais qui est impraticable , avec les montures ordinaires, des qu'on se trouve en presence d'objectifs forts et de preparations de diverses epaisseurs.^ Force douc a ete de recourir a d'autres moyens. Dans cehii qui fait l'object de notre communication actuelle, le Systeme d'arret fixe a pu , neanmoins , etre mis a profit mais a deux conditions : celle de l'associer a des objectifs reutvants et celle d'en regier la position de maniere a ce que les microscopes qui le portent puissent permettre a la fois l'emploi de tous les objectifs Sans exception et le groupement de tous ceux d'usage courant, depuis les numeros les plus forts jusqu'aux plus faibles, en un bloc otfrant en masse la preservation automatique et , par consequent , certaine des preparations. L'arret de la descente du tube au moment oü l'objectif rentrant toucbe a la limite de sa fiexion, est une condition indispensable de la preservation certaine des preparations. Sa suppression ou son defaut de coordination avec la longueur de l'objectif et l'etendue de sa partie rentrante, entrainent necessairement l'inefficacitc' du dispo- sitif ou, du moins, iutroduisent dans la preservation des preparations des aleas incompatibles avec l'assurance complete qui peut en etre donnee lorsque l'arret a ete convenablement place. Notre Systeme d'arret consiste simplement en une vis, V (Fig. 2) appliquee sur le cöte de la cremaillere , et dont la tete , en venant ') On comprend, en effet, qu'un arret susceptible d'empeclier un ob- jectif de Vi mm, par exemple, de distance frontale, d'arriver au contact d'une preparation d'une epaisseur de 2 mm, rempecherait en meine temps de descendre assez bas pour pouvoir etre mis au point sur une autre pre- paration epaisse de 1 mm. II est indispensable pour pouvoir, avec un arret tixe, raettre alternativement au point des preparations de difterentes epaisseurs, que ces epaisseurs ne ditierent entr' elles que d'une quantite moindre que la distance frontale de l'objectif employe. Cette condition est difticilement realisee avec les objectifs forts, parce que leur distance frontale est souvent moindre de 2 ou 3 dixieraes de ram. 38 Bourguet: Dlspositifperm.creviterl'ecrasementdespreparations. XIX, 1. buter coiitre la partie siiperieure de la potence P dans laquelle la cremaillere se meut , empeche le tube et Tobjectif de desceudre au- dela de la quantite que permet ce biitage. Pour determiner pratiqiiement le point oü la vis d'arret doit etre placee, on commence par tounier la vis micrometrique jusqu'ji ce que la piec P soit entierement descendue an bas de sa course, On met eusuite eu place l'objectif le plus puissant de la serie (soit, par exemple, le ^/^^ immersion homogene) prealablement mnni dun entonnoir ayant 5 mm de partie rentrante. ^ Puis, on tourne le bouton de la cremaillere jusqn'ji ce qn'on ait amene l'extremite inferieure F de l'objectif au ni- veau de la face superienre de la platine P' P' . Le point V on la cremaillere emerge de la potence P, est le point oii il convient de placer la vis d'arret. Dans les microscopes deponr- vus de cremaillere , le Systeme d'arret (vis, bague ou virole) se fixe directement au tube ; la Posi- tion en est deterrainee par le meme procede. Lorsque la vis d'arret est en place, on remonte la vis micro- metrique de 1 ou 2 millimetres, afin de pouvoir s'en servir dans les deux sens , et le microscope est pret a fonctionner. Les montures des objectifs doivent avoir les dimensions sui- vantes : 1^' Les longueurs des montures rentrantes des objectifs forts devront etre les memes que Celles de leurs montures fixes actuelles, 2. ^) Cette quantite represente une moyenne pratique susceptible d'etre un peu augmentee ou diminuee; eile correspond ä I'epaisseur maxima des preparations qu'on desire preserver. XIX, 1. Bourguet: Dispositifperm.d'eviterl'ecrasementdesprepjirations. 39 c'est k dire , etre d'aiitant plus grandes que la distance frontale de robjectif est plus courte. 2^ L'etendue de la partie reutrante de ces montures pourra etre la nieme pour tous les objectifs rentrants ou bleu diminuer lorsque la distauce frontale augmente. 3^ Les montures des objectifs ayant plus de 5 mm de distance frontale seront des montures fixes ordinaires dont la longueur ne devra pas depasser celle de l'objectif le plus puissant diminuee de 5 mm. 4*^ Seuls, les objectifs plus ou moins speciaux ou exception- nels ne remplissant pas et ne pouvant pas etre amenes a remplir les conditions precedentes , ne sauraient permettre la preservation automatique des preparations. Mais , en aucun cas , l'arret dont se trouve pourvue la cremaillere du microscope ne saurait empecher de les mettre au point comme d'ordinaire. Au lieu de placer le Systeme rentrant ä Tobjectif lui-meme, on pourrait le placer aux branches du revolver, en ayant le soiu de toujours completer le dispositif par l'apposition d'un arret regle de la descente du corps du microscope. Mais, une teile disposition presenterait l'inconveuient d'allonger les branches du revolver d'une quantite fort appreciable ; de les rendre ainsi plus encombrantes tout en en augmentant les difticultes de centrage, et de necessiter, en outre, l'emploi d'un ressort spiral beaucoup plus fort. En sorte que, la pression exercee sur la preparation se trouvant sensiblement aug- mentee, nous ne saurions aftirmer quelle pourrait etre irapunement supportee par le contenu de toutes sortes de preparations. Quant k placer le ressort a l'extremite du tube du microscope — ainsi que cela s'est trouve realise d'une maniere fortuite et pour d'autres usages, notammeut pour obtenir une mise au point delicate a une epoque oii les vis micrometriques agissant sur la potence n'avaient pas la douceur (ju'on a pu leur donner depuis — il n'y faut point songer aujourd'hui, parce que cela entrainerait la sup- pression de l'emploi si generalise et, d'ailleurs, si commode du revolver, ou bien creerait pour la preparation une surcharge de pression equivalente au poids de ce dernier Instrument et des deux ou trois objectifs quil porte en reserve. Du reste, meme en sup- primant le revolver, on se trouverait, en ce qui concerne la pression, dans le meme cas que pour le ressort applique k ses branches. L'action preservatrice resultant de l'emploi des objectifs rentrants et ä descente reglee, assez facile d'ailleurs a prevoir theoriquement. 40 Bourguet: Dispositifpcrm. d'eviterrecrasementdespreparations. XIX, 1. a ete verifiee par nous au moyen dime experimeiitatiou pratique. Noiis avons fait constriiire, a cet etFet, im objectif fort k monture rentraute ; nous avons, en outre, adapte a notre microscope nn Systeme d'arret regle conime il a ete dit plus haut , et nous avons fait fouetionner le dispositif pendant une semaine en lieurtant frequemment, a dessein, l'objectif contre les preparations et en l'abaissant sur elles autant que le permettait la vis d'arret. Nous avons pu, de la sorte, nous assurer: a) Qu'aucune des preparations en experience n'a souffert de ces legers chocs, bien qu'un grand nombre d'entr'elles fussent assez delicates (preparations de tissu nerveux central) ; b) Que le centrage de Tobjectif s'est rigoiireusemeut conserve malgre les mouvements d'ascension et de descente des lentilles, les objets examines ayant, en etfet, contiuue ä occuper, apres ces mouve- ments, les memes points du cliamp visuel qu'avant ; c) Que la certitude de conserver intactes les preparations malgre Tabsence de precautions dans la vitesse et dans Tetendue du mouve- ment de descente de l'objectif, donne, dans l'execution de la mise au point ä de forts grossissements, une assurance qui la rend un peu plus rapide et qu'on u'est generalement pas habitue a avoir dans ces circonstances. Tel est notre dispositif: il se recommande par une grande simplicite d'execution ; il n'introduit aucuu changement dans les con- ditions optiques des objectifs ni dans la maniere de les mettre au point, qu'il facilite plutot; et il degage entierement l'esprit du micro- grapLe de toute preoccupation au sujet de la deterioration possible des preparations qu'il examine — ou qu'il conlie autour de lui pour etre examinees — , par le fait de leur mise au point avec les forts grossissements. [Eingegangen am 30. Juni 1902.] XIX, 1. Porsild: Ueber einen neuen doppelgelenkigen Tubushalter. 41 lieber einen neuen doppelgelenkigen Tubuslialter. Von aiorteu P. Porsild 31. Sc, Kopenhagen, Botanisches Museum. Hierzu zwei Holzschnitte. Für den ^likroskopiker , speciell für Biologen und Physiologen, stellt sich manchmal das Bedürfniss ein, Naturgegenstände, die nicht zerkleinert werden dürfen, unter einer stärkeren Vergrösserung zu betrachten, als es die gewöhnlichen Lupen erlauben. Es handele sich z. B. um die Untersuchung von Museurasgegeuständen, wie feine Krystalldrusen , Epiph^-ten oder Parasiten auf HerbarpHauzen, von Lebermoosen auf tropischen Laubblättern oder Bryozoen auf Meeres- algen, wo Vergrösserungen von 100- bis 300 mal dem Special- forscher meistens genügen werden , um die Arten zu erkennen , so dass er sehen kann , ob er das Material für seine nähere Unter- suchung überhaupt anzugreifen braucht. Oder man möchte das Ver- halten der Blätter und Fortpflanzungsorgaue eines iutacten Moos- polsters, etwa bei verschiedenen Feuclitigkeitsgraden untersuchen, luuss aber ein Herauspräpariren vermeiden , weil dadurch eben die zu studirenden Verhältnisse gestört w^erden. Endlich sei die P^ntwick- lung von Pilzculturen in grossen Culturgläsern oder solche, die auf lebende Topfpflanzen geimpft wurden, genau zu verfolgen, die Wachs- thumsgeschwindigkeit einer Pilzhyphe festzustellen, der genaue Stand einer Wasser- oder Quecksilbersäule abzulesen etc. Auf dergleichen Untersuchungen musste aber verzichtet werden, sofern man nicht über ein Ablesemikroskop oder eins der sogenannten „Aquarium"- Mikroskope verfügte. Li Folge der beschränkten An- wendung dieser Listrumente — denn je mehr sie dem speciellen Zwecke angepasst wurden, desto unbrauchbarer wurden sie natur- geniäss für andere — und in Folge ihres dabei recht hohen Preises wird mancher Privatmann ihre Anschaft'ung scheuen, während ihm ein gewöhnliches Lupen- oder Präparir - Mikroskop ein nothwendiges Zubehör zu seinem Hauptmikroskope erscheint. Durch eine sehr einfache Vorrichtung, die ich mir in der Werk- stätte des Herrn E. Leitz in Wetzlar ausführen liess, habe ich nun 42 Porsild: lieber einen neuen doppelgelenkigen Tubushalter. XIX, 1. mein Präparir- Mikroskop (das LEiTz'sclie „grosse Lupen -Mikroskop" zu 40 Mark) zu allen dergleichen Uutersueliungen geeignet gemacht, und da diese Vorrichtung wahrscheinlich auch Anderen von Nutzen sein dürfte, erlaube ich mir, hier eine kurze Beschreibung derselben zu geben. Es wurde ein d o p p e 1 g e 1 e n k i g e r T u b u s h a 1 1 e r (vgl. Figur 1, 2) hergestellt, dessen oberes Ende wie das eines jeden anderen aussieht; eine doppelte Triebsehraube bewegt, auf eine Zahnstange mit schrägen Zähnen wirkend, den Tubus mit dem optischen Apparat. 1. In der Nähe des unteren Endes ist der Halter mit einem K i p p - gelenk versehen, das eine Umlegung des Tubus um genau 90 '^ zulässt, so dass also hierbei die Achse des Tubus mit der Ober- fläche des Objecttisches parallel wird. Darunter ist wieder ein Drehgelenk, durch welches der Tubus sieh nach allen Seiten drehen lässt (Figur 2). Das Ganze endet unten mit einer dreikan- tigen Zahnstange, die in die Säule des Lupenmikroskops hineinpasst, nachdem der gewöhnliche Lupenhalter herausgenommen ist. Ich erhielt also hierdurch : 1 ) Ein Ablese mikroskop, das den meisten Fällen voll- kommen Genüge leisten wird. Die untere Schraube hebt und senkt XIX, 1. Porsild: Ueber einen neuen doppelgelenkigeii Tubusliulter. 43 den ganzen optischen Apparat, die obere besorgt die Einstellung. Im gewöhnlichen Mikrometerocular hat man eine Theilung, die nach Belieben wagerecht oder senkrecht zum Gesichtsfeld orientirt werden kann. Durch den Auszug des Tubus wird die Vergrösserung ge- regelt, so dass man lästige Zahlen wie z. B. 13, 17, 19 vermeidet. Beispielsweise fällt 1 mm bei eingeschobenem Tubus mit 11, bei ausgezogenem mit 21 Theilstrichen des Mikrometers der Combination Ocular II Objectiv 1* zusammen. Eine Verbesserung wäre noch eine Millimetertheihmg an der Zahnstange. Eine Zugabe von Stell- schrauben am Fuss und von einer Röhrenlibelle am Tubus wäre ja auch möglich , dürfte aber für die meisten Zwecke kaum nothwen- dig sein. 2) Ein Aquarium - Mikroskop. Zum directen Anvisiren eignet sich diese Combination in ausgezeichnetem Grade , indem sie sehr leicht beweglich und verstellbar ist. Natürlich verlangen die Gegenstände bei den stärkeren Vergrösserungen eine gute auffallende Beleuchtung; will man in tiefe dunkele Moospolster hineinsehen, so leistet der Vertical-IUuminator, über dem Objectiv eingeschaltet, gute Dienste. Nach meiner Erfahrung ist derselbe aber nur selten noth- wendig. Eine Aveitere Verbesserung wäre hier die Zugabe eines 3 bis 4 cm langen Zwischenstückes am Objectivende des Tubus. Der LEiTz'sche Tubus ist nämlich zusammengeschoben sehr kurz, und der ganze Apparat muss daher bei den stärkeren Vergrösse- rungen dem Objecte ziemlich nahe stehen. Der Auszug lässt sich bei den Ablesungen nicht entbehren, und die Anwendung von Ob- jectiven mit sehr grossen Object-Abständeu ist nicht unbedingt an- zurathen, weil sie dann im Revolver des Ilauptmikroskops eine neue grobe Einstellung für jeden Objectivwechsel erfordern. 3) Ein Hülfs- und Pr äp ar ir - Mikr skop. Nachdem der Tubus in die verticale Stellung gebracht und über den Object- tisch hineingedreht ist, wird die gesammte Combination zu einem gewöhnlichen Mikroskop , das freilich einer feinen Einstellung ent- behrt. Bei Vergrösserungen von 200- bis 300 mal ist diese aber nicht nothwendig, und für stärkere Vergrösserungen, etwa 40<> oder 500, Hesse sich immerhin eine Feineinstellung in Form eines Zwischen- stückes anbringen. Natürlich kann der Tubus mit verschiedenen Nebenapparaten, wie Revolver und Zeichen-Apparaten versehen wer- den. Für das Präpariren ist das l)ildumkehrende Prisma wohl un- entbehrlich. Die Gelenke des Tubushahers zeigen sich auch hier nützlich , da der Objecttisch des LEixz'schen Lupenmikroskops aus 44 Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. XIX 1. einer Spiegelglasplatte bestellt. Bei der Herstellung von Plauktou- präparateu z. B. kann man also hier den Tisch direct als Träger der Ubjecte verwenden und mit dem beweglichen Tubus den ganzen Objecttisch absuchen. Mit dem gewöhnliclien Lupenhalter läs»t sich der neue Tubushalter leicht und schnell auswechseln. Die mechanische Ausfiilirung des mir gelieferten Apparates, besonders der beiden Gelenke, auf die es am meisten ankommt, ist eine äusserst sorgfältige und solide, und die Gelenke scheinen sehr dauerhaft zu sein. Der Preis des Tubushalters mit Tubus be- trägt 30 Mark. [Eingegangen am 2Ü. März 1902.] [Aus dem Anatomischen Institut zu Tübingen.] lieber einen Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte von oben und von unten. Von Dr. Friedrich W. Müller, II. Prosector in Tübingen. Hierzu sieben Holzschnitte. Die Photographie mit auffallendem Lichte hat in den letzten Jahren bei der Bearbeitung entwicklungsgeschichtlicher und ähnlicher Fragen eine immer weiter gehende Verwendung gefunden. Photo- gramme bilden jetzt einen wesentlichen Bestandtheil der Arbeits- protokolle und sind als Grundlagen für Zeichnungen geradezu un- entbehrlich geworden. Die Photographie bringt Helligkeits- und Trausparenzunterschiede heraus, die man bisweilen erst nach voll- ständiger Durcharbeitung des Objects entdeckt; ja solche, die für unser Auge überhaupt nicht wahrnehmbar und doch wichtig sind. Wenn auch die Kunst des Photographirens derartiger Objecte — dass es eine Kunst ist, weiss Jeder, der sich damit befasst XIX, 1. Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. 45 hat — noch nicht allgemein verbreitet ist, so gewinnt sie doch, wie die Publicationen beweisen, immer mehr Anhänger. Manche der be- treffenden Aufnahmen sind aber mit Apparaten gemacht, die dem heutigen Stande der Technik nicht mehr entsprechen. Und das hat seinen guten Grund ; denn es giebt augenblicklich keinen Apparat im Plandel, der für die Photographie mit auffallendem Lichte wirk- lich geeignet und praktisch wäre. Aus diesem Grunde will ich im Folgenden den von mir zusammen- gestellten Apparat veröffentlichen, nicht als ob ich denselben für die einzige oder die vollkommenste Lösung der Aufgabe hielte , sondern veranlasst durch diesbezügliche an mich gerichtete Anfragen , und überzeugt, dass durch Mittheilung jede Methode nur gewinnen kann. Wohl die meisten Aufnahmen wurden bisher mit dem grossen ZEiss'scheu Apparat für Mikrophotographie gemacht. Die einzige Einrichtung, die sich für unseren Zweck daran befand, war die der Senkrechtstellung des vorderen, conischen Balgtheiles, der dann von einer beweglichen feststellbaren Stange gehalten wurde. Diese Vor- riclitung hat sich so wenig bewährt , dass die Firma Zeiss sie an den neueren Apparaten nicht mehr anbringt. Die Stabilität war wegen der Hölie des aufgestellten Balges und der geringen ünter- stützungsfläche so schlecht , dass ein erspriessliches Arbeiten damit unmöglich war. Seitdem hat der ZEiss'sche Apparat keine besonderen Einrich- tungen für Photographie mit auffallendem Licht, und doch wird diese wohl mehr gebraucht als die Photographie von Schnitten. Wer nun opake Präparate in Flüssigkeit photographiren wollte, musste sich selbst helfen, und dies geschah meist so, dass man den ganzen Apparat, Balg und Mikroskop senkrecht stellte , so dass der Tisch des Mikroskops wagerecht stand. Dass die Einstellung dabei nicht bequem ist, zumal wenn man im Interesse der Tiefenzeichnung mit langem Balg und schwachem System arbeitet, ist leiclit einzu- sehen 5 wie aufreibend und zeitraubend diese Arbeit aber ist , kann nur Der ermessen, der sie selbst gethan hat. Dabei ist die Stabilität keineswegs gut, und es kann vorkommen, dass man nach langem, mühevollem Einstellen doch trotz der grössten Vorsicht Doppelbilder bekommt. Diese Erfahrungen hatte ich in der Zeit gesammelt, als ich in Berlin bei Herrn Prof. H. Virchow im Laboratorium arbeitete ; als ich dann nach Tübingen kam, wo die Abtheilung für Photographie neu eingerichtet werden sollte , kam mir der Gedanke , diese ganze 46 Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. XIX, 1. unbequeme Anordnung fallen zu lassen und das gewünschte Resnltat auf andere Weiße zu erreiclieu. Inzwischen waren die optischen Werkstätten nicht unthätig ge- wesen; wenn sie auch keinen vollständigen Apparat brachten, so wurden doch von Zeiss die Mikroplanare und von Leitz die photo- graphischen Objective für schwächere Vergrösserungen eingeführt. Namentlich die ersteren sind für die Entwicklung der Photographie von grösster Bedeutung geworden und sie habe ich in erster Linie berücksichtigt. Sie zeichnen sich aus durch grosse Tiefenzeichnung, Aveites Gesichtsfeld und grosse Lichtstärke und sind deshalb gerade für das schwächere , von opaken Objecten reflectirte Licht mit be- sonderem Vortheil verwendbar. Alle Apparate , welche für den gedachten Zweck bisher con- struirt wurden, haben sich nicht einbürgern können. Es war auch nicht gut möglich, dass die Technik an diese Aufgabe herantrat, Aveil die speciellen Aufgaben dieses Zweiges der Photographie so eigenartige sind, dass nur Derjenige sie vollkommen würdigen kann, der lange Zeit sich eingehend damit beschäftigt hat. Vom theore- tischen Standpunkte allein ist hier nichts zu machen, die Praxis muss die Brauchbarkeit beweisen. Ich ging bei der Construction meines Apparates davon aus, dass die Tischplatte horizontal stehen und die Unbequemlichkeit der senk- rechten Stellung des Balges vermieden werden muss. Diese Aufgabe habe ich zu lösen versucht durch Einschaltung eines spiegelnden Prismas , wie wir solche an zahlreiclien Zeichenapparaten , auch an dem viel benutzten AßBE'schen haben, und dadurch einen Weg zur Erreichung des gesteckten Ziels betreten. Ich liatte die grosse Freude, dass mein hochverehrter Chef, Herr Professor Froriep auf meine Gedanken und Wünsche fördernd ein- ging und sie durch Gewährung der nöthigen Mittel zur Ausführung kommen Hess. Die Aufgabe , für welche der Apparat geeignet sein muss , ist, kurz gesagt, die, opake Objecte bei auffallendem Lichte von oben und unten und durchsichtige bei durchfallendem Lichte photo- graphiren zu können. Die häufigste Anwendung wird er finden für Objecte , die später zur Verarbeitung kon^men und in Flüssigkeit liegen. Gerade dieses dichtere Medium ist es, welches ein Schwanken oder Wackeln der Objecte während der Aufnahme ungemein be- günstigt. Das Gewicht des Objectes ist relativ kleiner, als in der Luft und die Erschütterungswellen der Flüssigkeit können viel stärker XIX, 1. Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. 47 wirken. Der geringere Gewichtsunterschied bedingt schon an und für sich, dass die Objecte weniger leicht in einer bestimmten Stellung zu halten sind. Hat man längliche Objecte, die von der einen Spitze gesehen werden sollen , also auf der anderen ruhen müssen , so ist die Aufstellung selbst ohne jede zufällige Erschütterung eine äusserst mühselige Arbeit , welche manchmal erst nach langem Probiren ge- lingt. Jede Erschütterung eines derartig aufgestellten Objects muss vei'mieden werden, weil man sonst von vorn anfangen muss. Diese Erörterungen führen zu dem wichtigsten Punkt, der für die ganze Coustruction unliedingt maassgebend ist: Die Vor- richtung zur feineren Einstellung darf sich nicht am Stativ befinden. Jeder Apparat, bei dem dieser Punkt nicht beachtet ist , wird die oben gestellte Aufgabe nicht erfüllen können, weil bei der Einstellung Erschütterungen unvermeidlich sind. Die Einstellungsvorrichtung wird also an dem vom Stativ ge- trennten Balge anzubringen sein und zwar wird sie zweckmässig mit dem Objectivträger verbunden. Bei meinem Apparate findet sieh folgende Anordnung : Auf dem viereckigen Tische, der die optische Bank trägt, steht das Stativ mit genau horizontal stehendem Objecttisch. Das Object kann ohne Avei- teres von allen Seiten beleuchtet werden, auch von unten her. Darüber oder darunter befindet sich das gleichschenklig - rechtwinklige Prisma, dessen retiectirende Fläche genau im Winkel von 45 ^ steht. Von dieser ganzen Einrichtung unabhängig ist der Balg, welcher nach der bekannten ZEiss'schen Anordmmg auf seinem Fussgestell an das Prisma herangeschoben imd davon entfernt werden kann, wodurch die grobe Einstellung bewirkt wird. An dem so bewegUchen Balg habe ich nun vorn den Objectivtubus angebracht, der durch Zahn und Trieb verstellt werden kann; dies ist die Feineinstellung. Das Prisma steht also zwischen Object und Objectiv, wie es z. B. auch bei den Keproductionsobjectiven mit Bildumkehrung steht. Diese Stellung ist für meinen Apparat von besonderer Wichtigkeit, weil dieser dank derselben so ausserordentlich einfach sein kann. Die andere Möglichkeit wäre die, das Prisma zwischen Objectiv und Cassette anzubringen ; hierdurch würde aber der Mechanismus sehr viel schwieriger. Ich bin bei der ersteren Anordnung geblieben trotz theoretischer Bedenken, die man dagegen etwa erheben könnte, weil ich beim Photographiren von Maassstäben und anderen Controlbildern keine Art von Verzeichnung habe nachweisen können, und meine, dass doch das Ergebniss und nicht die Voraussetzung entscheidet. 48 Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. XIX, 1. Ich lasse nun die genaue Beschreibung des Apparates folgen unter Beifügung der Constructionszeichnungen und beginne mit dem Objectivtubus am Balg (Figur 1). An dem Fussstück des Holzrahmens , der das vordere , engere Ende des conischen Balgtheils trägt, ist eine Führung (F) ange- schraubt, welche ein Triebrädchen {Tr) mit schiefgestellten Zähnen enthält. In der Einne dieser Führung gleitet ein Schlitten (vgl. Figuren 6 und 7), der unten mit einer Zahnstange mit schräggestellten Zähnen versehen ist. Auf diesem Schlitten ist mit Hülfe eines Zapfens ein cylindrischer Lichtverschluss (L) befestigt , in dessen innerer Hülse der verschiebbare Objectivtubus (T) sitzt. In den Tubus ist das Gewinde für das grösste Objectiv, das man zu benutzen wünscht, eingeschnitten. Das grösste Mikroplanar hat die Brennweite 100 mm, das zweite 7ö mm. Es kommt nun ganz auf die Grösse und auf die Tiefe des Objectes an, ob man sich für das eine oder andere XIX, 1. ]\[üller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. 49 eutscheidet. Ich benutze ausschliesslich die Mikroplanare von 75, 50 und 85 mm, bisweilen mag aber die Verwendung des Mikroplanars von 100 mm besondere Vorzüge haben. Die Zeichnung ist für das Mikroplanar von 75 mm angegeben, der Objectivtubus kann aber natürlich auch weiter sein, so dass er für das grösste passt ; durch Zwischenringe können alle kleineren Systeme angebracht werden. 2. Die Achse des Triebrädchens {Tr) ist nach der einen Seite zu verlängert und entweder mit einem HooKE'schen Schlüssel in Ver- bindung gebracht oder mit einer Holzscheibe versehen, in deren Nuthe ein endloser Bindfaden läuft. Die Grobeinstellung wird dadurch bewirkt, dass man nach Lage- rung des Objects und Regulirung der Beleuchtung den vorher zurück- geschobenen Balg so weit heranbringt, dass bei geöffneter Blende das fjild auf der Mattscheibe scharf erscheint. Dann wird Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XIX, 1. 4 o 50 Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. XIX, 1. die Stellung- des Balges lixirt, die Einstellscheibe eingesetzt ; naclideni abgeblendet ist , werden mit Hülfe der gescliilderten Feineinstellung am Objectivtubus die Einzelheiten des Objects genau eingestellt. Bei sorgfältiger Ausführung der groben Einstellung wird der Objectiv- tubus bei der Feineinstellnng so wenig (um Theile eines Millimeters) bewegt, dass die Vergrösserung nicht messbar beeinÜusst wird. Der Tisch des ZEiss'schen Apparates , welcher die optische Bank trägt, ist im Laufe der Zeit wesentlich verändert worden. Bei der älteren Construction reicht die Bank nicht über den ganzen Tisch hinweg , sondern die Stelle , auf der das Mikroskop steht , ist ein- genommen durch eine Holzplatte mit zwei Nntlien nnd einer runden Vertiefung. Auf diesen drei Punkten ruhen die Fussschrauben einer Eisenplatte, auf welcher das Mikroskop festgeschraubt ist. Bei den neueren Tischen geht die optische Bank l)is an das Tischende, und das Mikroskop steht auf einer besonderen , seitlich verschiebbaren Platte. Da nun viele Institute, wie auch das hiesige, noch im Besitze der älteren Einrichtung sind, ist der Fuss des Stativs so construirt, dass er sich bei allen Tischformen anbringen lässt. Die Fussschrauben resp. Stifte stehen so , dass sie genau in die Nuthen resp. Vertiefungen der erAvähnten Holzplatte passen. Wo eine solche nicht vorhanden ist, kann sie leicht beschafft und be- festigt werden, eventuell auf der optischen Bank. Das Stativ besitzt einen schweren dreischenkligen Fuss (D), der sich hinten auf einen festen Stift (C', Figur 3), vorn auf zwei Schrauben (S) stützt. Im Treffpunkte der drei Schenkel ist eine dreiseitige Führungsstange (St) verschraubt, die hinten eine Leiste mit schrägen Zähnen und auf der einen Vorderfläche eine Centimeter- Eintheilung trägt. Oben ist die Stange einfach abgeschnitten. Auf dieser Führungsstange lassen sich Objecttisch und Prismen- träger verschieben und leicht über das obere Ende der Stange abheben. Der Objecttisch ist an einem Schlitten befestigt, den man durch ein Triebrad an der Stativstange entlang bewegen kann. Er ist in unserem Falle durch Schrauben beweglich und ausserdem drehbar. Das ist nicht unbedingt niUhig ; die Einstellung kann mit der Hand geschehen, uiul bei einiger Uebung in dergleichen Dingen wird man leicht auf eine mechanische Centrirung verzichten können. Die Platte besteht aus geschwärztem Messing und muss eine sehr grosse Oetf- nung haben, damit beim Photographiren von unten her möglichst viel XIX, 1. Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. 51 Licht auf das Object coucentrirt werden kann, ^lit Vortlieil kann auch ein Tisch aus Spiegelglas eventuell mit aufgekitteteni breiten 3. Rande verwendet werden, so dass man ihn gleicli als Schale zur Aufnahme des Objects benutzen kann. Der Spiegel (Sp) zur Be- 4* 52 Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. XIX, 1. leuchtung von unten hei* lässt sicli am Tiscli selbst anbringen oder mit Hülfe einer Klammer am Stativ. Der Prismenträger (Ft) lässt sich wie der Objecttisch an einem Sehlitten mit Triebrad auf der Stativstange bewegen, oder er besitzt eine Klammer zur Befestigung an der Stativstange, da er nicht viel verschoben , sondern nur in die Höhe der optischen Achse gebracht wird. Der Prismenträger läuft in eine Gabel aus, in deren Enden die Bohrungen für die Bewegungsachse des Prismas liegen. fflWItllllPlIITTiPJ^ 5. Das Prisma muss genau gleichschenklig-rechtwinklig geschliffen sein ; seine Grösse richtet sich nach der der Vorderlinse des grössten verwendeten Objectivs und braucht nur ganz wenig grösser zu sein, als deren Durchmesser, da man das Objectiv bis unmittelbar an das Prisma heranbewegeu kann. Die Hypotenusentläche hat der besseren Reflexion wegen einen Silberbelag. Zum Schutze und zur Montirung ist das Prisma in einer Metallfassung befestigt, welche nur die beiden Kathetenflächen freilässt. Das Prisma mit seiner Metallfassung ist in der Gabel des Prismenträgers um eine horizontale Achse drehbar, welche durch die Mitte der reflectirenden Fläche des Prismas geht. Die Bewegung, welche durch den Schraubenkopf (A') übertragen XIX, 1. Müller: Ein Apparat zur Photographie mit auffallendem Lichte. 53 wird, ist beschränkt durch zwei Stellschrauben Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 307. 70 Keferate. XIX, 1. Rand vorragt. Färbedauer bei Zimmertemperatur (am Ort der Aus- führung- in Deutsch -Ostafrika 27 '^ C.) etwa 10 Minuten. Erst nacli 20 Minuten hinger Färbung treten störende Niederschläge auf. Ditfe- renzirung der gefärbten Präparate in schwach saurem Alkohol (ein Tropfen Essigsäure auf 50 cc Alkohol) bis die Präparate einen rotheu oder grau violetten Ton angenommen haben, Trocknen mit Fliesspapier. Das Protoplasma der Parasiten färbt sich tiefblau, das Chromatin leuchtend roth. Die ganze Procedur von der Blut- entnahme bis zur Fertigstellung des Präparats dauert etwa 20 bis 25 Minuten. Die Methode eignet sich auch für Pirosoma bigeminum, nicht aber für Halteridium und Proteosoma. Die einfache Methylen- blaufärbung kann in Bezug auf die Darstellung des feineren Baues der Plasmodien mit der specitischen Färbung natürlich nicht con- curriren , aber auch für diagnostische Zwecke ist die Chromatin- färbung, namentlich für ungeübte Untersucher bei spärlichem Vor- kommen von Plasmodien, zu empfehlen. Friedbergcr {Königsberg). Hiutze, R., Lebensweise und Entwicklung von L a n k e - sterella minima (Ch aussät) (Zool. .Tahrb., Abth. f. Anat. u. Ontogen. Bd. XV, 1902, p. 693 — 7:30 m. 1 TU.). Den inficirten Fröschen wurde aus einem Blutgefäss des Hinter- schenkels (Poplitea , Tibialis posterior) durch einen Nadelstich ein Tröpfchen Blut abgezapft, dasselbe auf ein Deckgläschen gebracht und mit diesem auf einen Objectträger. P>gab die mikroskopische Prüfung das Vorhandensein von Laukesterella, so wurde das Deck- gläschen mit Paraflin umrandet, um das Eintrocknen des Blutes zu verhindern. So konnten die lebenden Hämosporidien bis zu 24 Stun- den aufbewahrt werden. Die Schwierigkeiten, die FortpHanzung im Leben zu verfolgen, sind recht erheblich, da in den Präparaten die Entwicklung der einzelnen Stadien nicht fortschreitet. Auch das kreisende periphere Blut enthält nur wenig Entwicklungsstadien. Man ist also mehr oder minder auf die richtige Combination der ver- schiedenen Stadien aus gefärbten Dauerpräparaten angewiesen. Die- selben wurden in folgender Weise angefertigt : Der Frosch, bei welchem die Probeuntersuchung das Vorhandensein von Lankesterellen ergeben hatte , wurde durch Chloroform getödtet ; dann wurde das für die Probe angestochene Gefäss frei gelegt und ein Blutstropfen auf ein Deckglä sehen ausgepresst. Auf dieses Deckgläschen Avurde ein zweites gelegt und beide vorsichtig von einander abgezogen. Die weitere Behandlung der Präparate war verschieden. Entweder wurden sie, XIX, 1. Referate. 71 wenn lufttrocken geworden, in bekannter Weise dreimal durch die Buusenbreunerflamine gezogen und dann in verschiedener Art con- servirt, oder sie wurden frisch nach der Methode von Ehrlich auf einer erhitzten Kupferplatte hei etwa 100*^ C. getrocknet und dann in Formolalkoliol conservirt. Nach einer dritten Methode wurden mit Vortheil hauptsächlich die Ausstriche von Milz, Leber, Darminhalt behandelt. Die frischen Präparate wurden, ohne vorheriges Trocknen, in eine erwärmte Mischung von 2 Th. gesättigter wässeriger Sublimat- lösuug und 1 Th. absoluten Alkohol gebracht. Die so fixirten Aus- striche wurden dann mit Jodalkohol ausgewaschen und weiter behandelt. Von den verschiedensten in Anwendung gebrachten Farbstofien gab Verf. schliesslich dem GREXACHER'schen Hämatox34in den Vorzug. Es eignet sich zur Färbung aller Stadien gleich gut. Es färbt die Chromatintheile des Kernes und die chromatoiden Granula tief dunkel- violett, das Plasma dagegen hell violett, manchmal fast himmelblau. Das Stroma der Blutkörperchen wird fast gar nicht gefärbt, so dass die Lankesterellen sehr deutlich zu erkennen sind. In stark ver- dünnten Hämatoxylinlösungen blieben die Präparate 8 bis 16 Stunden, in unverdünnter Lösung weniger lange. Beide Arten der Färbung ergaben annähernd gleiche Resultate. Auch EHRLicn'sches Hämat- oxylin gab befriedigende Resultate. In mehreren Fällen erwies sich Jodhämatoxylin als vortheilhaft, besonders bei Entwicklungsstadien, die kurz vor der Vermehrung standen. Die im Entoplasma auf- gehäuften plastischen Granula werden gelb gefärbt, die chromatoiden dagegen dunkelviolett. Ausser Hämatoxylin kam noch öfters Methylen- blau in gesättigter wässeriger Lösung zur Verwendung. Die Färbungs- resultate sind denen mit Hämatoxylin ähnlich, nur ist die Kernfärbung weniger distinct. Nach dem Herausnehmen aus den Farblösungen wurden die Präparate mit schwach ammoniakalischem Wasser ab- gespült, dann durch die verschiedengrädigen Alkohole in absoluten Alkohol übergeführt und in Canadabalsam eingeschlossen. E. Schoehel (Neapel). Frieclemauu, 0., Untersuchungen über die postembryo- n a 1 e E n t w i c k 1 u n g v o n A u r e 1 i a a u r i t a (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXI, 1902, p. 227—207 m. 3 Figg. u. 2 Tfln.). Die Larven wurden sowohl lebend wie conservirt untersucht. Für letzteren Zweck geschah die Tödtung und Fixirung in Sublimat- Seewasser (7procentig) mit oder ohne Zusatz von 2 Procent Essig- 72 Referate. XIX, 1. säure. Um tadellos ausgestreckte Thiere zu bekommen, ist es nöthig zu uarkotisiren. Dies geschiebt am besten, indem man einige Tropfen einer concentrirten Cbloralbydratlösung dem Seewasser, in dem sich die Thiere befinden , zusetzt , und dies eine bis 5 Stunden wirken lässt. Zur Färbung vor der Einbettung diente meist Alauncarmin, zur Sclinittfärbung llämatoxylin combinirt mit Orange G. E. Schoehel {Neapel). Hartmailll, M., Studien am thierischen Ei. I. Ovarialei u n d E i r e i f u n g v o n A s t e r i a s g 1 a c i a 1 i s (Zool. Jahrb. Abth. f. Anat. u, Ontogen. Bd. XV, 1902, p. 793—812 m. 2 Tfln.). Die Ovarialeier wurden mit HERiiANN'scher , FLEMMiNG'scher Flüssigkeit und vor allem mit Essigsäure-Sublimat (5 Procent Eisessig) und Pikrinessigsäure fixirt ; die Eireifungsstadien, tlieils mit Sublimat, theils Pikrinessigsäure. Gefärbt Avurde mit Berlinerblau nach List, mit Heidenhaix's Hämatoxylin nach Vorfärbung mit Carmin und schliesslich mit Delafield's Hämatoxylin. Die von Obst angegebene Methode mit Methylgrün und Carmin , erwies sich als unzuverlässig, indem sie je nach der Dauer der Einwirkung verschieden wirkte und ausserdem feine Structuren leicht verdeckte. E. Schoebel (Neapel). Tischler, Gr., U e b e r II e t e r o d e r a - G alle n a n d e n W u r z e 1 n von Circaea lutetiana L. (Ber. d. Deutschen Botau. Gesellsch. Bd. XIX, 1901, Generalversamml.-H. p. [95]). Bei Untersuchung von Heterodera- Gallen empfiehlt sich die Färbung der Schnitte mit FLEMMiNG'schem Dreifarbengemisch, da seine Anwendung die Unterscheidung zwischen thieriscliem und pfianz- lichem Gewebe erleichtern hilft. Im Anfange nehmen die Würmer mehr Safranin, in älteren Stadien mehr Orangegelb auf als die pflanzlichen Zellen. Beim Studium der Wandverdickungsvorgänge standen neben demselben Färbeverfahren noch weitere Methoden zur Verfügung : Die Thatsache , dass bei Alkoholfixirung zuweilen ein theilweises Zurückziehen des Plasmas von der Wand eintritt, Plas- molyse durch Salpeterlösung in lebenden Zellen und drittens Behand- lung mit jAVELLE'scher Lauge. Das letztgenannte Verfahren gab die besten Resultate. j^^^^^^,. (jj^^jf^ ^,_ s.). XIX, 1. Referate. 73 Goldscliinidt , R . , U n t e r s u c h u n g- e n über die E i r e i f u n g , B e f r u (• li t u n g- und Z e 1 1 1 li e i 1 u n g bei P o 1 y s t < > in u in int ege r r i m u m Riul. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXI, 1902, p. 397—444 m. 3 Ttln.). Die Eier sind leicht in grossen Mengen zu haben, nur ist man an eine bestimmte Jahreszeit, das zeitige Frühjahr, gebunden. Die inficirten Frösclie wurden im warmen Zimmer in grossen Gläsern gehalten , deren Boden etwa 2 cm hoch mit Wasser bedeckt war. In bestimmten Intervallen wurde das Wasser abgegossen und die Eier mit der Pipette in Uhrschälchen übertragen, in denen sie zur Weiterentwicklung in die feuchte Kammer gestellt wurden. Das Ab- tödten der Eier auf dem gewünschten Entwicklungsstadium geschah durch kochendes Wasser, dem nach schneller Abkühlung Alkohol- essigsäure (4 Th. 95procentiger Alkohol, 1 Th. 4oprocentige Essig- säure) als Fixativ zugesetzt wurde. Nach Auswaschen mit 50pro- centigem Alkohol wurde das Material langsam von 5 zu 5 Procent in stärkeren Alkohol und dann ebenfalls langsam in das als Vor- medium für die Paraftineinbettung dienende Xylol übergeführt. Nicht immer gelingt es, auch bei Anwendung der grössten Vorsicht, die verschiedenen Proceduren so zu leiten , dass brauchbare Präparate resultiren. Bisweilen geht die ParafHndurchtränkung ohne jede Schwierigkeit vor sich, manchmal wird aber das Paraffin-Xylolgemisch selbst bei mehrtägigem Verweilen in reinem Paraflin nicht durch dieses verdrängt. Dass längerer Aufenthalt in starkem Alkohol Ei- schalen zuweilen undurchlässig macht ist bekannt, aber im vorliegenden Falle gab auch eine thunlichst schnelle Behandlung keinen sicheren Erfolg. Die Schnitte, bei deren Herstellung mitVortheil die HEiDER'sche Collodiummastixlösung angewandt wurde, um das Herausbrechen der Eier aus dem Paraffin zu verhindern, wurden meist mit Delafield's Hämatoxylin, ferner mit Hämatoxylin- Säurefuchsin- Pikrinsäure nach VAN GiEsoN oder mit Boraxcarmin coinbinirt mit Bleu de Lyon ge- färbt. Färbung in toto gelang nur mit einem Essigsäurecarmin bei langer Einwirkung in der Wärme. Die Herstellung des Essigsäure- carmins geschieht durch Auflösung des Carmins in Ammoniak, Ausfällen mit Säure , Auswaschen der Säure , Abdunsten des Am- moniaks, Auflösen des Carmins in Essigsäure. [?] E. Schoebel {Neapel). (xolowiii, E. P., Nabljudenija nad nematodami. I. Fago- z i t a r 11 y e o r g a n y [Beobachtungen über N e m a - 74 Referate, XIX, 1. 1 cl e n. I. P h a g- c y t ä r e Organe] (Mem. de l'Univ. Imp. de Kazan 1901 ; — 149 pp. av. 3 plches.)- Fixirung. Für die kleinen Nematoden, die mittels der Schnitt- methode untersucht werden sollten , ergab die folgende Fixirungs- mischung ausgezeichnete Resultate : Kaliumbichromat, öprocentige Lösung . . 100 cc Osmiumsäure, einprocentige Lösung . . 5 — 6 Tropfen. In dieser Mischung verbleiben die Präparate 24 Stunden im Dunkeln , kommen dann für weitere 24 Stunden in eine öprocentige Lösung von Kaliumbichromat, dann mehrstündiges Auswaschen in tiiessendem Wasser. Grössere Nematoden werden gut fixirt in einer Mischung von gesättigter wässeriger Sublimatlösung und Eisessig (3 : 1), eine halbe bis 2 Stunden, dann werden die Präparate in 2 bis 3 Stücke zerschnitten und 24 Stunden in gesättigter wässeriger Sublimatlösung gelassen. Diese letztere Fixirungsart ergiebt für einige kleinere Nematoden mit einer dicken und wenig durchlässigen Cuticula weniger befriedigende Resultate im Vergleich mit der obigen Osmiummischung. Solche Objecte werden am besten zuerst für 30 bis 40 Secunden in Eisessig gelegt, in einer Sublimateisessigmischung von 4 zu 1 fixirt, und schliesslich in reiner Sublimatlösung (andert- halb bis 2 Stunden oder auch mehr). Sehr viele Nematoden krümmen sich bei der Fixirung oder rollen sich kreisförmig zusammen und können daher nicht in Reihen von Querschnitten zerlegt werden. Viele kleine Formen kann man im gestreckten Zustande fixiren, wenn man sie zunächst für 2 bis 3 Minuten in Wasser von 42 bis 45^ C. legt; bei einigen Formen, bei denen die eben angegebene Methode nichts hilft, verfährt Verf. wie folgt. Er drückt die Nematode auf dem Objectträger zwischen zwei Streifen feuchten Fliesspapieres zu- sammen und bedeckt sie mit einem grossen und dicken Deckglase, dann setzt er die oben genannten Reagentien tropfenweise auf der einen Seite des Deckglases zu und saugt sie auf der anderen mit Fliesspapier wieder ab. — Entwässerung. Hierbei verändern die Objecte leicht ihre Form, wenn man nicht sehr vorsichtig zu Werke geht. Nach der Osmiummischung beginnt Verf. stets mit 10- pi'ocentigem Alkohol, nach Sublimat mit 20procentigem unter Zusatz von einigen Tropfen Jodtinctur. Hierin 20 bis 30 Minuten, dann für je eine halbe Stunde in 20-, 30-, 40procentigen Alkohol bis zu absolutem. In diesem müssen auch ganz kleine Präparate bei mehr- fachem Wechsel wenigstens 2 bis 3 Tage verbleiben. Das zwischen XIX, 1. Referate. 75 zwei Filtrirpapierstreifen zusammengedrückte Object darf von diesen erst in SOprocentigem Alkohol befreit werden, sonst krümmt es sich. Grössere Nematoden werden mit dem Rasirmesser in Stücke zerlegt, die zur Einbettung in Paraffin geeignet sind, bevor sie in 95procen- tigen Alkohol kommen. — Par af fineinb ettung. Es wurde nur in Paraffin eingebettet. Als vorbereitende Flüssigkeiten erwiesen sich am geeignetsten Xylol , Toluol und Chloroform. Nur bei sehr vor- sichtiger Behandlung tritt keine Deformirung des Präparates ein. So kommt das Object der Reihe nach in Mischungen von 5:1, 4:2, 2 : Oj 2:4, 1:5 absoluten Alkohol mit einem der genannten Stoft'e. In dem reinen Xylol , Toluol oder Chloroform muss es wenigstens 24 Stunden verbleiben. Bei der Uebertragung in Paraffin setzt Verf. zunächst Paraffinstückchen zu dem Xylol etc., in dem sich das Object befindet , das Grefäss steht dabei eine halbe bis eine Stunde bei 35*^ im Ofen, darauf wird noch mehr Paraffin zugesetzt (3 bis 4 Stunden bei 56*^ im Ofen), endlich Uebertragung in reines Paraffin, das innerhalb 24 bis 36 Stunden 2- bis 3 mal gewechselt wird. Am praktischsten ist es, in Paraffin von 56 bis 58^ einzubetten. — F ä r b u n g. Eine Stückfärbung gelingt nur, wenn das Object mehrere Wochen hindurch in OOgrädigem Alkohol gelegen hat und letzterer so lange gewechselt worden ist , bis bei Zusatz von Wasser keine weissliche Trübung mehr entsteht. Objecto , die in der sonst ge- bräuchlichen Weise mit Alkohol behandelt worden sind, färben sich mit Carmin oder Hämatoxylin entweder gar nicht oder nur sehr ungleichmässig. Verf. zieht die Schnittfärbung vor. Die Schnitte werden aufgeklebt mit Eiweiss (Eiweiss von einem Hühnerei, destil- lirtes Wasser 600 cc , Phenol 10 Tropfen) , mit Xylol von Paraffin befreit, dann absoluter Alkohol, OOprocentiger, Wasser, Farblösung. Meist wurde mit Hämalaun (P, Mayer) gefärbt ; sehr gute Resultate ergiebt aucli Stüekfärbung in Boraxcarmin (Grenacher) mit darauf folgender Färbung der Schnitte in einprocentiger Indigocarminlösung. Glycerin darf man bei Nematoden nicht anwenden, da die Präparate darin bis zur Unkenntlichkeit verändert werden. Ganze Nematoden kann man mit grosser Vorsicht (bei sehr allmählicher Einwirkung) in eine Mischung von gleichen Theilen Glycerin und Wasser über- tragen. — Farbstoffe zu bestimmten Zwecken. Um die Function der einzelnen Organe festzustellen, brachte Verf. entweder verschiedene Farbstoffe in die Leibeshöhle des lebenden Thieres oder er fütterte es damit , indem er es in der Flüssigkeit hielt. Nematoden von Warmblütern wurden hierbei bei 34 bis 37*^ im 76 Referate. XIX, 1. Thermostaten iinterg-ebraclit. War das Tliier mit einem Farbstoffe injicirt, so wurde es in ph3'siologisclier Kochsalzlösung gehalten. In gleicher Weise wurde der Farbstoff in physiologischer Kochsalzlösung gelöst, falls es darin leben sollte. Die sonstigen parasitären, auf dem Lande oder in Süsswasser lebenden Nematoden wurden bei Zimmer- temperatur gehalten. Parasitäre Nematoden leben, wie es scheint, in physiologischer Kochsalzlösung länger, wenn sie im Dunklen stehen. Die freilebenden Nematoden des Meeres müssen unbedingt bei ver- hältnissmässig niedrigen Temperaturen (10 bis 12*^ C.) in reinem, fortwährend durchlüftetem Seewasser gezogen werden. Mit der vitalen Färbung konnte Verf. auch bestimmte Organsysteme bei lebenden oder bei fixirten Thieren besonders hervortreten lassen. Werthvoll sind diese Färbungen bei den sehr kleinen Nematoden, die im ganzen untersucht werden können . und zwar sind sie durch keine andere Methode zu ersetzen. Zur Injection wurden verwendet: 1) Carmin in Pulverform. Da das Pulver sehr fein sein muss, so verwendet man am besten die Aquarellfarbe von Wixdsor axd Newton oder Lefranc. Die Farbe wird mit so wenig destillirtem Wasser ver- dünnt, dass sie gerade durch die Kanüle hindurchgeht; Verf. spritzt in die Leibeshöhle oder in den Darm einige Tropfen ein, bei sehr grossen Nematoden, z.' B. Ascaris megalocephala, 0*5 bis 1 cc. Eine Verdünnung des Farbstoffes mit Kochsalzlösung, Eivveiss oder der Höhlenflüssigkeit der Thiere ist nicht nöthig. Eine Injection mit Tusche, Sepia etc. wird in gleicher Weise ausgeführt. 2) Carmin - saures Natrium, in Wasser zu 5 Procent löslich, in Seewasser bedeutend weniger , wnirde sowohl zur Injection wie zur Fütterung für parasitäre und freilebende Formen verwendet. Injicirt wurde eine coucentrirte Lösung in destillirtem Wasser. Bei Ascaris megalo- cephala, lumbricoides und spiculigera wurden selbst Mengen von 2 cc durch die Körperflüssigkeit vollständig ausgefällt. Diese Eigenthüm- lichkeit des P^arbstoftes gab Verf. die Möglichkeit, das phagocytäre System der freilebenden Formen zu entdecken. Die freilebenden Meeresuematoden befinden sich in concentrirten Lösungen dieses Farb- stoffes äusserst wohl. Verf. löst den Farbstofl' nicht direct in See- wasser, er setzt vielmehr dem letzteren von einer gesättigten Lösung in destillirtem Wasser soviel zu bis ein Niederschlag erfolgt; dieser wird von den Nematoden mit Vorliebe gefressen. Durch den Farb- stoff" wird die Cuticula der freilebenden Meeresformen intensiv gefärbt und in zwei Schichten zerlegt. Auch im Hypoderm war eine Färbung nachweisbar, und so vermuthet Verf., dass dieser Farbstoff' von den XIX, 1. Referate. 77 Thieren aiicli auf einem anderen Wege als durch den Darm auf- genommen werden kann. Die Cuticula solcher Formen wie Rhabditis und Angnilhda wird nicht gefärbt, dagegen wird der Farbstoff gern gefressen. Bei Filaria färbt sich die Cuticula, doch Avird der Farb- stotf nicht vom Daraie aufgenommen. 3) Das carm insaure Am- moniak verhält sich ebenso Avie der vorige Farbstotf, doch wird es nicht so vollständig ausgefällt. — Bei der Fix innig von Objecten, die während des Lebens mit Carmin oder carminsauren Salzen be- handelt Avaren, mit solchen ^Mischungen, in denen Osmiumsäure und Chromsäure enthalten sind (PEREXYi'sche Flüssigkeit, FLEjniiNG'sche etc.), wird ein l)eträchtlicher Theil der Farbe ausgewaschen. Bei der An- Avendung von .Sublimat mit Essigsäure geht ebenfalls ein Theil der Farbe verloren , Avenn auch bedeutend Aveniger. Verf. führt auf diese Eigenthümlichkeiten die bei den verschiedenen Autoren hervor- tretende Verschiedenheit der Meinungen zurück. Er selbst verwandte, um das Ausziehen der Farbe zu vermeiden, Kupfersalze (das Chlorid und Acetat) ; auf je 50 cc der oben genannten Fixiruugstlüssigkeiten Avurden 2 bis o cc einer gesättigten Lösung dieser Salze zugesetzt. 4) Indigocarmin, Zur Injection Avurde eine concentrirte Lösung des Natriumsalzes in destillirtem Wasser verwendet. Nach Koava- LEwsKi fällt der Farbstoff in Seewasser aus, trotzdem ist es Verf. gelungen , eine Lösung herzustellen ; Avenn mau 500 cc Seewasser 5 cc einer gesättigten Lösimg des Farbstoifes zusetzt und nach Bildung des Niederschlages filtrirt, so kann man in dem so behan- delten SecAA^asser weitere Mengen des Farbstoffes ohne Niederschlag lösen, und so eine beliebig stark gefärbte Flüssigkeit herstellen. Verf. verAvandte geAvöhnlich ein dunkelblaues Wasser, Die Färbung ist schAver zu fixiren. Einigermaassen gelang das durch AnAvendung einer auf 30 *' erAvärmten, concentrirten Sublimatlösung mit Essigsäure und darauf folgender schneller EntAvässerung. — Sehr ausführliche und interessante Mittheilungen macht Verf. des Aveiteren über Neu- tral r 1 h , ^I e t h y 1 e n b 1 a u , J a n u s g r ü n und zAvei andere neue Farbstoffe. Schiefferdecker (Bonn). Petrunkewitscli , A., Die Pieifung der partli euogene ti- schen Eier vouArtemia salina (Anat. Anz. Bd. XXI, 1902, Nr. 9, p. 256—263 m. 3 Figg.). Das Untersuchungsmaterial bestand durchAveg aus parthenogene- tischen Dauereiern. Diese sind in den jungen Stadien, so lange sie noch keine dicke Schale besitzen, ganz gut zu schneiden. Es wurde 78 Referate. XIX, 1. immer das ganze Tliier couservirt und das Ei quer zur Längsachse geschnitten. Man erhält so Schnitte durch die Eier in allen Rich- tungen, da sie im Uterus verschieden liegen. Fixiruiig in der ge- wöhnlichen Suldimatlösung nach Gilsox sowie in der vom Verf. an- gegebenen Moditication. Färbung mit Hämatoxylin und Pikrocarmin; schöne dreifarbige Bilder 5 Plasma rosa, Chromatin dunkelblau, Dotter grellgelb. Die HEiDEXHAiN'sche Hämatoxylinfärbueg erwies sich als ungünstig, da der Dotter zu stark gefärbt wurde. Schiefferdeckev {Bonii). TÖnuig'es, C. , Beiträge zur 8 ]) e r m a t g e u e s e und g e - nese der Myriapoden (Zeitsclir. f. wiss. Zool. Bd. LXXI, 1902, p. 328—358 m. 3 Figg. u. 2 Ttln.). Die Hodeuelemente wurden , so weit möglich , zunächst frisch untersucht, dann durch Behandlung mit Essigsäure ihre Structur deutlich gemacht. Da die Zellen sehr schnell zerfallen, fixirt man die isolirten Elemente am besten während einer bis 2 Minuten in Osmiumdämpfeu. So fixirte Objecte kann man dann noch mit schwacher Methylgrünlösung (nach Piipart und Petit) färben. Bei Herstellung von Schnittserien hat man mit einigen Schwierigkeiten zu kämpfen, weil die Objecte leicht so hart werden, dass sie beim Schneiden splittern. Zur Fixirung erwiesen sich noch am besten Osmium- gemische, vor allem die HEUMANN'sche Lösung. Nachdem die Fixi- rnngsflüssigkeit kurze Zeit gewirkt hat, zerschneidet man den Hoden, um das Eindringen des Fixatives zu erleichtern. Zerschneiden des Hodens vor oberflächlicher Fixirung ist unthunlich , weil sofort an den Schnittflächen ein Theil des Inhaltes herausquillt. Im allgemeinen genügt eine Einwirkungszeit von 2 Stunden. Ausgewaschen wird mit GOprocentigem Alkohol und dann folgt Weiterbehandlung mit Alkohol steigender Concentration. Nach Vorbehandlung mit Alkohol -Chloro- form und Ueberführung in reines Chloroform, verbrachte Verf. die Objecte für 24 Stunden in ein Chloroform -Paraffingemisch. Die folgende Einschmelzung wurde nie über 2 Stunden ausgedehnt , da sie sonst sehr an Schneidfähigkeit verlieren. Die meisten Färbungen geschahen nach der HEiDEXHAix'schen Eiseuhämatoxyliumethode, zum Theil combiuirt mit Eosin und Bleu de Lyon. E. Sclioehcl (Keapel). Holmgreu, N., Ueber das Verhalten des Chitins und Epithels zu den unterliegenden G e w e b e a r t e n XIX, 1. Referate. 7«j der lusecten (Anat. Anz. Bd. XX, 1901, No. 19, 20, p. 480—488). Als Material dienten der Eileiter, die Spermatliekengäng-e und die Scheide von Sarcophaga und Musca, sowie die Thoracalmusculatur der Cliirouomuslarve. Diese Organe wurden in den P'lüssigkeiten von Perenyi , vom Kath , Flemming und Carnoy und in Sublimat (concentrirte Lösung in physiologischer Kochsalzlösung) abgetödtet. Die Flüssigkeiten von Perenyi und Carnoy , sowie das Sublimat lieferten die besten Resultate. Die Färbung der 2 bis 3 fi dünnen Schnitte geschah während 24 Stunden in 2procentiger Hämatoxylin- lösung nach vorhergegangener 24stündiger Beizung in 2procentiger Eisenalauulösung. Contrastfärbung mit concentrirter wässeriger Lösung von Kongoroth.- Schiefferdecl:er (Bonn). Holmgren, E., Beiträge zur Morphologie der Zelle. L Nervenzellen (Anat. Hefte, L Abth. H. LLX , 1901, p. 269—325 m. 10 Tfln.). Verf. hat zur Untersuchung der Nervenzellen von Helix poraatia die folgenden Methoden verwendet. Die Hirn- und Pedalganglien wurden meist in dem Geraisch von Rabl fixirt (Sublimat 1*0 ; Pikrin- säure l'O; Wasser 2"0). Die gewölmlich 5// dicken Schnitte wur- den mit Eiseuhämatoxylin-Säurefuchsin-Orange und oft mit sehr gutem Erfolge mit Toluidin-Erythrosin gefärbt. Die modificirte WEiGERx'sche Elastinfärbung, die Verf., wie er Aveiter unten angiebt, für ähnliche Studien über die spinalen Nervenzellen der Vertebraten ausserordent- lich nützlich gefunden hat, war bei Helix ohne jeden Erfolg. Dieses gilt jedoch nur für die Conservirung mit dem Gemisch von Caknoy. Wie sich die Nervenzellen von Helix nach Conservirung in Trichlor- Essigsäure verhalten würden, weiss Verf. noch nicht. Bei der Fär- bung mit Eisenhämatoxyliu- Säurefuchsin -Orange hat er mit Eisen- hämatoxylin nach Heidenhain vorgefärbt und bei der Nachfärbung die Vorschrift von Squire befolgt (Säurefuchsiu 1 g, Orange 6 g in 60 cc absoluten Alkohol und 240 cc Wasser). Bei der Färbung mit Toluidin-Erythrosin hat Verf. sein altes Verfahren benutzt. ^ Er bemerkt endlich, dass er nach einer electiven Gliafärbung gesucht habe. Die bisher von den Autoren benutzten (Weigert's Gliafärbung, Färbung mit Eisenhämatoxyliu nach Fixirung in Alkohol-Chloroform- Eisessig oder Bichromat-Formalinj waren ohne jeden Nutzen. Er ^) Stöhr, Lehrbuch der Histologie, 9. Aufl.. p. 94. gQ Referate. XIX, 1. hebt besonders hervor, dass die letztgenannte Methode als elective Gliafärbung bei Helix ganz erfolglos ist. — Da die höher organi- sirten Thiere in der Regel sehr viel kleinere Nervenelemente als die niederen haben, so ist bei ihnen zum Nachweis des lueinanderwachsens der nervösen und der Stützelemente natürlich eine elective Färbung noch weit nöthiger als bei Helix. Die benutzte Methode war folgende. Die geeignetste Fixirungstlüssigkeit ist Trichlor-Essigsäure (2- bis .5pro- centige Lösung). Nützlich ist auch die Fixirung mit dem Gemische von Cakxoy (Alkohol-Chloroform-Eisessig) ; ferner hat Verf., von dem Gedanken ausgehend, dass ein Macerationsmittel durch Auflösung und Entfernung ergastischer ßestandtheile der Nervenzellen vielleicht auch Nutzen bringen könnte, ziemlich befriedigende Versuche mit einer gesättigten Lösung von Salicylsäure in Drittelalkohol gemacht. Er verrauthet, dass Trichlor-Propionsäure vielleicht noch besser sein wird als Trichlor-Essigsäure, hat dieses Reagens aber bisher nicht erhalten können. — Das für die Bereitung der Farbe nöthige Eisen- chlorid muss sehr concentrirt sein; man nehme daher den Liquor ferri sesquichlorati (Pharm. Germ. ed. III). Ebenso ist es nothwendig, das Resorcinum resublimatum purum zu benutzen. Die gekochte und abgekühlte Lösung wird von 1.50 bis 160 cc mit 96procentigem Al- kohol bis auf 200 bis 210 cc verdünnt, dann 4 cc Salzsäure zu- gesetzt. In dieser Flüssigkeit werden die am besten 2 oder 3 ,a, höchstens 5 /t dicken Paraffinschnitte 24 Stunden gefärbt. Nicht selten, besonders wenn sie dick sind, werden die Schnitte zu dunkel, mitunter auch diffus gefärbt, so dass sie fast unbrauchbar werden, bei gut gelungener Behandlung aber bekommen die Nervenzellen nur eine blassviolette oder nach der Alkoholbehandlung blassgraue Fär- burg, während die intracellulären ebenso wie die intracapsulären Zellen schwarzviolett oder wenigstens dunkelviolett gefärbt werden. Verf. hat bis jetzt den Grund für diese Ungleichheit der Bilder noch nicht finden können; er hebt hervor, dass die Färbeflüssigkeit eigentlich nur, wenn f r i s c h a n g e f e r t i g t , verwendbar sei. Dieses auffallende Verhalten ist nur in der Weise zu deuten, dass bei der Bereitung der Farbe ausser der eigentlichen Elastinfarbe eine Ver- bindung zu Stande kommt, die sehr vergänglich ist, die aber die fbesonders nach der Trichlor-Essigsäure-Fixirung) nöthige elective Färbungsfähigkeit besitzt. Vielleicht gelingt es, diesen hypothetischen Componenten zu isoliren. — Kurz zusammengefasst ist das Verfahren folgendes: 1) Fixirung in 2 bis öprocentiger Trichlor-Essigsäure (8 bis höchstens 24 Stunden). 2) Steigender Alkohol von 40, 50, 60, 70, XIX, 1. Referate. gl 82, 96 Procent je 24 Stunden. 3) Entwässerung und Paraffin- einbettung. 4) Schnitte von 2 bis höchstens 5 fi Dicke. 5) Wei- GERx'sche Elastinfärbung 24 Stunden. — Als Material empfiehlt Verf. zuerst die Spinalganglien des Meerschweinchens, des Igels, von eben geborenen Katzen oder Kaninchen zu verwenden. Sckiefferdecker {Bonn). JB, Wirhelthieve. Reddiu£^ius , K. A., Die Zellen des Bindegewebes (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd. XXIX, H. 3, 1901, p. 405— 41.'^j ni. 1 Tfl.). A'erf. hebt zunächst hervor, dass die histologische Technik, so stark ihre Entwicklung auch in den letzten Jahren gewesen ist, doch immer noch Lücken zeigt, und in Folge dessen zu einseitiger Unter- suchung Veranlassung giebt. Namentlich schlimm steht es auch mit der Untersuchung der Protoplasmastructur und der der Kernkörper- chen. Verf. hat seine Bestrebung darauf gerichtet, diese beiden mehr hervortreten zu lassen, und er ist nach vielem, bisweilen ver- zweifeltem Herumprobiren endlich so weit gekommen, dass er über Resultate berichten kann. Für den Pathologen hat die eingehende Kenntniss der Umwandlungen, deren das Bindegewebe fähig ist, die höchste Bedeutung. Die Entzündungslehre muss fast ganz aus der normalen und pathologischen Histologie des Bindegewebes erläutert werden, Verf. fand eine besondere Affinität des Protoplasmas für Methylenblau. Es zeigte sich nun, dass die NissL'sche Methode der Ganglienzellfärbung recht gute Resultate für das Bindegewebe ergab. Wenn man eine normale Sehne in 96procentigem Alkohol härtet, in Celloidin einbettet, schneidet und nachher „nisselt", sieht man nur wenige Structurbesonderheiten. Anders ist es, wenn man nach der folgenden Methode arbeitet: Man schneidet einen Cylinder aus Hol- lundermark von etwa 15 mm Länge und einem Radius von ungefähr 7 mm, mit einem Korkbohrer von 3*5 mm Radius wird ein Loch hineingebohrt und dann der Achse parallel die Wand an einer Stelle ganz bis in die OefFnung hinein getrennt. Diesen Schlitz kann man, wenn nöthig, aufsperren ; die Höhle ist dann von der Seite her zu- gänglich. Die Cylinder werden vor dem Gebrauch eine halbe Stunde Zeitschr. f. wlss. Mikroskopie. XIX, 1. (3 82 Referate. XIX, 1, lang in O'Töprocentiger Kochsalzlösimg ausgekoclit. Dann wird eine Sehne am Unterschenkel oder neben der Wirbelsäule des Kaninchens frei pr.äparirt. Durch die seitliche , aufgesperrte Oeifnung gelangt sie leicht in die Höhle des HoUundermarkcyliuders. Der Schlitz schliesst sich nachher wieder. Die Sehne , welche in natürlicher Verbindung geblieben ist , füllt eventuell mit einem Stück Muskel- bauch die Höhle aus. Das Gewebe wird unter diesen Verhältnissen gereizt, was sich aus ihm heraus entwickelt, wird in den Maschen des HoUundermarks aufgefangen. Die Haut wird etwas gedehnt und über dem Fremdkörper zugenäht. Nach verschieden langer Zeit (1 , 2, 8, 14 Tage) wird das Object herausgenommen, die Sehne wird an beiden Enden abgetrennt und das Object mit scharfem In- strument herauspräparirt , nicht etwa stumpf herausgeschält. Dann wird es durch wagerecht auf die Achse angelegte Schnitte in 3 bis 4 Stücke zertheilt, welche alle in Alkohol von 96 Procent oder, falls man Vergleichsobjecte haben will, in verschiedene Flüssigkeiten ge- legt werden können. Verf. beschreibt nun genauer die Veränderungen, welche die Sehnenzellen bei solchen Präparaten zeigen, weshalb auf das Original verwiesen wird. — Aehnliche Untersuchungen hat er am grossen Netz des Kaninchens ausgeführt. Das Netz wird an einem Zipfel mit einem Seidenfaden umschnürt, der Faden durch die Bohröffnung durchgesteckt und das Netz , so weit es ohne Gewalt gelingt , durch den Cylinder nachgezogen. Der Zipfel wird ausser- halb in der Richtung der proximalen Oeffnung umgelegt und in der Nähe dieser Oeffnung festgebunden. Dann wird der mit Netzgewebe ausgefüllte Cylinder in die Bauchhöhle versenkt und der Bauch zu- genäht. Es zeigt sich, dass den Netzzellen dasselbe Vermögen zu- kommt wie den Sehnenzellen. Interessant sind auch die Verände- rungen der Fettzellen. Verf. geht weiter auf die polynucleären und mononucleären Leukocyten ein, welche sich mit anderen Elementen zusammen in dem HoUundermark befinden. Sclüefferdecker (Bonn). Godle^vski juu., E., Die Entwicklung des Skelett- und Herzmuskelgewebes der Säugethiere (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LX, 1902, p. 111 — 156 m. 3 Tlln.). Als Untersuchungsmaterial dienten hauptsächlich Embryonen vom Kaninchen, die frisch herauspräparirt noch lebenswarm in Sublimat, Sublimat-Eisessig oder in der vax GEnucHTEx-C'ARxOY'schen Flüssigkeit mit gutem Ptcsultate fixirt worden waren. TELLiESNiczKY'sche, Zexker- sche und besonders PERExvi'sche Flüssigkeit erwiesen sich für die vor- XIX, 1. Eeferate. 83 liegende liistogeuetisclie Untersuchung als ungeeignet. Die intacten Embryonen wurden dann nach gewöhnlicher Vorbehandlung in Paraffin (52 ^ C. Schmelzpunkt) eingebettet und in oontinuirliche Serien von 5 bis 10 jLi dicke Schnitte zerlegt. Die mit Wasser auf den Object- träger geklebten Schnitte wurden vorwiegend mit Eisenhämatoxylin nach Heidenhain combinirt mit Eosin oder Bordeaux R gefärbt. Neben- bei kam auch llämalaun mit Eosinnachfärbung zur Verwendung. Das HEiDENHAiN'sche Verfahren hat den Vortheil, dass es die ersten An- lagen der Fibrillen und die Difterenzirungsprocesse in der feineren Structur derselben ausgezeichnet zur Darstellung bringt. Besonders muss nocli hervorgehoben werden, dass diese Methode auch zur Dar- stellung der sich entwickelnden Nervenfasern vorzügliche Dienste leistet. Der Eisenlack färbt nämlich in Verbindung mit Eosin die Nerven auf frühen Stadien intensiv roth. Besonders gut fällt diese Tinction aus, wenn die Differenzirung in Eisenalaun nicht auf einmal geschieht, sondern einigemal unterbrochen und das Präparat in den Zwischenzeiten in Eosinlösung gebracht wird. Auf solche Weise hergestellte Präparate sollen alle Nervenstämme und ihre feineren Verzweigungen ausserordentlich deutlich zeigen. E. Schoebel {Neapel). Tig'UOlo - Lutati, C, Experimentelle Beiträge zur Patho- logie der glatten Musculatur der Haut (Arch. f. Dermal, u. Syphilis Bd. LVII, H. 3, 1901, p. 323 — .361 m. 2 Tfln.). Verf. hat Untersuchungen über das Verhalten der glatten Haut- musculatur bei Einwirkung verschiedener schädlicher Agentieu an- gestellt. Als Versuehsthier wurde die Katze benutzt, da bei ihr die glatte Hautmusculatur sehr gut entwickelt ist. Wegen verschiedener, bei älteren Thieren hervortretender Schwierigkeiten wurden junge benutzt. Zunächst verwandte Verf. zur Färbung die vier von Unna für die glatte Musculatur angegebenen Methoden; die Methylen- blau - r c e i n - IM e t h o d e , die S ä u r e f u c h s i n - P i k r i n s ä u r e - Methode (von diesen beiden Methoden erwies sich die zweite als die bessere, da die gelbe Färbung stets sehr deutlich sich gegen die fuchsinrothe abhob, während es bei der ersteren nur sehr schwer gelingen wollte, eine thatsächlich blaue Eigenfärbung zu erzielen, die sich deutlich von dem orceinrothen Grunde unterschieden hätte), M e t h y 1 e n b 1 a u - B 1 u 1 1 a u g e n s a 1 z - M e t h d e (die Färbung er- wies sich nicht als genügend deutlich), S ä ur e -Or c ei'n-H am a- Ö4 Referate. XIX, 1. tein-Säurefuclisin-Pikrin -Methode (auch diese Methode erwies sich als nicht genügend). In einigen Fällen, in denen Verf. das Verhalten der ans elastischem Gewebe bestehenden kleineu Sehnen der glatten Musculatur uud die Veränderungen, welche sie bei den Versuchen erlitten , studiren wollte , bediente er sich mit bestem Erfolg der folgenden Methode. Die Schnitte kamen aus 90- procentigem Alkohol in saure Orceinlösung für 6 bis 24 (am besten jedoch nur 7) Stunden in ein ülirgläschen , das nur unvollständig zugedeckt war, so dass es eine geringe Verdunstung des Alkohols zuliess , wodurch die Coucentration der Färbeflüssigkeit allmählich gesteigert wurde. Dann wurden sie in 90procentigem Alkohol gut ausgespült, in destillirtes Wasser übertragen und verblieben in diesem längere Zeit. Dann absoluter Alkohol, Oel, Balsam. Meist wurden jedoch die mit Orcein gefärbten Schnitte aus dem destillirten Wasser für 5 Minuten in eine Hämatoxylin- oder Hämatein-Lösung gebracht, dann in einem Gefäss mit leicht angesäuertem , destillirtem Wasser so lange entfärbt, bis der gewünschte Farbenton erreicht war, so lange in Brunnenwasser gelassen , bis sie eine rein dunkelblaue Färbung angenommen hatten , endlich wieder absoluter Alkohol, Oel, Balsam. Zu demselben Zwecke verwendete Verf. auch eine Orcein - Thionin - Methode (s. u.). Von Doppelfärbungen wurden die folgenden benutzt: Bizzozero's Pikrocarmin (Färbung der Kerne und der Muskelzellen intensiv und sehr rein; die Methode braucht viel Zeit). Hämatoxylin -Eosin, Hämatein- Eosin (Verf. zieht diese Methode der vorigen vor). Polychromes Methylen- blau-Orange. Die Schnitte kommen aus dem Alkohol in Wasser, dann für 3 bis 5 Minuten in polychromes Methylenblau, dann in ein gewöhnliches Uhrglas mit 90procentigem Alkohol, dem man 3 bis 4 Tropfen der Glycerin-Aethermischung zugesetzt hat, wo sie bleiben, bis sie abgeblasst sind (meist 2 bis 3 Minuten). Die Schwierigkeit besteht darin, den richtigen Farbenton zu errathen, damit mau nicht eine zu starke und diffuse Färbung oder eine völlige Entfärbung er- hält. Aus der Glycerin-Aether- Mischung kann man die Schnitte in 90procentigen Alkohol bringen, damit die Entfärbung des Grundes noch gleichmässiger wird. Dann kommen sie für 2 Minuten in Tannin-Orange (Orange [GrIibler] 1 g, Tannin 33procentig), das man mit ein wenig destillirtem Wasser verdünnt hat. Absoluter Alkohol, Oel, Balsam. Es folgen jetzt drei Thionin-Method en, von Avelchen Verf. hervorhebt, dass sich die Kerne sehr schön von dem Grunde abhoben. Er liält die Thioninfärbung für die Darstelhmg XIX, 1. Referate. 35 der Kenieiuzelheiten für vortheilliafter als die anderen Methoden. Orcein-Thioniu. Die Schnitte bleiben 2 bis 6 Stunden in saurem Orcein, werden in OOprocentigem Alkohol abgespült bis sie keine Farbe mehr abgeben und den richtigen Farbenton erreicht haben; sie kommen dann für 5 bis 7 Minuten in Thionin (nach Nicolle), werden wieder in 90procentigem Alkohol abgespült bis sie keine Farbe mehr verlieren (nicht zu lange !j, darauf absoluter Alkohol, Oel, Balsam. T h i n i n - E s i n. Die Schnitte bleiben 3 Minuten in Thionin , werden in 90proceütigem Alkohol rasch abgespült , jedoch nur soviel, dass sie nicht zu stark abblassen ; dann in absoluten Alko- hol, dem wenige Tropfen einer alkoholischen Eosinlösung (2 Tropfen in ein gewöhnliches Uhrglas) zugefügt sind (etwa 2 Minuten), schliess- lich absoluter Alkohol, Oel, Balsam. Thionin- Orange. Anstatt die mit Thionin gefärbten Schnitte in den Eosin-Alkohol zu bringen, überträgt man sie in ein Gefäss mit destillirtem Wasser, das mit wenigen Tropfen von Tannin - Orange versetzt worden ist (2 bis 5 Minuten), spült rasch in OOprocentigem Alkohol ab, Alkohol, Oel, Balsam. Verf. hat hauptsächlich diese zuletzt genannten Thionin- Färbuugen benutzt. Eine Methode , welche auch ausgezeichnete Kernfärbung ergiebt , ist die folgende (nach Bizzozero - Vassale) : 1) 10 Minuten Färbung in EnRLiCH'schem Gentianaviolett (Gentiana- violett 1, absoluter Alkohol 15, Anilinöl 3, destillirtes Wasser 80), 2) rasches Auswaschen in absolutem Alkohol , 3) für 2 Minuten in eine ein-, 2- bis 3procentige Jodjodkalium - Lösung, 4) 30 Secunden in absoluten Alkohol, 5) 30 bis 40 Secunden in O'lprocentige Chrom- säurelösung, 6) 20 bis 30 Secunden in absoluten Alkohol, 7) 30 Se- cunden in O'lprocentige Chromsäurelösung, 8) 30 Secunden in abso- luten Alkohol, 9) Nelkenöl, das so oft erneuert wird, bis die Schnitte keine Farbe mehr abgeben. Auch B i s m a r c k b r a u n wurde versucht ohne besondere Vortheile. Hatte Verf. zur Fixirung FLEMMiNa'sehe Flüssigkeit benutzt, so wurde Safranin oder Gentianaviolett in folgen- der Weise benutzt. 1) Färbung in einer einproceutigen wässerigen Safraninlösung oder einer Gentianaviolettlösung nach Ehrlich (eine halbe bis 24 Stunden), 2) Auswaschen in destillirtem Wasser, 3) Aus- waschen in absolutem Alkohol, der durch wenige Tropfen von Salz- säure-Alkohol (70procentiger Alkohol mit ein Procent Salzsäure) leicht angesäuert worden war, bis die Schnitte keine Farbe mehr abgeben, 4) absoluter Alkohol, Oel, Balsam. Sckiefferdecker {Bonn) . 86 Referate. XIX, 1. Ledermauii, R., Ueber die Fettse er e ti on der .Scbweiss- d r ü s e 11 an den Hinterpfoten der Katze (Arcli. f. Dermatol. ii. Syphilis Bd. LVIII, 1902, H. 1, 2, p. 159 —164 m. 1 Tti). Verf. wählte zu seiner experimentellen Untersuchung die Zehen- ballen leicht schwitzender Katzen. Den chloroformirten Tbieren wurden 3 bis 4 cg Pilocarpin subcutan injicirt ; bei 2 Tbieren wurden auf der Höhe der Schweisssecretion die schwitzenden Ballen der Hinterpfoten exstirpirt, bei dem 3., das durch Cbloroformasphyxie zu Grunde ging, unmittelbar nach dem Tode herausgenommen. Die in lOprocentigem Forraol fixirten Stücke wurden z. Tb. direct in Celloidin unter Vermeidung von Alkohol-Aether eingebettet, z. Tb. in Alkohol nachgebärtet und dann in Celloidin eingebettet. Gefärbt wurde mit Sudan IH oder mit Scharlach R. Wenn durch die Cel- loidineinbettuiig auch etwas Fett verloren ging, so liatte diese Methode doch den Vortheil , dass die Lage der Drüsen weniger verändert wurde als bei dem Gefrierschnitte, und dass die in dem Ausführungs- gange enthaltenen Fetttröpfchen eher darin blieben. Die Schnitte wurden in den alkoholischen Sudan- oder Scharlachlösungen ge- wöbnlicli 12 bis 24 Stunden gefärbt, dann leicht in öOprocentigem Alkohol, längere Zeit in destillirtem Wasser abgespült und entweder in Glycerin mit nachfolgender Umrandung mit Kröniglack oder ■ in Lävulosesyrup eingeschlossen. Die Haltbarkeit der Präparate ist eine geringe, da der Farbstoff leicht in die umgebende Flüssigkeit diffundirt. Am zweckraässigsten scheint noch Einschluss in Glyceriu zu sein, wenn es gelingt, alle Luftbläschen vor der Umrandung mit Lack sorgfältig zu entfernen. Einschluss in Glycerinleim hat sich nicht bewährt. Zur Contrastfärbung eignet sich am besten Böhmer's Hämatoxylin oder Häraalaun, da diese P'arblösungen gestatten, ohne Zubülfenahme entfärbender Reagentien , namentlich ohne absoluten Alkohol, die Schnitte einschlussfähig zu machen. — Wie Verf. durcli farbenanalytische Versuche im Reagensglase feststellte, nimmt nur die Oleinsäure den in den Schnitten sichtbaren rothen Farbenton dauernd an, während die Palmitinsäure einen anderen, etwa himbeerfarbenen Ton annimmt und die Stearinsäure sich zunächst roth, wenn auch mit einem blasseren Roth färbt, nach einiger Zeit, wenn sie erstarrt, ganz blass rosa. Es ist daher nach Verf. die Annahme wohl gestattet, dass das in dem Schweiss enthaltene Fett, welches auch bei gewöhnlicher Temperatur flüssig bleibt, vorwiegend aus Oelsäure , vielleicht unter Beimischung von Cholestearin, besteht. Schiefferdecker {Bonn). XIX, 1. Kefei-ate. 87 Scllirscliott*, D., 15 e i t r a g zur K e n ii t n i s s d e r zoll f ii r in i .y- e u Elemente der Eihäute bei Vögeln (ßeitr. z. patliol. Anat. u. z. allgem. Patliol. Bd. XXIX, H. 3, 1901, p. 414 —431 m. 5 Fig-g.). Von den klinischen Beobachtungen über die Heilung granulirender Wunden , wenn auf die Oberfläche der Granulationen die Zellhaut eines Hühnereies aufgelegt wird, ausgehend, hat Schüller die Existenz zelliger Elemente an der Innenfläche der Schalenhaut mikroskopisch nachgewiesen, nachdem er makroskopisch eine Wucherung der epi- thelialen Decke an der Transplantationsstelle der genannten Haut constatirt hatte. Verf. hat nun versucht, durch embryologische und histologische Beobachtungen die Herkunft der hier in Betracht kom- menden morphologischen Elemente zu untersuchen, ihr Verhalten zum Bildungsprocess der secundären Eihäute zu ermitteln und drittens auf dem Wege des Experiments und der planmässigen mikroskopischen Untersuchung die Vermehrungsfähigkeit der genannten Elemente fest- zustellen. Als Material dienten ausschliesslich Hühnereier , sowohl frisch gelegte als auch dem Eileiter in verschiedenen Stadien der Bildung der secundären Eihäute entnommene. Fixirt wurden die Präparate der Schalenhaut mit 4procentigem Formaliu oder Alkohol. Nach sorgfältiger Entleerung des Inhaltes (des Eiweisses und Ei- gelbes) des Eies wurde die Schalenhaut von der Innenfläche der Schale abgelöst und in die fixirende Flüssigkeit eingelegt, oder sie wurde in situ fixirt, indem die fixirende Flüssigkeit in das vom In- lialte befreite Ei hinein gegossen wurde. Eier, die dem Eileiter direct entnommen wurden und noch keine Schalen hatten, wurden in toto in die fixirende Flüssigkeit getaucht. Gefärbt wurde mit Cochenillealaun, Plämatoxvlin und Bismarckbraun. Die Färbung mit Hämatoxvlin und Bismarckbraun geschah an Schnitten, mit Cochenillealaun in toto. Verf. benutzte hauptsächlich das letztere , weil hierbei die gefärbten Zell- kerne auf dem hellen Grunde des ungefärbten umgebenden Gewebes scharf hervortreten, wobei auch die Conturen des Zellprotoplasmas deut- lich erkennbar sind. Dieses Verhalten hat einen besonderen Vorzug, wenn Präparate der Schalenhaut ausgebreitet von ihrer lunenhaut aus betrachtet werden. Die in toto mit Cochenillealaun gefärbten Objecte wurden in steigendem Alkohol und schliesslich in absolutem Alkohol ge- härtet, in Celloidin eingebettet und dann nach der Methode von Bumpus^ ^) Brixhanow, Ueber die BuMPUS'sehe Schnittserienmethode (Prager med. Woclienschr., No. 1, 1899). 88 Keferate. XIX, 1. in Sclinittserien zerlegt. Die Schnitte wurden iu Canadabalsam aufge- liobon. — Zur Lösung der Frage von der Vertheilung der von Zöllner beschriebenen zolligen Elemente untersuchte Verf. mikroskopisch auf Sclinittserien sowohl die Aussenfläclie der Dotterhaut als auch die Dicke der Eiwcissliülle auf ihren Gehalt an Formelementen. Ferner wurden die histologischen Processe in Follikeln, die eben von ihrem Ei verlassen worden sind, wie auch iu solchen Follikeln, die sich im Stadium ihrer regressiven Umwandlung befinden, untersucht und end- lich der InJKilt des Eileiters auf seinen Gehalt an zelligen Elementen in verschiedenen Gegenden oberhalb und unterhalb der Lagerung des Eies. Die Methode war dabei die folgende : Um die Dotter- haut des gelegten Eies zu isoliren ohne sie zu verletzen , befreite Verf. ihre Aussenfläche von den Eiweissmassen durch die gewöhn- ■ liehe Isolationsmethode des Eigelbes durch Spaltung der Eischale in ■ zwei Hälften, Die auf solche Weise erhaltenen Präparate wurden in Alkohol fixirt. Zur Untersuchung der Eiweissmassen des Eies bediente sich Verf. der Eiweissschichten , die an der Aussenfläche der Dotterhaut und der Innenfläche der Schalenhaut haften bleiben. Ausserdem wurden auch Eiweissschichten gelegter Eier untersucht, welche entkalkt und in einem Gemisch von gleichen Theilen 4pro- centigen Forraalius und einprocentiger Salpetersäurelösung fixirt worden waren. In beiden Fällen wurden die Präparate in toto aiit Coche- nillealaun gefärbt und in Celloidin eingebettet. Behufs Gewinnung von Eiern, welche sich auf verschiedenen Stufen der Ausbildung ihrer secundären Häute befinden, untersuchte Verf. Hühner, welche sich in der Periode des Eierlegens befanden, und fixirte die auf solche AVeise gewonnenen Eier sammt dem sie bedeckenden gedehnten und verdünnten Eileiter in Alkohol, um die Möglichkeit der Störung der Lagebeziehung der Theile zu einander auszuschliessen. Die Ovarien und die übrigen Theile des Eileiters eines jeden Falles wurden entweder in 4proceutigem Formalin oder in Alkohol fixirt, ilic iu toto mit Cochenillealaun gefärbten Präparate nach ihrer Ent- wässerung in Celloidin eingebettet und wieder nach der BuMPus'schen Methode in Schnittserien zerlegt. Die Präparate der Ovarien und der Eileiterwände wurden in Schnitten einer Doppelfärbung mit Hämat- oxylin und Eosin unterworfen. Bei der Anwendung dieser Methode konnte Verf. au der Aussenfläche der Dotterhaut die Anwesenheit zelliger Elemente mit Sicherheit feststellen. — Um der Lösung der Frage von der Vermehrungsfälligkeit der zelligen Elemente der Schalenhautinnenfläche näher zu treten, suchte Verf. den genannten XIX, 1. Referate, 89 Eleiueuteu auf experimentellem Wege die denkbar günstigsten Er- nährungsbedingungen zu verschaifen , indem er die Schalenhaut in ein Medium einschloss, welches befähigt war, einen gewissen forma- tiven Reiz auf die zelligen Elemente auszuüben. Er benutzte dazu das Unterhautbiudegewebe der Stirnregion des Kaninchens, in welches die Schalenhaut für eine bestimmte Zeit hineingebracht wurde. Wegen des Näheren muss auf das Original verwiesen werden. Nach -4 bis 14 Tagen wurde das Thier getödtet, und alle Weichtheile des Kopfes sammt dem Periost wurden im Bereich der operirten Stelle möglichst sorgfältig abpräparirt. Die Präparate wurden in Formalin fixirt, mit Cochenillealaun in toto gefärbt, dann in Alkohol gehärtet, in Celloidin eingebettet und in Schnittserien zerlegt, wobei jeder Schnitt durch die ganze Dicke der exstirpirten Gewebe sammt der darin ein- geschlossenen Schalenhaut hindurchging. Sckiefferdeclxer (Bonn). Gerliardt , U. , Die K e i m b 1 a 1 1 b i 1 d u n g bei T r o p i d o u o t u s natrix (Auat. Anz. Bd. XX, No. 10, ll, 1901, p. 241 —261 m. 17 Figg.). Die Eier der Ringelnatter lassen sich, im Gegensatz zu denen der Kreuzotter, sehr leicht in fixirtem Zustande abhäuten, die kalk- haltige Eischale setzt dem Eindringen der Fixationstiüsslgkeit kein Hinderniss entgegen. Die lebend eingelieferten Schlangen wurden grösstentheils durch Köpfen , auch durch Chloroform getödtet , die P^ileiter der Länge nach mit der Scheere eröffnet, die leicht heraus- gleitenden Eier mit einem Hornspatel aufgefangen und in die Fixa- tionsflüssigkeit gebracht. So gelingt es leicht, sämmtliche Eier eines Weibchens unverletzt zu fisiren. Bei der Kreuzotter gelingt dies wegen der zarteren Cousistenz der Eihaut und wegen der dünneren Wand des Eileiters viel schwerer. Fixirt wurde mit einem von Nowak ausprobirten Chromsäuregemisch, das auch bei Hühnereiern vorzüglich gewirkt hatte : Chromsäure, einprocentige Lösung . . 150 cc Sublimat, gesättigte Lösung 150 „ Wasser, destillirt 135 „ Eisessig 15 „ Formalin 50 „ Es wurde auch versucht, diese Flüssigkeit zu modificiren, da das aber keine Vortheile ergab, so blieb man bei der angegebenen. Fixationsdauer 24 Stunden, ebenso langes Auswaschen in fliessendem Wasser, TOprocentiger, 85procentiger Alkohol mit Jod, endlich reiner 90 Referate. XIX, 1. 85procentiger Alkoliul. Nun wurden die Keimbäute uebst anbafteii- dem Dotter mit dem Rasirmesser vou dem Dotter ab.^etrennt, worauf sie luicb der üblicbeu Bebandlung mit steigendem Alkobol und Xylol in Paraffin eingebettet und in lückenlose Sclmittserien zerlegt werden, Schnittdicke 10 i^i. Es wurde fast ausschliesslich Schnittfärbung mit Boraxcarmin und Nachfärbung mit Pikrinsäure oder auch Orange angewandt, in einigen Fällen auch Hämatoxylin. — Die Fixirung mit der CARNOv'schen Flüssigkeit (Alkohol- Chloroform- Eisessig) gab bei den stark dotterhaltigen Reptilieneiern keine guten Resultate, die Eier schrumpfen sehr stark. Schiefferdeeker (Bonn). liorff, K. V., Zur H i s 1 g e n e s e der S p e r m i e n von P h a - 1 a n g i s t a v u 1 p i n a (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LX, 1902, p. 232—260 m. 4 Figg. u. 2 Ttln.). Das Material wurde theils in Hermaxn's, theils Flemming's Ge- misch Avährend 3 bis 5 Tage , theils in Lenhossek's Flüssigkeit während 3 Stunden fixirt. Zur Färbung kam hauptsächlich das HEiDENHAiN'sche Eiseuhämatoxylinverfahreu zur Verwendung. Das in Osmiumgemischen fixirte Material wurde 6 bis 18 Stunden mit 2procentiger Eisenalaunlösung gebeizt und dann 24 Stunden in V-2P^**^'" centiger Plämatoxylinlösung gefärbt. Das mit Hermaxn's Flüssigkeit lixirte Material gab im allgemeinen die besten Präparate. Zum Studium der Entwicklung des Spermakopfes eigneten sich Präparate, die nach Fixirung mit FLEMMiNG'scher Flüssigkeit mit Safranin- resp. Safranin- Gentianaviolett gefärbt waren , recht gut. Nach Fixirung in Len- Hossöiv'scher Flüssigkeit kam auch die EHRLicH-BiONDi'sche Dreifach- färbung mit Vortheil zur Anwendung. E. Schoehel (Neapel). Arnold, J., Zur Kenntuiss der Granula der Leber zellcn (Anat. Anz. Bd. XX, 1901, No. 8, 9, p. 226—228). Verf. hat in den Leberzellen Granula und Granulagruppen ge- funden, deren morphologisches und functionelles Verhalten ihm be- merkenswerth erschien. Mau kann sie am überlebenden Object bei Zusatz von einprocentiger Kochsalzlösung, sowie bei vitaler und supravitaler Färbung nachweisen. Färbt man mit Neutralroth-Koch- salzlösung, supravital, so kommen in den Leberzellen des Menschen und mancher Thiere theils isolirt liegende, theils gruppenweise an- geordnete, manchmal mehr gleichmässig vertheilte, gefärbte Granula zum Vorschein, welche zuweilen gefärbte Ausläufer erkennen lassen oder durch solciie netzförmig verbunden werden. An Sublimatprä- XIX, 1. Referate. 91 paraten bei Tliioiiinfärbimg zeigen sich die Leberzellen von Kaninchen und Mensch mehr gleichniässig von blauen Granula und Fäden durch- setzt. Härtet man menschliche Leber in Formol-Chromsäure (Benda) oder Formol - Flemming, und färbt man mit einem Gemisch von Ma- lachitgrün, Säurefuchsin und Martiusgelb (Pianese), so wird bei der Differenzirung mit Salzsäurealkohol (1 : lOOOOj das Protoplasma roth gefärbt, während die Granula grün werden. Bei geringgradiger Fett- infiltration, wie sie so häufig bei Menschen und Thieren, namentlich Hühnern, vorkommt, führen diese Granula Fett. Waren die Objecte in Formol-FLEMMiNG'scher Mischung gehärtet und nach der oben an- gegebeneu Methode gefärbt worden, so enthielten die Granulagruppen neben grünen verschiedenartig geschwärzte Körner. An Gefrier- schnitteu von P^ormolpräparaten, welche mit Sudan behandelt Avurden, fanden sich neben Ringelkörnern und Vollkörnern Fettgranula in sehr verschiedener Yertheilung, sehr häufig aber in Gruppen angeordnet, die so deutlich begrenzt waren, dass sie leicht mit Kernen verwech- selt werden konnten. Die Beziehung dieser Granula zu Fäden lässt sich schon an frischen und nach den angegebenen Methoden fixirten Objecten erkennen , aber noch deutlicher mittels der Isolirung in 0"5procentiger üeberosmiumsäure. Verf. macht weiter darauf auf- merksam , dass nicht selten in der gleichen Zelle, ja in derselben Granulagruppe fett- und eisenhaltige Körner getroften werden. Der Nachweis gelingt sehr leicht, wenn man von Formolpräparaten feine Gefrierschuitte anfertigt, an diesen zuerst die Hämosiderinreaction vornimmt, dann mit Alauncarmin und endlich mit Sudan färbt, — Bei icterischen Zuständen der Leber kann man in den Zellen Gallen- farbstoff-führende Granula und Granulagruppen sehr häufig mit aus- gesprochen netzförmiger Anordnung zur Darstellung bringen. Ausser Beobachtungen am überlebenden Object in einprocentiger Kochsalz- lösung sind solche an Formol-FLEiiMiNG-Präparaten sehr zu empfehlen. Die letzteren sind auch sehr geeignet zum Studium der Gallen- capillaren. Sckiefferdeclier {Bonn). Arnold , J. , U e b e r feinere S t r u c t u r e n der Leber, ein weiterer Beitrag zur Granula lehre (Virchow's Arch. Bd. CLXVI, H. 2, 1901, p. 53;j— 561 m. 1 TU.). Verf. führt in dieser Arbeit an den Leberzellen den Nachweis, dass die Mikrosomen der Zellsubstanz, die Plasmosomen, an der Zu- sammensetzung dieser in hervorragender Weise betheiligt sind , und dass Je nach ihrer Gruppirung, ihrer gegenseitigen Beziehung, ihrer 92 Referate. XIX, 1. Qiielluiig- uiul ihrem Verliältiiiss zur Zellsiibstaiiz das Structurbild wechselt. Es wurde untersucht 1) am überlebenden Object; physiologische Kochsalzlösung-, Humor aqueus, Perikardial -Flüssig- keit etc. Ferner mit der vitalen und supravitalen Färbung der Leberzellen; ]^Iethylenblau und Neutralroth wurden in Substanz in die Lymphsäcke von Fröschen gebracht, welche einen bis 3 Tage am Leben blieben. Das Ergebniss war insofern nicht befriedigend, als die Leberzellen nur vereinzelte und meist nur schwach gefärbte Granula enthielten , während andere Zellen , z. B. leukocytäre , mit gefärbten Granula vollgestopft waren. Bessere Resultate erhielt Verf. bei Injection dieser Farbstoffe unter die Haut der Maus nach Michaelis. ^ Verf. bemerkt hierzu , dass er nach Einführung von Neutralroth eine so ausschliessliche Färbung der Piandkörner nicht erhielt. Bei der supravitalen Färbung wurden feine Schabsei der möglichst frischen Leber in dünne Lösungen von Methylenblau-Chlor- natrium (1 : 10 000 bis 20 000) oder kalt gesättigte Lösungen von Neutralroth in Clilornatrium von 0"75 Procent eingelegt. Diese Mischungen können viele Stunden stehen bis die Zeichen des Ab- sterbeus, d. h. eine Färbung der Kerne oder der Zellsubstanz ein- treten. Bei vitaler und supravitaler Färbung mit Neutralroth wurde zuweilen beobachtet , dass die Kerne sich zunächst färbten , dann wieder entfärbten. 2) Beobachtungen an i s o 1 i r t e n Bestand- t heilen der Zellsubstanz. Isolirung in 0*5procentiger Ueber- osmiumsäurelösung und lOprocentiger Jod- Jodkaliumlösung, denen ein Körnchen in Wasser löslichen Eosins zugefüa't wurde. Verf. wendet sich hier gegen die Deutungen von Plato, " weswegen auf das Original verwiesen werden muss. 3) Beobachtungen am c o n s e r v i r t e n Object. Nach den zahlreichen Versuchen des Verf. sind die folgen- den die brauchbarsten und unentbehrlichsten Conservirungs - Flüssig- keiten, a) Formol (4- bis lOprocentiges Formaldehjal, 2 bis 4 Tage) mit nachfolgender Alkoholbehandlung, b) Formol (dieselbe Concen- tration) nach 2 bis 4 Tagen Einlegen dünner Scheiben in Chromsäure von steigender Concentration(BENDA), nachfolgende Alkoholbehandlung. c) Formol und nachträgliches Einlegen in PYEMMiNG'sche Lösung (2 bis 4 Tage), d) pLEMMixG'sche Lösung (2 bis 4 Tage) ohne vorherige Formolbehandlung zur Controluntersuchung ; nachfolgende Alkohol- behandlung, e) MüLLER-Sublimat (Zenker ohne Eisessig) ; nachfolgende 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 431. -) Plato, Arch. f. mikr. Anat. Bd. LVI, 1900. XIX, 1. Referate. 93 Alkobolbehandlung, f) iiml g) Sublimat -Cblornatrium und Sublimat- Eisessig zur Controluntersuchung". Bei der Anwendung der Formol- Chromsäure-Lösimgen wird nicbt nur die Structur des Protoplasmas sebr gut conservirt, sondern es kommen auch gewisse Granulaformen nach der Färbung in eigenartigem Ton zum Vorschein. Die Formol- FLEMMiNG-Methode ergiebt ähnliche Resultate, ausserdem eine Reaction auf Fett; sie hat nach den Erfahrungen des Verf. vor der einfachen FLEMMiNG'schen Lösung den Vorzug, dass sie die Gewebe weniger verändert, dagegen treten bei dieser die Fäden deutlicher hervor. Die Fixirung in Sublimatlösungeu ist als Controlmethode und ausser- dem zur Untersuchung gewisser Granulaformen unentbehrlich. — Die Präparate wurden in Celloidin, hauptsächlich aber in Paraffin eingebettet wegen der Herstellung möglichst feiner Schnitte und der Färbung mit Dreifarben- Gemischen. — Ausser den gewöhnlichen Färbungsmethoden wurde das Eisen-Hämatoxylin-Eosin und ein Drei- farben-Gemisch von PiANESE ans-ewendet: 'ö^ Malachitgrün 0"5 g Säurefuchsin 0*1 „ Martiusg-elb OOl „ Wasser. destiUirt 150-00 cc Alkohol, 96procentig 50-00 „ Hierin bleiben die aufgeklebten Schnitte 2-1 Stunden; nach flüch- tigem Abspülen mit Wasser Differenzirung mit Salzsäure - Alkohol (1 : 10 000): die zuerst blaugrün gefärbten Präparate nehmen einen intensiv rothen Ton an. Bei sehr feinen Schnitten ist ein rasches Abspülen mit absolutem Alkohol und langsames Differenziren in Origanumöl vorzuziehen. An Sublimatpräparateu erscheinen Proto- plasma , Plasmosomen und Plasmosomenketten leuchtend roth , die Zwischensubstanz ungefärbt; im Protoplasma sind ausserdem inten- siver gefärbte Granula nachweisbar. Die rothgefärbten Kerne ent- halten violette Kernkörperchen. Bei Chrompräparaten, besonders den FLEMMiNG'schen , ist die Färbung des Protoplasmas eine mehr grau- rothe. In ihm sind hellgrüne (Formol-FLEMMiNG und Flemming) Gra- nula eingebettet. Die Färbung ist dauerhaft. — An dem gleichen Objecte erscheinen bei Anwendung verschiedener Conservirungsflüssig- keiten verschiedene Structurbilder des Protoplasmas. Während bei Formol-Chromsäure und Sublimat-Chlornatrium die Structur der Leber- zellen eine mehr körnige Avar, erschien sie bei Formol-pLEMMixG und MüLLER-Sublimat mehr feinmaschig. Bei FLEMMiNG'scher Lösung allein mehr fädig. Anderseits konnte man an dem gleichen Präparat, mochte 94 Referate. XIX, 1. es in Formol-FLEMMiNG oder MüLLER-Sublimat conservirt worden sein, Zellen finden, deren Substanz gekörnt war, während andere eine feinmaschige Struetur darboten. Die Menge und die chemische Zu- sammensetzung der Conservirungsflüssigkeit, die Daner der Einwirkung derselben und die Dicke des Objects sind in dieser Hinsicht zu berücksichtigen, ebenso der von der Function abhängige Wechsel des Aufbaues einzelner Zellen, sowie verschiedener Theile, z. B. der peripherischen und centralen Abschnitte der Zellen. — Die obigen Angaben haben hauptsächlich für die menschlichen Leberzellen Geltung. Die des Hundes sind diesen noch am ähnlichsten, während die Zellen der Kaninchen- und Meerschweinchen-Leber, besonders die letzteren, fast immer deutlich gekörnt sind. Schieffcrdecker (Botin). Ito, Zur vitalen Färbung des Blutes (Allg. Med. Central- zeitg., 1901, No. 101, p. 1185 — 1186). Das Blut wird gewöhnlich vor der Färbung in bestimmter Weise vorbehandelt. Es werden namentlich zwei Methoden verwendet; die EHRLicn'sche Hitzemethode und die Alkohol-Methode , zu welcher Nikiforoff unnützerweise Aether zufügt. Sublimat-, Formol- und Osmium-Härtung haben mit Recht keine allgemeine Verbreitung gc; funden. Verf. hat nun , um jede mögliche Veränderung des Blutes durch Reagentien auszuschliessen, versucht, frisches und noch lebendes Blut ohne jede Vorbehandlung zu färben. Die Methode ist die fol- gende. Frisches Blut wird in ganz dünner Schicht auf einem grossen Deckgläschen ausgebreitet ähnlich wie Janzson, sowie Rosenberger und Schüffner für Objectträger behufs Härtung zur Malariafärbung angegeben haben, worauf das Gläschen rasch auf einen abgeschliffenen, am Boden mit einem Wassertropfen versehenen , mit Vaselin be- schickten Objectträger gebracht und luftdicht abgeschlossen wird. Auf dieses Blutpräparat hat Verf. verschiedene Farbstotfe in fol- gender Weise einwirken lassen. Die alkoholische Lösung des be- treffenden Farbstoffes wurde in dünner Schicht auf das Deckgläschen rasch aufgetragen und rasch verdunstet , um die Krystallbildung zu verhindern , daim wurde der Blutstropfen wie oben beschrieben auf- gestrichen. Verf. versuchte die folgenden Farbstoffe : Methylenblau, Eosiu, Wasserblau, Neutralroth, Triacid , eosinsaures Methylenblau (Rosin), Pyronin- Methylgrün (Pappenheim). Die jedesmaligen Resul- tate werden genau angegeben, weshalb auf das Original verwiesen wird. Weitere rntersuchungen sind im Gange. Sclücfferdeclcer [Bonn). XIX, 1. Referate. 95 Pappeuheim, A., Eine pcanoptische Triaciclfärbung (Deutsche Med. Wochenschr. 1901, No. 46). Es ist Verf. gelungen, für Blutfärbungen eine neue Farbmischung herzustellen, welelie allen Anforderungen entsprechen soll. Als Base enthält diese Triacidmischung das färbende Princip des polychromen Methylenblaus Unna's , die von Michaelis-^ als Methylenazur oder Azurblau angesprochen wird und die Reuter- auch zur Malaria- färbung mit Eosin combinirt hat. Diese Mischung färbt schon in der bei Grübler vorräthigen , gut haltbaren , wässerigen Lösung distinct und kräftig, besonders schön aber dann, wenn man sich die Lösung jedesmal frisch aus dem ebenfalls bei Grübler erhältlichen Trockenrückstand herstellt. Resultat : Kerne der Lymphocyten röth- lich , der polynucleären Leukocyten blau , der Erythroblasten fast schwarz. Leiber der Lymphocyten himmelblau , der erythrophilen Erythroblasten fuchsinroth , der xanthophilen Erythroblasten orange- farben. Granula der neutrophilen Zellen violett, der Mastzellen ge- sättigt carminroth, der eosinophilen Zellen leuchtend scharlachroth. Ob auch Bacterien, Malariaparasiten und ihr Chromatin gefärbt wer- den, weiss Verf. bis jetzt noch nicht, doch ist es theoretisch wahr- scheinlich. Schiefferdecker (Bonn). Hirschfeld, H., U e b e r die Entstehung der B 1 u t p 1 ä 1 1 c h eii (ViRCHOw's Arch. Bd. CLXVI, H. 2, 1901, p. 195—211 m. 1 Tfl.). Verf. hält Deckplastrockenpräparate nach Ehrlich, natürlich unter Controle durch andere Methoden, namentlich die frische Untersuchung, für die geeignetste Methode , um über die Vorgänge bei der Ent- stehung und Ausbildung der Blutplättchen Auskunft zu ertheilen. Fixirt wurden die Präparate bei 110*^ 5 Minuten bis eine halbe Stunde. Gefärbt wurde zunächst mit folgender Lösung eine halbe Minute lang: Eosin 0*5 g, Alkohol, 60procentig, 100 cc, dann nach Abspülen in Wasser (10 Minuten) Färben in Methylenblau B pat. 1*0 g, destillirtem Wasser lOO'O g. Man kann aber auch im wesent- lichen mit derselben Wirkung andere der bekannten Eosin-Methylen- blau-Färbungen verwenden. Ein nicht zu vermeidender Uebelstand ist das schnelle Abblassen dieser Präparate. Färbung mit Hämat- oxylin (Delafield) eine bis 6 Stunden und dann mit Eosin liefert 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 305. '-) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 19ül, p. 314. 96 Referate. XIX, 1. hiilthare und fast ebenso schöne Präparate. Man luiiss, um deutliche IJihler zu erlialteu , mit dem Kernfarbstofl überfärben. Triacid- färbung war für diese Untersuchung nicht geeignet. Schiefferdecker {Bonn). Michaelis, L., u. Wolff, A., Die Lymphocyten. Ein Bei- trag zur Frage nach ihrer Specificität (Deutsche Med. Wochenschr. Bd. XXVII, 1901, No. 38, p. 651 —653). Verf. bespricht zunächst die Methoden zur Erkennung der Lymphocyten im Blute. Die hierfür brauchbaren sind die folgenden : 1. Die Untersuchung im frischen Präparate, sie ergiebt nur ganz ungenügenden Aufschluss. 2. Die Färbung mit H ä m a t o x y 1 i n - E s i n , sie ist in Bezug auf die Darstellung der Kernstructur kaum zu übertreffen, jedoch ist es ganz unmöglich, einen neutrophil granu- lirten mouonucleären Leukocyten von einem grossen Lymphocyten zu unterscheiden; die Unterschiede dieser beiden Zellarten liegen im Protoplasmaleibe, der sich bei dieser Methode nicht besonders gut differenziren lässt. 3. a) Tr iaci df är bung. Sie ist gerade zur Darstellung der Lymphocyten nicht gut geeignet, da selbst bei noch so gut gelungener Kernfärbung der Lymphocyten ihr Protoplasma stets mangelhaft gefärbt ist. Es liegt das im Wesen dieser Farb- mischung, b) Die M e t h y 1 e n b 1 a u - E s i n f ä r b u n g ist etwas günstiger in dieser Hinsicht, jedoch zeigt sie in den Lymphocyten das Protoplasma und den Kern in gleichem Farbtone. Es gelingt zwar meist. Kern und Protoplasma zu unterscheiden, aber gerade bei den grossen (wichtigsten) Formen ist die Unterscheidung oft schwie- riger als bei den kleinen Formen. 4. Die Azurreaction^ ist nach Verf. eine fast ideale Methode zur Erkennung der Lympho- cyten. Von dem leuchtend rothviolett scharf gefärbten Kern hebt sich das zart himmelblaue Protoplasma scharf ab. Der sonst nur ganz schmal erscheinende Protoplasmasaum der Lymphocyten er- scheint hier als ein breiter Ring. Leider gelingt diese Methode nur, wenn die Zellen ganz flächenhaft ausgebreitet sind ; bleiben sie beim *) Als Azurreaction bezeichnet Verf. die Reaction, welche man mit Hülfe der RoMAXowsKi-ZiEMA>{N-NoCHT'schen Methode erhält. Nach Michaelis beruht die Reaction auf dem Vorhandensein eines Oxj^dationsproductes des Methylenblaus, welches schon Nocht erkannt und Michaelis als Methylenazur bestimmt hat. (Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 305 —308.) XIX, 1. Referate. 97 Abstreichen der Präparate kugelig, so versagt sie. 5. Die Pyrouin- Methylgrün-Methode wurde von Pappenheim als eine speci- fische Methode zur Erkennung der Lymphocyten empfohlen. Es fragt sich nur, ob man alles das als Lymphocyten bezeichnen darf, was diese PAPPENHEin'sche Keaction giebt. Wegen der hierauf bezüg- lichen Betrachtungen wird auf das Original verwiesen. Ebenso wegen der weiteren Betrachtungen des Verf. über die Erkennung der Lymphocyten in anderen Körperflüssigkeiten. Schieferdecker {Bonn). Pappenheim , A., Eine neue chemisch-elective Doppel- färbung für Plasmazellen (Mouatsh. f. prakt. Der- matol. Bd. XXXIII, 1901, p. 79). Verf. hat eine Methylgrün - Pyroninmethode als Reagens für Lymphocyten im Deckglaspräparat empfohlen.^ Die Methode hat sich bewährt, war aber nicht für Schnitte anwendbar. Im Resorcin fand Verf. ein Mittel, das Pyronin, das sonst durch Alkohol aus- gezogen wurde, festzuhalten. Die neue Vorschrift ist folgende (Farb- lösung und Diftereuzirungsmittel sind jedesmal frisch zu bereiten) : 1) Man thut in eine Eprouvette eine bis 2 Federmesserspitzen voll Methylgrün , o bis 4 Federmesserspitzen Pyronin in Substanz und stellt eine massig concentrirte Lösung von diesem Gemisch her durch Auffüllen der Eprouvette mit destillirtem Wasser bis etwa zur Hälfte, d. h. bis die Lösung deutlich violett erscheint ohne aber durchsichtig zu sein. Ein Fleck auf Fliesspapier muss ein rothviolettes Centrum und einen leuchtend grünen Rand besitzen. In dieser Lösung färbt man etwa 5 Minuten. 2) Kurzes Abspülen in Wasser bis eben fluorescirende Wolken (Pyronin) abzugehen beginnen. 3) Differen- ziren in Resorcinalkohol , bis kein rother Farbstoff mehr abgegeben wird. (Auf eine viertel Eprouvette Alkohol kommen 2 bis 3 Spatel- spitzen Resorcin.) 4) Kurzes, nochmaliges Durchführen durch abso- luten Alkohol. 5) Bergamott-, Lavendel- oder Rosmarinöl. 6) Ein- betten in Balsam oder Lack. Die Kerngerüste der Plasmazellen sind blauviolett, ihr centrales Kernkörperchen ist roth, ihr Protoplasma leuchtend purpurroth (lässt bei Oelimmersion das krümelige Grano- plasma deutlich erkennen) ; die Granulationen der Mastzellen sind orangegelb. Schiefferdeclxer {Bonn). 1) Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXVIII, 1901, p. 403; s. auch ViRCHOw's Arch. Bd. CLXIV, 1901, p. 111. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XIX, 1. 7 9 g Referate. XIX, 1. Endeiien u. Jiisti, Beiträge zur Kenutniss der Unna- sclien Plasmazelleii (Deutsche Zeitschr. f. Chirurgie Bd. LXII, H. 1, 2, 1901, p. 82—131 m. 2 Tfln.). Zur Darstellung der Plasmazellen durch die Methylenblauiarbung erwies sicli, wie Unna angegeben hat, die Fixiruug in Alkohol als die beste 5 in Subliuiatpräparaten färbt sich das Protoplasma ziemlich gleichmässig und giebt den Farbstoflf sehr leicht wieder ab. Ge- färbt wurde in folgender Weise: in der Farbstoti'lösung 10 bis 20 Minuten , gründliches Abspülen in Wasser , Differenzirung in Glycerinätherniischung, concentrirt oder in Verdünnungen (nach münd- licher Mittheilung von Dr. Delbanco) , gründliches Abspülen in Wasser, absoluter Alkohol, Oel, Balsam. Die Plasniazelleu sind bei dieser Färbimg schon bei 40facher Vergrösserung als tief blaue Gebilde zu erkennen und in ihrer Anordnung zu beurtheilen. Seh iefferdecker (Bonn) . Pappenheim, A. , Wie verhalten sich die Unna 'sehen Plasmazellen zu Lymphocyten? (Virchow's Arch. Bd. CLXVI, 1901, p. 424—485 m. 1 TU.). Es wurden Deckglaspräparate : Zupf- , Abstrich- und Klatsch-- Präparate angefertigt. Fixirt wurde , um die natürliche chemische Chromatophilie der Substrate nicht zu alteriren, lediglich physikalisch und zwar trocken, durch Hitze nach Ehrlich -Rubinstein. Färbungen : 1) Mit Methylenblau allein oder in Verbindung mit Eosin (simultan wie successiv). Kern der Lymphocyten schwach hellblau, ohne deutliche Structur, das schmale, netzig-faserige, stark basophile Plasma dagegen bei Lymphocyten , uninucleären Leukocyten und Uebergangszellen kräftig dunkelblau und ungekörnt. Nach Roma- NOWSKY - NocHT - Reuter erscheint das Plasma leuchtend blnu, der Kern rothviolett, die Nucleolen ebenfalls blau. 2) Hämalaun mit und ohne Zusatz von Eosin färbt den Zellleib nur sehr schwach und diffus, lässt dagegen in den Kernen der kleinen Lymphocyten ein dichtes, knäueliges, dickfädiges und ungleichmässig engmaschiges Netz erscheinen, während es bei den grossen Lymphocyten ein feineres, zarteres und etwas deutlicher und regelmässiger angeordnetes Gefüge erkennen lässt. Im ganzen färben sich die Kerne der kleinen Lympho- cyten äusserst kräftig, die der grossen Lymphocyten und uninucleären Leukocyten dagegen bedeutend matter (Amblychromasie) ; sowohl bei den grossen wie bei den kleinen Formen sind ein bis zwei kleine, scharf-rnndo, ausgesparte (negativ gefärbte) Flecke als Kernkörperchen XIX, 1. Referate. 99 zu deuten. 3) Das Ehrlich'scIic Triacid fModitication von Philipp Aronson) ist zwar für die übrigen Blutzellen äusserst brauchbar, leistet aber gerade für die Lympbocyten und Mastzellen sehr wenig. 4) Ganz hervorragend zur Auffindung und Recognoscirung von Lympbo- cyten ist dagegen die M e thy 1 gr ü n-Py r oni n- M e tb d e.^ Diese Mischung verbindet nach Verf. alle Vorzüge der sonstigen Gemische ohne deren Nachtbeile. Kerne der Lympbocyten violett, die Färbung kann dabei fast mit einer Hämatoxylinfärbung concurriren. Die Mast- zellenkürner sind wie bei den beiden AzinfarbstoÖ'en im Gegensatz zu Fuchsin metachromatiscb gefärbt. Die Färbung der Lymphocyten- leiber ist bei diesem RosanilinfarbstofF viel kräftiger als bei den beiden Azinen. Ebenso wie die ringförmigen Azine (Parachinone) färbt aber dieses ringförmige Rosanilin fOrtbochinon) im Gegensatze zu dem offenen Fuchsin , nicht so viele andere Substrate mit , son- dern beschränkt sich auf die Lympbocytenleiber. Ein einziger Farb- stoff nur kann nach der Erfahrung des Verf. die Concurrenz mit dem Pyridin aushalten, das ist das bisher aber noch nicht in die Technik eingeführte Acridinrotli (Leonhardt; ebenso wie Pyronin bei GutJELER; Leipzig, käufliclij. Dieser zwischen den Rosanilineu und Azinen stehende ringförmige Farbstoff führt an Stelle des ring- bildenden elektro-uegativen Sauerstofltatoms beim Pyronin ein ring- bildendes elektro -positives Stickstofi'atom. Der Farbstoff ist zwar etwas weniger blaustichig als das Pyronin, färbt aber dafür Mast- zelleukörner noch stärker metachromatiscb. Methode : Man färbt das fixirte Deckglaspräparat mit einer concentrirten wässerigen Lösung des Metbylgrün- Pyronin- oder Jodgrün-Acridinroth-Gemisches. Verf. stellt sicli die nötbige Farblösung jedesmal selbst frisch dar, indem er von den Farbstofteu in Substanz etwa 3 bis 4 Tb. (Federmesser- spitzchen) Metbylgrün und 1 bis 2 Tb. Pyronin auf ein Reagenz- gläschen giebt und etwa bis zu einem Viertel der Höhe (2 bis .3 Finger breit) destillirtes Wasser auffüllt. Die Lösung muss eben deutlich blau erscheinen. Bringt man einen Tropfen auf Fliesspapier, so tritt sofort physikalische Dissociation des Gemisches ein (Capillar-Analyse), indem der stärker und schneller diffundirende grüne Farbstoff eine leuch- tende, rein grüne Peripherie um das dunkle, violettrothe Centrum des Flecks bildet. — Bei Schni ttp r äp ar aten erwies sich das kürz- lich von Pappenheim beschriebene, oben (p. 97) referirte Methylgrün- Pyronin-Resorcin-Verfahren als das beste. Schieffenlecker {Bonn). 1) Pappenheim, A., Virchow's Arcb. Bd. CLXIV, 1901, p. 110—111. ■ * ^QQ Keferate. XIX, 1. Kishi, K., D;is Gehörorgan der sogenannten Tanzmaiis (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXI, 1902, p. 457—485 m. 1 Tfl.). Die Thiere wurden durch Verbhitenlassen getödtet. Zur Fixi- ruug kam eme Formolosmiumlösung (4procentige wässerige Formol- lösuug 100 Th., einprocentige Osmiumsäurelösung 10 Th.) bei einer Einwirkungsdauer von 24 bis 48 Stunden oder eine einprocentige wässerige Formollösung zur Anwendung, die nach je 24 Stunden um ein Procent stärker gemacht wurde, so dass sie also am 4. Tage 4procentig war. Aus den Fixirungsflüssigkeiten kam das Material direct in TOprocentigen und für je 2 Tage in 96procentigen Alkohol, absoluten Alkohol, Alkohol-Aether, dann für je eine Woche in dünnes und endlich syrupdickes Celloidin. Als später das Celloidiu ungefähr zur Dicke frischer Seife eingedickt war, legte Verf. das Material in die Entkalkuugsflüssigkeit (lOprocentige Salpetersäure und 96pro- centigen Alkohol). Nach der Entkalkung wurde, um die Säure zu neutralisiren, 8 Tage lang in 96procentigem mit Calciumcarbonat ge- sättigtem Alkohol behandelt, dann 4 Tage mit mehrmals erneutem Alkoholäther, um das alte Celloidiu zu lösen. Schliesslich wurde von neuem in Celloidin in bekannter Weise eingebettet. E. Schoebel (Neapel). Szili, A., Zur Anatomie und Entwicklungsgeschichte der hinteren I r i s s c h i c h t e n , mit besonderer Be- rücksichtigung des Musculus s p h i n c t e r iridis des Menschen (Anat. Anz. Bd. XX, 1901, No. 7, p. 161 — 175 m. 6 Figg.). Untersucht wurden 15 Augen von Embryoneu verschiedenen Alters, deren jüngster 10 cm Gesammtlänge hatte; ferner 6 Augen von neugeborenen Kindern und 2 enucleirte Augen von Erwachsenen. Zur Fixiruug dienten Formalin (lOprocentig), ZsNKER'sche Flüssig- keit, FLEMMiNG'sche Flüssigkeit und die Lösung von Tellyesniczki. Sämmtliche Augen wurden in Celloidin eingebettet mit Ausnahme eines, aus dem eine Paraflinschnittserie angefertigt wurde. Depig- mentirt wurde meistens nach der Methode von Alfieri, ab und zu auch mit Wasserstoffsuperoxyd und Chlorwasser. Zur Kernfärbung diente hauptsächlich Hämalaun (P. Mayer), zum Nachfärben Pikro- fuchsin nach vax Gis.sox. <-, 7 • /•/- 77 / 7-. bcluejferaeckcr [Bonn). XIX, 1. Referate. 101 Strausky, E. , Zur Conservirung- von F a s er f är bu ngen (Neurol. Centralbl. Bd. XX, 1901, No. 21, p. 983—984). Die Untersuchuugen des Verf. beziehen sich auf Nervenzupf- präparate nach Osmium und Marchi mit Nachfärbung durch Safranin. Die Präparate wurden zuerst in Glycerin aufbewahrt und boten recht gute Bilder, bald aber verblasste die Rothfärbung. Als geeigneten Ersatz fand Verf. Paraffinöl (Parafrinnm liquidum), welches wie das Glycerin die Präparate in kurzer Zeit durchtränkt, ihnen dabei eine noch grössere Geschmeidigkeit und Isolirbarkeit verleiht und die Farben vollkommen erhält. Die Präparate kommen in das Gel nach Alkohol und Xylol. Es soll praktisch sein, dem Paraffinöl auf dem Objectträger noch einen bis 2 Tropfen Xylol zuzusetzen und darin dann die Nervenstämmchen zu zerzupfen. Schiefferdecker {Bonn). Meyer, S., Eine Eisenimprägnation der Neurofibrillen (Anat. Anz. Bd. XX, 1902, No. 21, p. 535—543). Dem Verf. ist es gelungen , die Bei-linerblau-Reaction zur Ge- websimprägnation zu benutzen und zwar, indem er das Ferrocyan- kalium zuerst einwirken liess und dann mit Eisenalaun fällte. Er giebt jetzt zunächst die Methode bekannt, welche zur Darstellung der Neurofibrillen geeignet ist, hofft aber auch bei anderen Geweben noch Resultate zu erzielen. Die neue Methode wirkt electiv und zwar nicht nur unter den Zellen, sondern auch unter den Fibrillen der einzelnen Zelle. Sie ist deragemäss auch unsicher in ihrer Wirkung und eignet sich daher nicht für pathologische Forschungen. Ein grosser Vorzug gegenüber anderen Metallimprägnationen ist das Fehlen von grobkörnigen oder krystallinischen Niederschlägen zwischen den gefärbten Elementen. Etwaiges überschüssiges Eisen wird in ganz gleichmässiger Vertheilung niedergeschlagen und bläut höchstens den Grund des Präparats, ohne dass daran mit den stärksten Vergrösse- rungen eine Spur von Körnung erkennbar wäre. Die Methode ist kurz zusammengefasst die folgende : Man fixire nicht zu kleine Stücke 24 Stunden in lOprocentiger Formalinlösung , bringe sie dann für 8 bis 20 Tage in 2*5procentiges Ferrocyankalium , übertrage direct für 2 bis 4 Tage in lOprocentigen Eisenalaun, und wasche einige Stunden aus. Nachbehandlung absoluter Alkohol 2 Tage, Xylol 2 Stun- den, Paraffin 2 bis 4 Stunden. Die Schnitte von 10 bis 60 fx werden mit Eiweissglycerin aufgeklebt, Xylol (eventuell Alkohol, Wasser, be- liebige Nachfärbungen unter Vermeidung von Alkalien , die das Berlinerblau sofort zerstören) : Canadabalsam. — Verf. giebt dann 102 Referate. XIX, 1. noch eine Anzalil von näheren Mittheilimgen, aus denen das folgende zu entnehmen ist. 1) Material. Wie bei der GoLGi'schen Methode setzen völlig ausgereifte Organe der Eisenimprägnation grossen Wider- stand entgegen, wenn auch die Imprägnation der Achsencylinder markhaltiger Fasern besser gelingt als bei jeuer. An allzu unreifem Material scheint die Methode weniger leicht zu gelingen als die GoLGi'sche. Verf. hatte die besten p]rfolge an Kalbsgehirnen oder solchen von jungen Tauben und Hühnern. Während die Gross- und Kleinhirnrinde eines neugeborenen Kindes kein gutes Eesultat gab, gelang die Imprägnation am Rückenmark und der MeduUa oblongata. Auf die Frische des Materials ist nicht so grosses Gewicht zu legen. — 2) F i X i r u n g. Als bestes Mittel hat sich Verf. das Formalin erwiesen; es wird entweder in lOprocentiger Lösung 12 Stunden bis mehrere Wochen angewendet, oder es wird der Imprägnirungs- flüssigkeit zugesetzt in derselben Weise wie bei der GoLoi'schen Methode. Im letzteren Falle ist das Resultat leider sehr ähnlich ; eine reiche Imprägnation der Gefässe stört das Bild. Auch bei der Formalinfixirung erscheint nicht immer das Fibrillenbild , sondern öfters andere Structuren, deren Deutung vorläufig nicht möglich ist. Solche Misserfolge bringen aber mitunter die schönsten Imprägna-, tionen sämmtlicher Fortsätze, auch des Neuriten mit seinen Ver- ästelungen, Schöne Färbungen fast aller Zellen mit den Hauptfort- sätzen ohne deutliches Hervortreten der Fibrillenstructur hat Verf. öfter bei Anwendung von starken Lösungen von Kaliumbichromat gesehen, gelegentlich auch bei Mischungen von Formalin mit starken (lOOprocentigen) (?) Ferrocyankalium-Lösungen. — 3) Imprägna- tion. Verf. unterscheidet streng zwischen „Imprägnation" und „Fäl- lung". l)ei dem GoLcn'schen Verfahren wird mit Chrom imprägnirt und mit Silber gefällt, bei dem ßEXHE'schen mit Molybdän imprägnirt und mit einer organischen Base das Metall gefällt. Das Ferrocyankalium dringt sehr schwer ein und muss auch nach der Formalinfixirung eine bis H Wochen, je nach der Grösse der Stücke und nach dem Grade der Temperatur einwirken, nur im Gemisch mit Formalin zu gleichen Theilen oder bei Zusatz von etwa 1 Th. Formalin auf 5 Th. Eiseulösung scheint es möglich mit 3 bis 5 Tagen auszukommen. Besonders langer Zeit bedürfen Organe mit reichem Fasergewirr, wie die MeduUa ol)longata. Stärkere Lösungen dringen schwerer ein als schwächere. Sind die Stücke vorfixirt, so werden sie in dem Ferrocyankalium sehr gut erhalten, man kann daher die Stücke ziem- lich gross nehmen, es erleichtert die Orientirung , und in der Tiefe XIX, 1. Referate. 103 ist die Färbung- oft schöner als an der Oberflnclie. — 4) Fällung. Der gewöhnliehe käufliche Eisenalaun, das Ammoniaksalz, ist für die Fällung des Eisens als Berlinerblau vorzüglich geeignet, er dringt als Fällungsraittel schnell ein und braucht in lOprocentiger Lösung nur 2 bis 4 Tage auch auf ganz grosse Stücke einzuwirken und giebt ihnen eine vortreffliche Consistenz. Andere Ferrisalze scheinen gelegentlich körnige Niederschläge zu erzeugen , deren Fehlen bei der Verwendung des Eisenalauns gerade so werthvoll ist. Man ver- fährt bei der Uebertragung in das Fälluugsmittel wie bei der Chrom- silbermethode. — .■)) Xa chb eh and lung. Der Eisenalaun muss ausgewaschen werden , sonst bleibt er in Form von grossen runden gelben Flecken, die allerdings durchsichtig sind, im Präparat zurück. Was die Paraffineinbettung anlangt, so ist zu bemerken, dass sowohl Xylol wie Chloroform und Terpentin etwas von dem Berlinerblau aufnehmen. Verf. hat daher die Zeit des Verweilens in Xylol ab- gekürzt bis auf 2 Stunden. Auch im Ofen brauchen die Stücke, wenn sie nicht sehr gross sind, nicht länger zu verweilen. Aus den Schnitten wird das Berlinerblau übrigens weder durch Xylol noch von Xylolbalsam ausgezogen. Für gewöhnlich genügt eine Schnitt- dicke von 15 bis 40 f.ij um die Fibrillen an Schnitten gut zu stu- diren ; auch dickere Schnitte sind namentlich dann zu verwenden, wenn der Grund des Präparates ganz weiss geblieben ist, was man natürlich zu erreichen suchen muss. Es ist diese Schnittdicke ein grosser Voi'zug gegenüber der BETHE'schen Methode , die dickere Schnitte als 15 fi bisher nicht zulässt. Verf. räth zum Schluss, um möglichst schnell gute Resultate zu erhalten, recht viel Material zu verarbeiten und zwar mit möglichst vielen Modificationen der Stärke der Lösungen, der Dauer etc. und dann das Gute auszuwählen. Schiefferdecker {Bonn). Bing, H. J., u. Ellermauu, T. , Zur Mikrochemie der Markscheiden (Arch. f. Anat. u. Physiol. 1901. H. 3, 4, p. 256-260). Das Nervenmark besteht nach den bisherigen Untersuchungen aus Albuminstoffen, Cholesteariu, Protagol, Lecithin (Fett). Die Weigert- sche Färbung weist nach Protagon, die Ueberosmiumsäure Lecithin und Fett, die MARCHi'sche Methode Fett, eine specitische Lecithin- färbung fehlt bis jetzt. Lecithinverbindungen giebt es sehr zahlreiche, im Nervenmark ist das Lecithin vermuthlich als Lecithalbumin vor- handen. Das Lecithin bildet mit Methylenblau eine Verbindung. Es 1Q4 Reterate. XIX, 1. wäre also deukbar, tlass luau mit Methylenblau eine Lecithiufärbung erzielen könnte. Die hierauf gerichteten Versuche des Verf. sind zwar nicht ganz erfolgreich gewesen , immerhin hält er sie für der Mittheilung werth. Wegen des Näheren über die Versuche sei auf das Original verwiesen. In den frischen Nervenfasern färbt Methylenblau die Markscheiden nicht, nur die Achsencylinder (Ehrlich). Nach Behandlung mit lixirenden Flüssigkeiten färben sich aber auch die Markscheiden. Untersucht wurde an Rückenmarkstücken von Kalb oder Schwein. Nach Müller -Fixirung (8 Tage im Thermostaten) werden die Markscheiden mit Methylenblau intensiv gefärbt, und die Farbe geht bei der Entwässerung in Alkohol nicht heraus. Haupt- sächlich wurde jedoch mit Aceton oder Alkohol fixirt. Mit Aceton deshalb, weil Lecithin in Aceton unlöslich ist. Fixirt man in einem Gemisch von Aceton und Formol (9 : 1) oder thut man die Schnitte von einem Acetonstück in diese Mischung für einige Tage , so wird dadurch die Affinität der Markscheiden zu Methylenblau bedeutend verstärkt. Färbt man einen solchen Schnitt mit Methylenblau und d:uiü mit einer gesättigten wässerigen Pikrinsäurelösung, so erhält man dauerhafte Präj^arate ; Markscheiden dunkelrothbraun, alles An- dere gelb. Nur muss man die Differenzirung in Alkohol nicht zu lange fortsetzen (gewöhnlich 4 bis 5 Minuten) , sonst werden auch die Markscheiden hell. Bergamottöl und Xylol ziehen die Farbe nicht aus, man kann also durch Zusatz von Bergamottöl jeden Augen- blick die Entfärbung unterbrechen. Auch nach Mtjller - Fixirung kommt die Methylenblau - Pikrinsäurefärbung zu Stande. Lässt man aber die Schnitte in MtJLLER'scher Flüssigkeit liegen , so verlieren sie bald ihre Färbbarkeit. — Die Alkohol- und Acetonstücke wurden unter den betreffenden Flüssigkeiten geschnitten, die Alkoholschnitte aber sofort in destillirtes Wasser gebracht. Gefärbt wurde 5 bis 10 Minuten in einer gesättigten wässerigen Lösung von Methylen- blau, für Dauerpräparate wird die Färbung fixirt durch molybdän- saures Ammoniak. Für die WEioERT'sche Färbung wurden die Schnitte zuerst ?> Tage im Thermostaten (87 ^) mit MtJLLER'scher Flüssigkeit gebeizt. Es wurde theils nach der ursprünglichen WEiGEux'schen Vorschrift, theils nach der KuLTScmzKi-WoLTERs'schen Modification gefärbt. — Für die oben schon erwähnte Markscheidenfärbung ist die genaue Technik die folgende. Fixirung 4 bis 6 Tage in Formol- Aceton (1:9), Färbung in einer gesättigten wässerigen Methylenblau- lösung (ä bis 10 Minuten), Abspülen in Wasser, gesättigte wässerige Pikrinsäurelösung (eine bis 2 Minuten), Differenzirung in Alkohol XIX, 1. lieferate. ]^q5 (3 bis 4 Minuten, bis die graue Substanz sicli deutlich abhebt), Ber- gamottöl, Balsam, — Ob die beschriebenen Färbungen als Lecithin- reaction anzusehen sind, ist noch nicht sicher, aber wohl möglich. Schiefferdccker {Bonn) . Retterer, Ed., Structure, developpement et fonctions des ganglions lymphatiques (Journ. de l'Anat. et de la Physiol. t. XXXVII, 1901, no. 5, p. 473—539 av. 4 plches.). Man muss Härtungsflüssigkeiten verwenden, die die Mitosen gut conserviren und gleichzeitig auch das Hämoglobin erhalten; die Zen- KER'sche Flüssigkeit erfüllt diese Anforderungen. Verf. legt die frischen Organe in 200 bis 300 cc dieser Flüssigkeit und setzt 3 Procent Eisessig zu. Dann wird das Glas bei 30 bis 36^ in den Ofen gestellt. Nach 3 Stunden wird die Hälfte der Lösung fort- gegossen und durch eine gesättigte, wässerige Sublimatlösung ersetzt. Nach weiteren 3 Stunden kommen die Stücke in eine reine Sublimat- lösung. Es geschieht dieses , um eine länger dauernde Einwirkung der MüLLER'schen Flüssigkeit und der Essigsäure zu vermeiden. Bei grösseren Organen muss man natürlich vor dem Einlegen Einschnitte mit dem Rasirmesser machen. Dann Auswaschen, Alkohol mit Jod- zusatz , Paraftineinschluss , Serienschnitte. Gefärbt hat Verf. zuerst mit Hämatoxylin und Eosin oder Orange. Später mit einer Modi- tication des von Israel und Pappenheim angegebenen Gemisches. Es bestand ursprünglich aus Eosin 6 g. Orange G 2 g, Aurantia 1 g. Verf. hat es vortheilhaft gefunden noch mehr Orange zu- zusetzen. Zu dieser Pulvermischung setzt man die folgende Lösung, die man langsam zugiesst , indem man dabei das Ganze allmählich erwärmt und beständig umrührt: destillirtes Wasser 10 Voll., Gly- cerin und Alkohol je 1 Vol. Sobald die Mischung klar wird, hört man mit dem Erwärmen auf. Man verdünnt diese Mischuns: mit 500 cc destillirten Wassers und lässt die auf dem Objectträger mit Eiweisswasser aufgeklebten Schnitte 12 bis 24 Stunden darin. Nach dem Abwaschen in Wasser noch Färbung in Hämatoxylin oder Thionin oder nach einander mit beiden. Diese beiden letzten Farbstofte färben das Chromatin oder die chromophilen Theile des Protoplasmas dunkelviolett, während Eosiu , Orange imd Aurantia den erwach- senen Hämatieen eine orangegelbe Farbe geben und den Sub- stanzen, die auf dem Wege sind, sich in Hämoglobin umzuwandeln, einen zwischen röthlichviolett und orangeroth liegenden Farbenton 106 Referate. .• XIX, 1. verleilien. Die elastischen Fasern wurden nach Unna und Weigert "•efärbt. Schiefferdecker (Bonn). Sjövall, E., Ueber die Spinalganglienzellen des Igels. Ein neuer Befund von krystalloiden Bildungen in Nervenzellen. Die i n t r a c e 1 1 u 1 ä r e n ,, K a n ä 1 - chcn" -Systeme (Anat. Hefte, H. LVIII, 1901, p. 239 —266 m. 2 Tfln.). Das Material stammte von einem ausgezeichnet ernährten männ- lichen Igel. Unmittelbar nach der Tödtung wurde das gesammte centrale Nervensystem herauspräparirt und in lOprocentiger Formol- lösung aufgehängt. Nach 4 bis 5 Tagen wurde es direct in 95pro- centigen Alkohol übertragen (nach Sjübring^). Einbettung in Paraffin, Serienschnitte von 5 ju. Färbung mit Toluidin - Erythrosin (nach Holmgren) oder mit Eisenhämatoxyliu (nach Heidenhain oder modi- ficirt nach Sjöbring) und Contrastfärbung mit der auch für die erste Färbung benutzten Erythrosinlösung (1 : 1000). Verf. erhielt dabei dasselbe Resultat wie z. B. Holmgren; die von ihm gefundenen Bildungen färben sich nämlich mit Toluidin-Erythrosiu roth, mit Eisen- liämatoxylin schwarz. Obwohl sie bei der ersten Methode weit schwächer hervortreten, hat Verf. sie dabei doch zuerst gesehen. Die Krystalloide halten das Eisenhämatoxyliu sehr intensiv fest. Die SjÖKRiNG'sche Modification leistet ebenso vorzügliche Dienste wie die ursprüngliche HEiDENHAiN'sche Methode ; ihr Hauptvorzug besteht aber darin, dass die Herstellung der Präparate weniger Zeit erfordert. Schiefferdeclxer {Bonn). Stiulllicka, F. K., Beiträge zur Kenntnis s der Ganglien- zellen. IL Einige Bemerkungen über die fei- nere S t r u c t u r der Ganglienzellen aus dem L b u s e 1 e c t r i c u s von Torpedo m a r m o r a t a (Sitz- ber. d. K. Böhm. Gesellsch. d. Wiss. Prag, 1901. — SA. 15 pp. m. 1 Tfl.). Verf. hat an einem Torpedogehirn gearbeitet, das mit Sublimat- Eisessig vorzüglicli conservirt war. — Parafiinschnitte. Sie wurden gefärbt mit DELAFiELo'schem Hämatoxylin , Eisenhämatoxyliu und Methylenldau unter Nachfärbung mit Erythrosin. Von Methylenblau verwandte er eine einfache wässerige Lösung, die ihm dieselben Ke- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVII, 1900, p. 337, XIX, 1. Referate. 107 sultate lieferte wie das NissL'sciie Seifenmethylenblau. Auch mit Eisenhämatoxylin erhielt er vorzügliche Resultate. Die Tigroidkörper- cheii färbten sich hierbei ebenso gut wie durch Methylenblau, nur ist bei diesem das Bild entschieden schöner. Verf. wollte an den Präparaten eigentlich das intracelluläre Kanälchensystem studiren, konnte es aber nicht auffinden, dagegen schöne Fibrillenbilder beob- achten. Er hat dann später noch weitere Exemplare von Torpedo erhalten, von denen er die Lobi electrici theils mit Sublimat-Eisessig, theils mit der KLEiNENBERG'schen, theils mit der PEUENYi'schen Flüssig- keit tixirt hat. Die schönsten Präparate ergab die IvLEiNENBERG'sche Flüssigkeit. Nach der PEUENYi'schen waren die Zellen zu stark ge- quollen und die Tigroidkörperchen , wie es schien , zum Tlieil auf- gelöst. Auch färbten sich dieselben nicht gut. Ein mit Flemming- scher Flüssigkeit conservirtes Stück erwies sich für die vorliegenden Zwecke nicht brauchbar. Auch Alkoholfixirung ergab schlechte Re- sultate. Die übrige Behandlung war wie vorher angegeben. Schiefferdecker (Bonn). Himter , W. , On the presence of nerve-f ihres in the cerebral vessels (Journ. of Physiol. vol. XXVI, 1901, no. 6, p. 465 — 4:69 w. 2 figg.). Es sind verschiedene Versuche gemacht worden, um die Nerven der Blutgefässe im Gehirn aufzntinden. Verf. hat zu diesem Zwecke an jungen Kaninchen von 6 bis 8 Wochen operirt. Er verwandte Methylenblau, das in kleinen Quantitäten einer gesättigten w^ässerigen Lösung subcutan eingespritzt wurde bis die Thiere starben. Die Centralorgane wurden nach der BETHE'schen Molybdatmethode tixirt, in Paraffin eingebettet etc. Die Erfolge scheinen gut gewesen zu sein. Schiefferdecker {Bonn). Cwrabo wer , C , Heber Nervenendigungen im mens c h - liehen Muskel (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LX, 1902, p. 1 — 16 m. 3 Tfln.j. Es zeigte sich, dass nicht nur frisches, 2 Stunden nach dem Tode der Leiche entnommenes Material, sondern auch solches, welches schon 24 Stunden alt war, sofern es nur auf Eis gelegen hatte, noch brauchbar für die Untersuchung war. Die EnRLicH'sche Methylen- blaumethode und die SiHLER'sche Hämatoxylinfärbung Hessen fast voll- ständig im Stich. Recht gute Resultate aber gab die etwas ab- geänderte BREMER'sche Modification der LoEwix'schen Goldmethode. 108 Referate. XIX, 1. Es ist darauf zu achten, dass die Goldoldoridlösung nicht stärker als ^/^procentig ist und die Objecte nicht länger als 10 Minuten darin verweilen. Oft gab schon unbeträchtliche Conceutrationserhöhung und massige Verlängerung der Einwirkungsdauer derartig starke Ueber- färbuug der Muskelfibrilleu, dass die nervösen Endapparate sich nur undeutlich oder gar nicht differenzirten. E. Schoebel (Neapel). LeTiliSOliii , G. , Ueber das Verhalten der Nerven- endigungen in den ä u s s e r e n A u g e n m u s k e 1 n des Menschen (Arch. f. Ophthalmol. Bd. LIII, H. 2, 1901, p. 295—305 m. 1 Tfl.). Es wurde ausschliesslich menschliches Material verwendet, 4 bis 10 Stunden nach dem Tode. Wenn auch keine Methylenblaufär- bung möglich war, so gelangen Goldfärbungen doch ganz gut. Um die Nervenendigungen gut zu sehen, war es nöthig, sie an iso- lirten Fasern zu untersuchen. Diese Isolirung war aber bei den menschlichen Muskeln sehr schwierig; so versagte auch die Sand- MANN'sche Methode^, welche bei Froschmuskeln sehr gute Resultate giebt; Gutes leistet auch die SmLER'sche". Noch zweckmässiger erschien es dabei aber dem Verf. die Muskeln , bevor sie in die Macerationsfiüssigkeit gelangten, für einen bis mehrere Tage in einer etwa einprocentigen Formollösung zu härten. Die Muskeln wurden dadurch widerstandsfähiger und Hessen sich leichter spalten. Aller- dings wurde dann die Verwendung einer concentrirteren Farblösung nöthig. Die SiHLER'sche Methode hat aber den Nachtheil, dass die Muskelfasern nur eine geringe Durchsichtigkeit erlangen, und dass ausserdem die letzten Endigungen der Nerven, die Endplatten, kaum zum Vorschein kommen. Besser waren die Resultate , wenn die Muskeln nach Rouget'^ mit 25procentiger Kochsalzlösung behandelt wurden. Die Isolirung der Fasern ist hiernach allerdings nicht so leicht wie nach der vorigen Methode, die Durchsichtigkeit der Muskel- fasern wird aber in sehr vollkommener Weise erreicht. Aus der Kochsalzlösung kamen die Muskeln auf mehrere Tage in eine Lö- sung von 25- bis öOprocentigem EHRLicn'schen Hämatoxylin. Von dort gelangten sie in Glycerin und wurden nach längerer Ein- wirkung in demselben vorsichtig zerlegt. Die so erhaltenen Bilder 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. II, 1885, p. 403. 2) Arch. f. Anat. u. Physiol. 1885. 3) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 513. XIX, 1. Referate. 109 zeigeil äbnlicli wie nach Sihlek Muskeln , Bindegewebe und Gefässe hellblan, die Nerven dunkelblau gefärbt, die Durchsichtigkeit ist aber eine wesentlich vollkommnere und der Unterschied in der Färbung der einzelnen Gewebstheile auffallender, die Nervenendplatten treten etwas schärfer hervor. Um diese letzteren gut zu sehen, waren die Goldmethoden indessen nicht zu umgehen. Verf. benutzte haupt- sächlich die Methode von Bremer.^ In allen Fällen war eine sehr sorgfältige Zerlegung der Muskelfasern unbedingt nüthig, welche Verf. mit Hülfe der Lupe, eines mit einem Convexglase versehenen Brillen- gestells, ausführte. Schieffenlecker {Bonn). TilHOfejew , D. A. , U e b e r die Nervenendigungen im Bauchfelle und in dem Diaphragma der Säuge- thiere (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LIX, 1902, p. 629 —646 m. 1 Tfl.). Die Untersuchungen wurden hauptsächlich an Meerschweinchen und Kaninchen mittels der EHRLicii'schen Methylenblaumethode aus- geführt. Unter Chloroformnarkose wurde dem Thier eine auf Blut- temperatur erwärmte ^/joprocentige Lösung von Methylenblau in physiologischer Kochsalzlösung in die Aorta injicirt, wobei die Kanüle durch den eröffneten linken Ventrikel eingeführt wurde. Die Blut- gefässe wurden so lange mit Farbstofflösung durchspült, bis aus dem eröffneten rechten Vorhof dieselbe ganz rein, ohne Beimischung von Blut, heraustloss. Bei der Injection grosser Quantitäten einer schwachen Methylenblaulösung sind UeberfüUungen des Gefässsystems und Gefäss- zerreissungen nicht so zu befürchten, wie bei Benutzung concentrirter (ein- bis 3procentiger) Lösungen. Da es gewöhnlich nicht gelingt, das Peritonealblatt für sich von den demselben anliegenden Schichten behufs der Untersuchung frei zu präpariren, so entfernte Verf. nach beendeter Injection die äussere Haut der Bauchwand und darauf die beiden schrägen Bauchmuskeln. Dann wurden grössere Stücke des parietalen Bauchfelles in Zusammenhang mit dem queren Bauch- muskel ausgeschnitten, mit der Bauchfellfläche nach oben auf einen grossen Objectträger gebracht und bei schwachen Vergrösserungen mikroskopisch untersucht. Ein solches Flächenpräparat ist dünn ge- mxg, um ohne weiteres eine Verfolgung der in demselben allmählich eintretenden Nervenfärbung zu gestatten. Nach Eintritt der maxi- malen Färbung der Nerven und Nervenendigungen wurde das Prä- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 40ß. UQ Referate. XIX, 1. parat behufs Fixinmg des Farbstoffes in eine gesättigte wässerige Ammoniurapikratlösimg gebracht, in der es etwa 24 Stunden lang verblieb. Zuweilen wurde behufs Kernfärbung eine geringe Quantität von Hoyer's Pikrocarminlösung (1:5 bis 10) der Fixirungsflüssigkeit zugesetzt. Am folgenden Tage kam das Präparat behufs Aufhellung in eine Mischung von Ammoniumpikratlösung und Glycerin. Nach 24 Stunden oder später breitet man vortheilhaft das Präparat aus, bedeckt es mit einem zweiten Objectträger und lässt es massig be- schwert einige Tage stehen. Dann kann es in kleinere Stücke zer- legt lind diese in der Ammoniumpikrat-Glycerinmischung unter Deck- gläscheu eingeschlossen werden. Die maximale Durchsichtigkeit erhalten die Präparate etwa nach einer bis 2 Wochen. Ganz ent- sprechend wurde mit dem Zwerchfell verfahren. E. Schoehel {Neapel). Nemiloff, A., Zur Frage der Nerven des Darmkanals bei den Amphibien [Nebst einem russischen Resume] (Trudy Spb. Obschtsch. Est. Otd. Sool. i. Fisiol. [Arb. d. St. Petersb. naturforsch. Ges. Abth. f. Zool. u. Physiol.] Bd. XXXII, H. 2, p. 59—88 m. 3 THn.). Verf. verwandte die EHRLicn'sche intravitale Methylenblaufärbung in entsprechender Modification. untersucht wurden Rana temporaria, R. esculenta , Bufo vulgaris , Bombinator igneus , Proteus anguineus, Salamandra maculosa und Siredon pisciformis. Um das von sym- pathischen Fasern gebildete i n t e r c e 1 1 u 1 ä r e Geflecht in den Ganglien zu studiren , verfuhr Verf. in der folgenden Weise. Die Blutgefässe des Frosches wurden mit physiologischer Kochsalzlösung sorgfältig ausgespült. Die Injection geschah dabei durch den Bulbus Aortae, während das Blut aus einer der Hauptvenen auslief. Nach- dem das Thier so vollkommen blutleer gemacht war, wurde die Vene abgeklemmt und eine Methylenblaulösung von ^/j.^ bis ^/^_- Procent injicirt. Die Injection muss eine möglichst vollkommene sein. Nach Beendigung derselben eröffnete Verf. die Bauchhöhle des Frosches und Hess diesen so eine halbe bis eine Stunde stehen. Alsdann schnitt er den Darm aus, brachte ihn auf einen grossen Objectträger und untersuchte mit schwacher Vergrösserung. Um das Austrocknen zu vermeiden, feuchtete er das Präparat von Zeit zu Zeit mit einer ^/-oprocentigen Lösung von Methylenblau an. Sobald eine ge- nügende Färbung des intercellulären Geflechtes eingetreten war, lixirte er das Präparat sofort mit pikrinsaurem Ammonium. — Um XIX, 1. Referate. Hl die E n d i g u n gen in den glatte n M u s Iv e 1 f a s e rn zu studiren, verfuhr Verf. in folgender Weise. 1) Die Endig-ung- der m ar k li alt igen Fasern. Zu- nächst wie bei der vorigen Methode. Nach der Injection wurde der Darm sofort ausgeschnitten, gewöhnlich der Dickdarm wegen seiner dünneren Wandung, er wurde der Länge nach eröffnet und der Inhalt mit einem weichen Pinsel entfernt. Dann wurde er auf dem Object- träger ausgebreitet und mit schwacher Vergrösserung untersucht. Die Färbung erreiclit in der Regel nach 3 bis 5, selten bis 7 Mi- nuten ihr Maximum und beginnt allmählich abzublassen. Es ist daher sehr wichtig, den Färbungsprocess unter dem Mikroskope zu verfolgen , um rechtzeitig tixiren zu können. Bei einer gelungenen Färbung erscheinen gewöhnlich nur die markhaltigen Fasern mit ihren Endverzweigungen in den glatten Muskeln gefärbt. Bei der Fixirung muss man einige Vorsichtsmaassregeln beobachten. Es ist durcliaus erforderlich , den Darm von den Kothmassen zu befreien, ohne aber die Schleimhaut zu verletzen. Verf. wusch mit einem feinen Pinsel , der mit pikrinsaurem Ammonium befeuchtet war, vorsichtig den Darm ab , wobei er sich bemühte , den Kotli aus allen Buchten der Schleimhaut zu entfernen. Nachdem dann das Präparat in einer beträchtlichen Menge (100 cc und mehr) der Lö- sung des Pikrinsäuren Ammoniums ausgespült worden war , kam es in eine frische Menge der Lösung zwecks endgültiger Fixirung (für 24 Stunden). 2) Die Färbung der marklosen Fasern bedarf einer weitaus längeren Zeit. Nach der Injection wird der Darm nicht lierausgeschnitten, sondern im Bauchraum für eine, anderthalb oder 2 Stunden gelassen, dann wird er herausgenommen und fixirt. So wird eine sehr intensive und elective Färbung der Endigungen er- zielt. — Um die Endigungen im Epithel, unter diesem und in der Mucosa zu erhalten, schnitt Verf. 15 bis 20 Minuten nach der Injection verschiedene Abschnitte des Darms aus und fixirte sie theils in pikrinsaurem, theils in molybdänsaurem Ammonium. Auf den in ersterer Lösung fixirten Präparaten löste sich das Epithel ab, und die Endigungen traten ungemein deutlich hervor, doch konnte so natürlich ihr Verhalten zum Epithel nicht wahrgenommen werden, zum Studium dieses letzteren benutzte er Präparate , die in der zweiten Lösung fixirt waren, wobei derselben meist noch etwas Osmiumsäure zugesetzt wurde. — Ausser den echten Nervenzellen finden sich auch solche , die Nervenzellen sehr ähnlich sind , aber 112 Referate. XIX, 1. doch zum Bindegewebe gehöreu. Sie sind vou Ramon y Cajal u. A. fiir Xervenzellen gehalten worden. Diese färben sich ungemein leicht, man braucht dazu gar keine Injectioi zu machen, sondern bringt kleine Darmstückchen einfach in ein mit Methylenblau gefülltes Schli- chen, nach einer oder 2 Stunden sind eine Menge Zellen prächtig gefärl)t. Vm das Verhalten dieser Pseudonervenzellen zu den Ge- fässen zu untersuchen, injicirte Verf. den Fröschen eine Lösung von chinesischer Tusche in physiologischer Kochsalzlösung durch die Aorta und färbte den Darm dann mit Methylenblau. Die Tusche- körnchen Hessen den Verlauf der Gefässe erkennen und die ge- färbten Zellen zeichneten sich mit ihren anastomosirenden Fortsätzen deutlich davon ab. Dass auch die glatten Muskelfasern von solchen Zellen umflochten werden, ist sehr gut an Querschnitten zu er- kennen. Schiefferdecker {Bonn). C. 3fikroorgcniism eu. Weissenberg", H. , Ein registr Iren der B a c t e r iensp i r o- meter (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 2, Bd. VIII, 1902, No. 12, p. 370). Zur Bestimmung der Stickstoffausscheidung denitrificirender Bacterien hat Verf. von R. Fuess, Steglitz bei Berlin, ein selbst- thätig registrirenden Bacterienspirometer nach dem Princip des HuTCHiNSON'schen Apparates construiren lassen. Der Apparat besteht aus einem cylindrischen Glasgefäss, das mit etwa 225 cc concen- trirter Kochsalzlösung gefüllt ist. In diese Flüssigkeit ist ein unten offener, oben geschlossener Tauchcylinder liineingestülpt, der ver- mittels einer Schnur, die über einen Galgen mit zwei Rollen geführt ist , mit einem Geleitschlitten in Verbindung steht , an dem eine Schreibfeder angebracht ist. Beim Heben des Tauchcylinders sinkt der Geleitschlitteu mit der Feder, beim Fallen hebt er sich. Die Bewegungen der Feder werden auf eine sich drehende Registrir- trommel übertragen. Der Apparat wird , vor Erschütterung ge- schützt, in einen Glaskasten in der Nähe des Brutschrankes auf- gestellt, in dem sich das Culturgefäss befindet. Das in diesem sich entwickelnde Stickstoffgas wird mittels eines Gasrohres durch die seitliche Ventilationsöftnung des Brutsehrankes herausgeführt und ge XIX, 1. Referate. 123 langt mittels einer Röbrenüberführiing in den schwimmenden Taiicli- cylinder, verdrängt eine entsprechende Menge Wasser ans demselben, wodurch er steigt. Ein in dem gleichen Behälter befindlicher an- gefeuchteter Schwamm sorgt für genügende Feuchtigkeit der Luft. Durch einen Gashahn der Zuleitungsröhre kann je nach den Be- endigungen des Versuches das angesammelte Gas entfernt werden. Eine Reihe von beigegebenen Curven demonstriren die Empfindlichkeit des Apparates. Friedberger {Königsberg). Ernst, P., Ueber den Bau der Bacterien (Centralbl. f. Ba- cteriol. Abth. 2, Bd. VIII, 1902, No. 1, p. 1). Die vitalen Färbungsmethoden, die Dank der Untersuchungen Arnold's und Anderer auf dem Gebiete der Hämatologie so grosse Fortschritte gebracht haben, scheinen auch geeignet zu sein , in der Morphologie der Bacterien neue Thatsachen in Menge aufzudecken. Die Untersuchungen Ernst's über die feinere Structur der Bacterien wurden an einer grossen Anzahl von Mikroorganismen vorgenommen , zahl- reiche Abbildungen veranschaulichen die gewonnenen Bilder. — Die Methode des Verf. bestand darin , dass eine winzige Spur des Ba- cterienmaterials mit einem Tröpfchen Wasser auf einem Deckglase zerrieben wurde, darauf kam ein dünnes Hollundermarkblättchen, an dessen Rand ein Körnchen des Farbstoffs (Methylenblau oder Neu- tralroth) gelegt wurde. Das Deckglas wurde umgekehrt auf einen hohl geschliffenen Objectträger nach Art eines hängenden Tropfens aufgelegt. Sollte die Wirkung beider Farbstoffe gleichzeitig unter- sucht werden, so wurden Farbpartikelchen an entgegengesetzten Enden des HoUunderraarkblättchens localisirt. Durch das Hollundermark werden Verdunstungen und Verdunstungsströmungen vermieden, ausser- dem ist die Möglichkeit der ungestörten Beobachtung einzelner Exemplare oder Gruppen von Bacterien, die in den Zellen des Marks abgeschlossen liegen, erleichtert. In einer 2 Monate alten Cultur des wurzeiförmigen Bacillus fanden sich stark bewegliche ungefärbte Kügelchen. Allmählich verlieren sie ihre Bewegung, färben sich, und es werden weitere gefärbte Körnchen sichtbar. Aber auch auf der Oberfläche der Bacterien zeigen sich körnige Gebilde ; auch in ganz frischen Culturen lassen sich die Granula beobachten. Sie zeigen sich nicht in allen Bacterien, sondern es kommen auch hyaline Bacterienformen und solche mit wabiger Structur vor. Auch bei frischen Culturen trat mit der Zeit eine Zunahme der gefärbten Körner ein. Neben den gefärbten Pünktchen fanden sich in 4tägigen Zeitschr. f, wiss. Mikroskopie. XIX, 1. 8 -^-^^ Referate. XIX, 1. Ciilturen helUeucliteiule , mittelständige Kügelchen. Die gefärbten Elemente dürften nach der Anschauung von Ernst einem Kernprincip entsprechen, während er die ungefärbten für eine Art „Plasmosom" hält. Zwischen den Kügelchen werden an 8tägigen Culturen fädige Gebilde, die ein netzartiges System darstellen, beobachtet. Bei Megatherium sind mit Methylenblau nur vereinzelte Körnchen nachweisbar. Mit Neutralroth (Gtägige Kartotfelculturen) wurden Figuren dargestellt, die etwas an die Uterinschläuche mancher Band- wurmglieder erinnern. Beim Milzbrand, 7 Monate alte Agarcultur. nehmen die Sporen keine Färbung an; in Bacillen sind nur wenig gefärbte Pünktchen und helle ungefärbte Kügelchen vorhanden, in manchen Exemplaren Wabenstructur ; Stägige Agarculturen (bei Zimmertemperatur gewachsen) zeigen in diöus gefärbten Fäden glän- zende und matte Körnchen und daneben intensiv gefärbte Promi- nenzen, die sich stark vermehren, so dass aus dem Stäbchen ein mit unzähligen Buckeln, Höckerchen und Kügelchen besetztes Ge- bilde wird. Diese Prominenzen sind morphologisch sehr verschieden. Zur Färbung der zuletzt geschilderten Gebilde eignet sich nur das Neutralroth, nicht das Methylenblau. Auch bei Bacillus fluorescens und B. cyanogenus zeigen sich die oben beschriebenen Körnchen und Kügelchen. — Bacillus fluorescens zeigt in einem 24stündigen Präparat einer otägigen Agarcultur viele Stäbchen gekrümmt, zu Ringen geschlossen, die ihrerseits wiederum in Scheibenform über- gehen. In Hefepilzen zeigen sich gleichfalls gefärbte Körnchen und nach aussen halbkuglige Knöpfchen , die öfters etwas gestielt sind ; zum Theil sind sie losgerissen und bewegen sich intensiv im Präparat. Es finden sich auch bei den Hefezellen Formen, bei denen Körnchen und Fäden zu Netzen mit einander verbunden sind. Besonders deutlich tritt dies bei Saccharomyces neoformans (Sanfelice) hervor. Da für die bisher erwähnten Organismen Wasser kein indifferentes Suspensionsmittel darstellt und Bouillon wegen der Niederschlag- bildungen mit Neutralroth sich nicht eignet, so stellte Ernst weiterhin seine Untersuchungen an Wassez-mikroorganismen an, die eine über- raschende Individualität ihrer Structur durch die vitale Färbung offenbarten. Die chromophilen Körner verhalten sich bei den ver- schiedenen Arten, sowohl was ihre Lagerungen im Bacterienleibe als ihre Zahl und Form anlangt, verschieden. Die einzelnen Bacterien- arten zeigten individuell so verschiedene Bilder bei der vitalen Färbung, „dass viel prägnanter als durch Form und Grösse der ein- zelnen Bacterienindividuen die Unterschiede der einzelnen Arten durch XIX, 1. Referate. 115 das verschiedene Verhalten der chromophilen Kürnclien hervorstechen". Er fand in eiuzehien Fällen von oberÜächlich liegenden Körnchen ausgehende borstenähnliche Ausläufer, die mit den Geissein nicht identisch sein sollen. Neben diesem Gebilde beobachtete er aber auch echte Geissein mit Hülfe der vitalen Methode. Er fand Körnchen häufig am Fusspunkt der Geissei, ja im Verlaufe der Geissei selbst. Borstenähnliche Fortsätze siud bei verschiedenen Arten ganz ver- schieden gelagert und gestaltet. Manche Bacterien zeigen ehronio- phile Streifen , häufig in spiraliger Drehung zur Längsachse des Bacillus angeordnet. Versuche mit gefärbten Nährböden gaben negatives Resultat. Aehnlich als wie bei den Bacterien liegen die Verhältnisse bei Fadeupilzen. Auch hier finden sich färbbare Körnchen neben ungefärbten grösseren Kugeln; die kleinen gefärbten Körnchen zeigen die intensivste Beweglichkeit im Innern des Pilzes (bis zum 3. bis 4. Tag der Beobachtung) , die grösseren Kugeln werden mit zunehmendem Umfang unbeweglicher. Neben den erwähnten Gebilden finden sich noch mit Neutralroth gelb färbbare grössere Kugeln und Brocken. Einzelne grössere Körner zeigen intensiver gefärbte bipolare Stellen, die sich übrigens auch bei kleineren manchmal beobachten lassen. An den Körnern konnte ferner das Aussenden und Einreihen von Fortsätzen , Dünnerwerden des Stiels und Treimungen ver- schmolzener Körner beobachtet werden. Sie erleiden auch Form- veränderungen. Den Pilzfäden haften vielfacli Bacterien an , sei es als Ausdruck einer Symbiose, einer Chemotaxis oder nur einer mecha- nischen Adhäsion. Die Natur der chromophilen Körner lässt Ernst noch unentschieden. Vielleicht sind es Gebilde , die den Plasmosomen höherer Zellen (Arnold) entsprechen. Sie beherbergen Stofl:e , die als Reservestofte (Cholestearin , Lecithin , Glykogen) des Bacteriums oder als Secrete resp. Excrete aufzufassen sind. Auf der Affinität eben dieses Inhaltes zu den angewandten Farbstoffen beruht die intensive vitale Färbung der Körnchen. Friedherger (Königsberg). Nakauislii, K.. Leber den Bau der Bacterien (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 3, p. 97). Die gebräuchliche Methode der Bacterienfärbung ist durch das voraufgehende Aufstreichen auf Glas, lufttrockne Fixiren durch chemisch keineswegs indifferente Mittel oder hohe Temperaturen und durch die eventuell noch nachfolgende eingreifende Differenzirung eine viel zu eingreifende Procedur , als dass es mittels derselben gelingen könnte, wirklich präformirte feinere Structurdifferenz des Bacterien- 8* 116 Referate. XIX, 1. leibes tlarzustellen. Die Methode von Xakanishi vermeidet alle diese Momente und färbt die Mikroorganismen direct in den GewebsScäften oder in der Bouillon, in der sie gewaschen sind; nur Material von Culturen von festen Nährböden wird in destillirtem Wasser zuvor aufgeschwemmt. Zur Färbung eignet sich am besten Methylenblau (BB Höchst oder C der Badischen Anilin- und Sodafabrik). Das- selbe wird in concentrirter wässeriger, frisch filtrirter Lösung auf vollkommen glatte, saubere Deckgläser oder Objectträger geträufelt und vor dem völligen Eintrocknen der Lösung mit einem Leinwand- läppchen oder mit Filtrirpapier wieder soweit abgewischt, dass das Grlas einen himmelblauen Ton behält. Man kann auch siedend heisse Methylenblaulösung aufträufeln und den Farbstofiüberschuss mit trockenem Läppchen abwischen. Auf die so präparirten Objectträger kommt ein Tröpfchen des zu färbenden Materials von Stecknadel- kopfgrösse, darüber ein Deckglas, das mit Vaseline oder Cedernöl umrahmt wird , um Verdunstung zu vermeiden. — Der Farbstoff wird von sämratlichen Bacterien aufgenommen, besonders und zwar von den verschiedenen Elementen des Bacterienleibes verschieden schnell und intensiv, sodass im Gegensatz zu den bei der sonst üb- lichen Färbung entstehenden diffusen Bildern hier Ditferenzirungen der einzelnen Elemente des Bacteriums zu Tage treten. Die Färbung gelingt auch an den sonst nur schwer färbbaren säurefesten Arten; eine Verstärkung der Färbung erfolgt durch Zusatz verdünnter Kali- lauge oder Karbolsäure ; ganz allgemein gelingt die Färbung besser an Bacterien, die todt oder im Absterben begriffen sind. (Abtödten durch Formalindämpfe.) Nakanishi hat mit seiner Methode an zahl- reichen pathogenen Mikroorganismen Untersuchungen über die Struc- tur angestellt, deren Resultate im Original nachzusehen sind. Be- züglich seiner Färbungsmethode sagt er: „1. Sämmtliche Bacterien lassen sich in ihrem frischen Zustande mit Methylenblau gut färben, selbst die sonst schwer färbbaren Tuberkelbacillen in kürzester Zeit. 2. Die Färbung ist dabei keine diffuse , wie diejenige bei den ge- Iträuchlichen Methoden, sondern eine feine differenzirte , d. h. die einzelnen Bestandtheile der winzigen Organismen, sowie die Aus- scheidungsproducte derselben nehmen den Farbstoff in verschiedenem Maasse auf." Friedberger {Königsberg). Kedrowski, W. J., Ueber die Cultur des Lepra erregers (Zeitschr. f. Hygiene u. Infectionskrankh. Bd. XXXVH, 1902, p. :y2). XIX, 1. Referate. 117 Kedrowski stellte einen Nährboden speciell zur Züchtung der Leprabacillen, der sich jedoch auch für die Züchtung von Gonokokken, lufluenzabacillen und Tuberkelbacillen eigenen soll, auf folgende Weise her: Ein 18 bis 24 Stunden altes Infus aus einem Theil zerhackter menschlicher Placenta auf die 17.3- his ofache Menge destillirten Wassers (je nach dem Blutgehalt der Placenta) wird durch Chamber- landfilter filtrirt. Diese Hämoglobin, Serumalbumiu und die Extractiv- stofte der Placenta enthaltende Nährflüssigkeit wird in Mischung mit festen oder flüssigen Pepton-haltigen Nährböden benutzt. Auf solchen Placenta - Agar verimpfte Verf. bacilleuhaltiges Blut und excidirte Hautknötchen von Leprösen. Am 2. respective 3. Tage, manchmal auch etwas später , wuchsen Culturen eines in beschränktem Grad säurefesten Bacteriums , das Verf. für den Erreger der Lepra an- spricht. Dafür führt er auch die Thatsache ins Feld, dass von den excidirten und wochenlang in Agar steril eingeschlossenen Haut- stückchen, die mikroskopisch echte Leprabacillen enthielten, dieselben Bacterieu gezüchtet wurden. Die Säurefestiskeit Avar nur bei den frischen Culturen und auch da nur in beschränktem Grad vorhanden. Indem der Bacillus durch die Alkoholbehandlung sich „beinahe gar nicht" entfärbte und je nach der Intensität der Färbung auch gegen- über 2- bis öprocentiger Schwefelsäure sich als resistent erwies; in älteren Culturen nehmen alle Bacterien die Gegenfärbung an. Nur in einzelnen finden sich noch säurefeste Körnchen , die Verf. für identisch hält mit den BABEs'schen Körperchen. Er führt zur Ana- logie eine Reihe von ihm bei Lungenaffectionen gezüchteten säure- fester Bacterien an, die bei Weiterzüchtung gleichfalls das Merkmal der Säurefestigkeit verlieren und dieselbe durch Thierpassage wieder erlangen sollen. Nach mehreren Generationen vermögen die von Kedrowski gezüchteten „Leprabacillen" auch auf gewöhnlichem Nähr- boden zu gedeihen. Auf Agar wuchsen sie alsdann in Form eines feuchten , schleimigen Belags , Oberflächencolonien auf Glycerin-Agar zeigten leicht gezähnten Rand, dunkleres Centrum und hellere Peri- pherie. In Bouillon bildete sich in 2 bis 3 Tagen ein oberflächliches Häutchen, später Klümpchen und Schüppchen in der Flüssigkeit. Die Bacillen erwiesen sich als sehr variabel in der Form imd zeigten in älteren Culturen ausgesprochene Involutionsformen. Die Bacterien sind beweglich. In einem Falle von Lepra , bei welchem die Bacterien culturell ein etwas abweichendes Verhalten zeigten, fand Kedrowski mikroskopische Culturformen , die bei partieller Säurefestigkeit par- tielle Fadenbildungen und Verzweigung, zum Theil auch Kolbenbildung Ug Keferate. XIX, 1. zeigten. Diese Actinomyces- artigen Formen hält er für Entwick- lungsstadien seines Bacillus und ist der Ansicht, dass die Lepra- bacillen ausserhalb des Organismus einen complicirten Eutwicklungs- cyklus durchmachen, und dass die sich verästelnden Formen eines dieser Stadien darstellen. Friedherger {Königsberg). Heim, L., Zum Nachweis der Chol e r ab acterien (Cen- tralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 15, p. 570). Heim hatte schon früher ^ eine für die Cholerabacterien geeig- nete NährfUissigkeit zum Zweck der Anreicherung in der Pepton- kochsalzlösung gefunden. Pepton ist im allgemeinen zur Züchtung der Cholerabacillen der Bouillon überlegen, stellt aber, wie sich namentlich . bei dem schwachen Wachsthum älterer Culturen zeigt, noch keineswegs einen optimalen Nährboden dar. Heim benutzte daher als Nährflüssigkeit ein Blutdecoct, das sich sowohl für das Anreicherungsverfahren in Flüssigkeiten wie zur Züchtung der Cholera- bacterien überhaupt gut eignet. Blutkuchen oder Gesammtblut wird mit der gleichen Menge Wasser in den Dampftopf gebracht, heiss durch ein Tuch colirt und dann filtrirt. Die so gewonnene Nähr-, riüssigkeit besitzt schwach alkalische Reaction : Sterilisation discontinuir- lich oder im Autoklaven ; die Nährflüssigkeit wird mit Agar oder Gelatine (in diesem Falle nochmalige Alkalisirung) zu festen Nähr- böden verarbeitet. Das Wachsthum auf diesen Nährböden ist, wie der Arbeit beigefügte Photogramme demonstriren, stärker als auf den gewöhnlichen für die Züchtungen der Cholerabacillen verwandten Böden. Zusatz von 50 cc Blutdecoct zu 200 Wasser mit 4 g Pepton und 2 g Kochsalz bewirkt ein stärkeres Wachsthum eingeimpfter Choleravibrionen als die einfache Peptonwasserkochsalzlösung, so dass diese Mischung dem früher üblichen einfachen Peptonwasser zur An- reicherung vorzuziehen ist. In dieser Arbeit empfiehlt Heim ferner die Filtration der Agarlösuug durch Watte anstatt durch Filtrir- papier. Es wird zu dem Zweck ein kleines Wattebäuschchen über ein in den Trichter eingesetztes etwa markstückgrosses Drahtnetz gelegt. Friedberger {Königsberg). ^) Heim, L. , Zur Technik des Nachweises der Choleravibrionen (Cen- tralbl. f. Bacteriol. Bd. XII, 1892, No. 11, 12, p. 353). XIX, 1. Referate. 119 2). Botanisches, Bütsclili, 0., Bern erklinge ü über Cy anop Ii y ce en und Bacteriaceen (Arch. f. Protistenk. Bd. I, 1902, p. 41). Zur Untersuchung des Zellenkörpers von Spirillum volutans wurde das Material mit Alkohol getödtet , mit Delafield's Hämat- oxylin gefärbt und in Canadabalsam eingeschlossen. Ausserdem kamen Trockenpräparate zur Verwendung, die mit wässerigem Gen- tianaviolett gefärbt wurden. — Einige Schwefelbacterien , die Verf. ausserdem untersuchte, wurden mit Jodalkohol fixirt und mit Dela- field's Hämatoxylin gefärbt, oder es wurden Trockenpräparate nach LöFFLER hergestellt. Küster {Halle a. 8.). Plaut, H. C. , Züchtung der Trichophy tiepilze in situ (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXXI, 1902, No. 5, p. 213). Die Erzielung von Reinculturen von Trichophytiepilzen war bisher nach den gewöhnlichen Methoden mit den grössten Schwierigkeiten ver- knüpft wegen des Ueberwucherns der Spaltpilze. Plaut gelang die Züchtung selbst bis zur Ektosporenbildung durch Züchtung in situ auf Hautschüppchen oder Haaren. Es werden möglichst frische Haare oder Hautschuppen ohne weitere Vorbehandlung auf flarabirte und wieder abgekühlte Objectträger übertragen. Darüber kommt , nachdem das Material mit einem zweiten sterilen Objectträger platt gedrückt ist, ein steriles Deckgläschen , das mit vier Wachströpfchen an den Ecken auf dem Objectträger befestigt wird. Diese Objectträgerculturen werden in eine feuchte Kammer gebracht. Dieselbe besteht aus einem Teller , in dem sich ein Glasschälchen befindet , auf das der Objectträger gelegt wird. Das Ganze ist mit einer innen mit Fliess- papier austapezirten Glasglocke von 12 cm Durchmesser, 7 cm Höhe überdeckt. Im Glockendeckel hat das Fliesspapier ein Loch um die Cultur beobachten zu können. Der Graben zwischen Aussenwand der Glocke und Innenseite des Tellers ist durch Wasser abgeschlossen. Die Glasglocken sind möglichst flach zu wählen , damit genügende Feuchtigkeit vorhanden ist. Nach 6 bis 11 Tagen ist an dem Haare, resp. an der Epithelschuppe ein Mycelsaum deutlich zu sehen. Zur Weiterimpfung auf einen gewöhnlichen Nährl)oden schneidet man etwas Mycel vom Rande der Schuppe ab und überträgt es auf Mal- 120 Referate. XIX, 1. toseagar. Es ist vor allem eine Benässimg der Objecte durch Coii- denswasser zu vermeiden. Man züchtet deshalb zweckmässig' bei Zimmertemperatur. Für solche Pilze, die nur bei höherer Temperatur gedeihen, muss das Deckgläschen vor dem Condenswasser durch eine Fliesspapierbrücke geschützt werden , die mit Wachs an den freien Enden des Objectträgers befestigt ist. Mit dieser Methode gelang die Züchtung von Favus- und Trichophytiepilzen. Friedberger {Königsberg). Hasseukaiiil) , A., Ueber die Entwicklung der Cysto- k a r p i e n bei e i n i g e n F 1 o r i d e e n (Botau. Zeitg. Bd. LX, 1902, p. 65). Die Untersuchungen des Verf. beziehen sich auf Thuretella Shousboei (Ceramiaceen) und Chylocladia kaliformis (Rhodymenia- ceen). Beide Pflanzen wurden mit vom RATH'scher Lösung tixirt: 500 cc kalt gesättigter Pikrinsäurelösung mischte Verf. mit 5 g Platinchlorid in 5 cc Wasser gelöst, 3 cc Eisessig und 2 g Osmium- Säure. Mit diesem Gemisch, das meistens noch mit 9 Th. Seewasser verdünnt wurde , behandelte Verf. seine Pflanzen 2 bis 5 Minuten lang; dann wurden sie mit 70procentigem Alkohol so lange aus-, gewaschen, bis sie keine gelbe Farbe mehr abgaben. Darauf wurden sie in TOprocentigem Alkohol aufbewahrt. Die Versuche, Thuretella in toto mit KLEiNENBERG'schem Hämatoxylin bei 50^ C. zu färben, führten zu wenig erfreulichen Resultaten , da die Pflanze in ihre einzelnen Zellen zerfiel. Bessere Resultate erzielte Verf. , indem er einen kleinen Zweig auf einem Objectträger mit geringen Mengen einer sehr verdünnten (1 : 2000) Hämatoxylinlösuug nach Kleinen- berg etwa 12 Minuten lang bei gewöhnlicher Temperatur in einer feuchten Kammer stehen Hess. Die Lösung zu verdünnen war bei Thuretella deshalb nothwendig, weil bei Anwendung conceutrirterer Lösungen die Schleimmassen, von denen die Zellen umgeben sind, so stark gefärbt werden, dass man vom Zelleniuhalt wenig sieht. So gefärbtes Material lässt sich — besonders in Glycerin — als Quetschpräparate gut untersuchen. — Bei der Anfertigung von Mikrotomschnitten empfiehlt es sich, reichlich mit Karyogonästen be- setzte Zweige zu bevorzugen. Das sortirte Material wurde folgender- maassen behandelt : „Die Aeste wurden nach kurzem Verweilen in lOprocentigera Alkohol auf einem Blatt Papier so ausgebreitet, dass die einzelnen kleinereu Seitenäste möglichst parallel gerichtet waren, und dann nur wenige Millimeter hoch mit 20procentigem Alkohol XIX, 1. Referate. l-jl vorsichtig bedeckt. Alle 24 Stunden wurde der alte Alkohol durch vorsichtiges Absaugen entfernt und durch neuen ersetzt, der jeweils um 10 Procent stärker war; hat man das Material auf diese Weise in 90procentigen Alkohol übergeführt, so sind die Zweige soweit ge- härtet, dass man sie von ihrer Unterlage loslösen kann, ohne eine Verschiebung der einzelnen Tlieile befürchten zu müssen. In der üblichen AYeise wurden die Zweige nach einander durch absoluten Alkohol und Xylol in Paraffin eingeschlossen und parallel zur Haupt- achse geschnitten. Als brauchbare Schnittdicke erwies sich eine solche von 10 /,t." — Bei der Färbung gab Heidexhaix's Häma- toxylin-Eisenalaun gute Piesultate, das 2 bis 3 Stunden auf die Objecte einwirken musste. Allerdings speichern dabei gewisse Tlieile der Auxiliarzellen den Farbstolf besonders reichlich. Befriedigende Prä- parate erhielt Verf. dadurch, dass die Schnitte zunächst auf 10 Mi- nuten in 2"5procentige Eisenalaunlösung gebracht wurden, dann mit Wasser ausgewaschen und auf 2 Stunden der Einwirkung einer Lösung ausgesetzt wurden, die durch Verdünnung von 20 Tropfen einer reinen, 0'5procentigen Hämatoxylinlösung mit 100 g destillirtem Wasser hergestellt Avurde. Wurden schliesslich die Schnitte einige Augenblicke in einer 2'5procentigen Eisenalaunlösung hin- und her- bewegt, so gelang es, das Plasma gänzlich zu entfärben und die Kerne deutlich sichtbar zu machen. — Bei der Untersuchung von Chylocladia kaliforniis verfuhr Verf. ganz ähnlich. Zur Färbung der Schnitte wurde dagegen Kleinenberg's Hämatoxylin — vier Tropfen in 500 g Wasser — benutzt, in der die Objecte 12 Stunden lang auf 50^ erwärmt wurden. Bei Benutzung von Leitungswasser als Verdünnungsmittel färbten sich nur die Kerne , bei Benutzung von destillirtem Wasser auch die Membranen. — Um die bei dieser Methode eintretende Quelluug der Querwände bei Karyogonästen und Auxiliarzellen zu vermeiden, färbte Verf. ausserdem noch mit Hämat- oxylin und Eisenalaun. Die Schnitte wurden dabei je 10 Minuten in 2*5procentige Eisenalaun- und 0"5procentige Hämatoxylinlösung verbracht — zwischen beiden mit Wasser ausgewaschen. Hiernach wurden die Schnitte so lange (eine bis 2 Minuten) mit Eisenalaun- lösung behandelt, bis das Plasma vollkommen farblos erscheint. Küster {Halle a. S.). Kolli , J. G. , U n t e r s u c h u n g e n über das C a r o t i n u n d seine p h y s i o 1 o g i s c h e B e d e u t u n g in d e r P f 1 a n z e. Leipzig (Bornträger), 1902, 206 pp. 8*^. 122 Keferate. XIX, 1. Im vierteil Abschnitt seines Werkes bespricht Verf. die „Metho- den zum Nachweis des Carotins". — Es lässt sich unterscheiden zwischen directen und indirecten Methoden. Bei den ersteren werden die Carotin anzeigenden Reagentien direct zur Einwirkung auf das betreffende Object gebracht. In Frage kommen 1) concentrirte Schwefelsäure, 2) concentrirte Salpetersäure, 3) concentrirte Salz- säure mit etwas Phenol oder Thymol, 4) Bromwasser oder Brom- dampf. In allen Fällen ist es vortheilhaft, die Schnitte vollkommen trocken anzuwenden, bei 1) und 3) ist diese Bedingung sogar un- erlässlich. „Die beste Art, die zu untersuchenden Pflanzentheile zu trocknen, ist das mehrtägige Verweilenlasseu derselben über Schwefel- säure im Exsiccator; in vielen P'älleu gelingt die Prüfung jedoch auch schon an gut lufttrockenem Material." — Bei den indirecten Methoden wird vor der Behandlung das Carotin zunächst zur Aus- scheidung in Form von Krystallen gebracht ; zu nennen sind die von Molisch empfohlene Kalimethode und die von Frank mitgetheilte Säuremethode. „Bei Licht betrachtet, wird bei beiden Methoden, der Kali- sowie der Säuremethode, das Chlorophyll in eine stabilere Form übergeführt, einerseits in Alkachlorophyll, anderseits in Chlorophyllan und hierbei das vorher gleichsam gebundene — sit venia verbo — Carotin in Freiheit gesetzt und zur Krystallisation gebracht." Im ersten Capitel behandelt Verf. seine Auffassung von der chemischen Natur der Granasubstanz und kommt dabei zu dem Resultat, dass die Graua aller Trophoplastenabkömmlinge aus Fett- säure-Phytosterin-Estern bestehen, in welchen die Chloroplasten- resp. Chromoplasten- Farbstoffe gelöst sind. Diese Auffassung lässt sich auf mikrochemischem Wege beweisen, wenn man die bei der Carotin- Kalimethode (s. o.) sich abspielenden Processe etwas näher verfolgt. Verf. zerlegt den ganzen Process in folgende Phasen: 1) Das alkoholische Kali verseift die Fettsäuren in den Estern, welche die Granamasse ausmachen. 2) Das freigewordene Phytosterin wie die gelösten Farbstofle lösen sich im Alkohol. 3) Durch allmähliches Lösen von Wasser im Alkohol kommen die Phytosterine und Farbstoffe wieder zur Ausscheidung, die sich durch Wasserzusatz beschleunigen lässt. Als gute Objecte zur Nachprüfung des Gesagten empfiehlt Verf. die Blütenblätter von Silphium perfoliatum, Calendula officinalis und besonders Gazanea splendens. Nach Behandlung mit alkoholischer XIX, 1. Referate. 123 Kalilauge fliessen die der Fettsäuren beraubten Granasubstanzeu zu glänzend rotlien Kugeln zusammen. An ihnen unmittelbar oder in ihrer Nähe krystallisirt das Carotin bei fortschreitender Vermengung des Alkohols mit Wasser aus. Die Kugel selbst wird immer heller und verwandelt sich schliesslich entweder direct in einen Phytosterin- sphärokrystall, oder der Sphärit bildet sich anderweitig in ihrer Nähe aus. — In Aether lösen sich die Sphärite sofort. — Bei gleicher Behandlung grüner Chromatophoren spielen sich im wesentlichen die- selben Processe ab, nur kommt es nicht zur Krystallisation des grünen Pigmentes , da sein Kaliumsalz in Wasser löslich ist. Es krystalli- sirt nur Carotin aus. — Phytosteriusphärite erhält man auch bei Behandlung der granaführenden Leukoplasten aus der Epidermis von Agave americana, aus dem Stengelparenchym von Equisetum arvense u. s. w. Auch die Vorgänge, die bei der Säuremethode sich abspielen, werden durch des Verf. Auffassung der Grauanatur verständlich. .,Die Phytosterin-Fettsäure-Ester werden bei langdauernder Einwirkung verdünnter Säuren ebenfalls zerlegt. Das Carotin ist in den meisten verdünnten Säuren vollkommen unlöslich , mitunter sogar in con- centrirten (Eisessig), es kommt zur Krystallisation. Das grüne Pig- ment der Chloroplasten wird häufig in Chlorophyllan umgewandelt werden und unter geeigneten Umständen als solches ebenfalls aus- krystallisiren." Verf. ist geneigt , auch die Bildung der Carotin- krystalle in der lebenden Zelle auf ähnliche Processe zurückzuführen. Es lässt sich hiernach vermuthen, dass auch noch auf anderem Wege das Carotin sich zum Auskrystallisiren wird bringen lassen, z. B. durch Behandlung mit Chloralhydrat. Die Prüfung dieser Frage hat Verf. noch nicht abgeschlossen. Küste?' {Halle a. S.). Webber, H. J. , Spermatogenesis and fecundation of Zamia (ü. S. Depart. of Agricult. Bull. no. 2, Washing- ton 1901). Als Fixirungsmittel benutzte Verf. mit bestem Erfolg Flemming's Gemisch in seiner stärkeren Modification. Die Inhaltsgebilde des Pollenschlauches wurden mit einer (im Verhältniss 1 : 2) verdünnten Lösung, die Archegonien und das sie umgebende Gewebe mit der concentrirten Mischung behandelt. Küster {Halle a. S.). Coli er, C. , Notes on the gametophytes and embryo of Podocarpus (Botan. Gaz. vol. XXXIII, 1902, p. 89). 124 Referate. XIX, 1. Zum Fixireu diente Sublimateisessig; auf 95 Tli. wässeriger Sublimatlösuug kamen 5 Th. Eisessig. — Beim Färben gab eine Mischung von Delafield's Hämatoxylin und Safranin die besten Resultate. Küster {Halle a. S.). Ducamp, L., Recherches sur l'embryogenie des Ara- liacees (Ann. des Sc. Nat., Botanique Ser. VIII, t. XV. 1902, p. 319). Verf. fixirte mit Sublimateisessig, den er durch Zusatz von 4 Th. Essigsäure zu 100 Th. Soprocentigem Alkohol erhielt, in dem Subli- mat bis zur Sättigung gelöst war. Dieses Fixiruugsmittel durchdringt nach Verf. die Gewebe besser als die chromhaltigen Gemische. Flemming's Fixirungsflüssigkeit erwies sich als brauchbar nur bei kleinen Blüten wie denjenigen von Aralia racemosa u. a., als ungeeignet bereits bei Hedera helix, Fatsia japonica etc. Als sehr befriedigend bezeichnet Verf. die mit kochendem Sublimateisessig erhaltenen Resultate. — Die mit Sublimateisessig fixirten Objecto wurden mit Jodtinctur ausgewaschen. Als Lösungsmittel für Paraffin kam beim Einbetten ausser Toluol noch Methylsalicylat zur Verwendung. Die erstere Methode ist nicht nur die einfachere, sondern nach Verf. auch die sicherere, besonders für die mit chromhaltigen Flüssigkeiten fixirten Objecto. — Zum Färben der Mikrotomschnitte diente Heidenhain's Hämatoxylin und einprocentige wässerige Eosinlösung mit 3 Th. 95procentigem Alkohol verdünnt. Viele Präparate wurden in Glycerin aufbewahrt, nachdem sie vorher (nach Francotte) mit einem der folgenden glycerinhaltigen Gemische gefärbt worden waren : I. Wasser 70 g Glycerin 15 „ Alkoliol, 90procentig 15 „ Meth}lgrün Ol ., Essigsäure 1 Tropfen. II. Wasser 70 g Glycerin 15 „ Alkohol, BOprocentig 15 „ Malachit2-rün 0-05 „ ■-»' Vesuvin 0"1 III. Wasser 70 Glycerin 15 n XIX, 1. Referate. 125 Alkohol, OOprocentig 15 g Orange G Ol „ Säurefuchsin O'Ol „ Methylgrün 0-01 ., Essigsäure 1 Tropfen. Küster {Halle a. S.). Gag'er , C. St. , The d e v e 1 o p m e n t o f t h e p ol 1 i n i u m and s p e r m - c e 11 s in A s c 1 e p i a s c o rn u t i D e c a i s n e (Ann. of Bot. vol. XVI, 1902, p. 123). Die halbirten Knospen wurden in Flemming's Chromosminni- essigsäure fixirt (24 Stunden) und 12 Stunden mit Wasser aus- gewaschen. Am besten färbte das Safranin- Gentianaviolett- Orange- Gemisch. — Die Pollenschläuche cultivirte Verf. in 5procentiger Kohrzuckerlösung und fixirte sie nach Flemming. Küster [Halle a. S.). Saito , x\. n a 1 m i s c h e Studie n ü b er w i c h t i g e Faser- pflanzen Japans mit besonderer Berücksich- tigung der B a s t z e 1 1 e n (Journ. Coli, of Sei. Tokyo vol. XV, 1901, p. 395). Verf. beobachtete bei verschiedenen Monokotyledonen, dass sich die Bastzellen mit Millon's Reagens roth färben. Für Bambusa spricht Verf. die Vermuthung aus, dass der Eeaction Ty rosin zu Grunde liege. Küster (Halle a. S.j. jEJ. 3£inei'alogisc7i- Geologisches, Referent: Professor Dr. R. Brauns in Giessen. VValleraiit > F. , S u r u n n o u v e a u modele de r e fr a c t o - metre (Bull, de la Soc. Frang. de Mineral, t. XXV, 1902, p. 54). Der Verf. beschreibt hier kurz ein etwas verändertes Modell eines Refractometers und giebt davon eine leider recht undeutliche Abbildung. Die wesentliche Neuerung besteht in der Einführung eines achtseitigen Prismas , d. h. eines Prismas mit acht Flächen, die alle mit der Basis einen Winkel von 60^ bilden (also wohl eines ]^26 Referate. XIX, 1. Prismas, das die Gestalt einer aclitseitigeu, durch die Basis abge- stumpften Pyramide hat). J?. Branns. Hauswaldt, H. , Interferenzerscheiuungen an doppelt- brechenden K r y s t a 1 1 p 1 a 1 1 e n im c o u v e r g e n t e n polarisirten Licht photographisch aufgenom- men. Mit einem Vorwort von Th. Liebisch. Magdeburg 1902. Die Literferenzerscheinungen, welche doppeltbrechende Krystalle im convergenten polarisirten Licht bei Natriumlicht zeigen, hat zuerst Tu. LiEBiscH in seiner physikalischen Krystallographie nach photo- graphisclien Aufnahmen abgebildet. Auf seine Veranlassung hat Haus- WALDT nun zahlreiche solcher Aufnahmen in grösserem Maassstabe gemacht und bietet eine Ausw^ahl derselben, 132 auf 33 Tafeln, im vorliegenden Atlas dar. Vorausgeschickt werden Erläuterungen über die Lichtquellen , den Apparat und eine Erklärung der dioptrischen Verhältnisse des benutzten Polarisationsapparates. Auf den Tafeln werden alle zur photographischen Wiedergabe geeigneten Interferenzerscheinungen abgebildet, die meisten nach Auf- nahmen im Natriumlicht, einige nach solchen im weissen Licht, manche davon haben mehr theoretisches Interesse. Die ersten 10 Tafehi bringen Interferenzfiguren von inactiven optisch einachsigen Krj^stallen, darunter Kalkspath senkrecht zur optischen Achse im weissen Licht bei gekreuzten und parallelen Nicols . und nach Drehung des einen um 22-^/., und 45^, Kalkspath ^/., mm und 3 mm dick im Natrium- licht, Natriumuitrat senkrecht zur optischen Achse im Natriumlicht. dieselbe combinirt mit einem Viertelundulationsglimmerblättchen zur Demonstration des negativen Charakters der Doppelbrechung, ebenso Apatit ; Zirkon zur Demonstration des positiven Charakters , Kalk- spath unter 80^ 67 Va^ 4.5^ 35 Vi^ 22 V,«, 10^ gegen die optische Achse geneigt und eine Platte parallel zur optischen Achse, alle im Natriumlicht und bei gekreuzten Nicols , ferner Zwillingsplatten von Kalkspath (12 Abbildungen) im Natriumlicht und Kalkspath mit einer Zwillingslamelle nach einer Clleitfläche. Optisch active einachsige Krystalle werden auf 7 Tafeln dar- gestellt. Quarz von verscliiedener Dicke senkrecht zur optischen Achse im weissen Licht und Natriumlicht, bei gekreuzten, parallelen und nicht parallelen Nicols, andere mit verschiedener Neigung gegen die Hauptachse; Quarz combinirt mit Viertelundulationsglimmerblätt- chen, AiRv'sche Spiralen erzeugt durch zwei deichdioke hinter ein- XIX, 1. Referate. 127 ander liegende Platten aus einem linken und einem rechten Krystall, Amethyst im Natriumlicht, Zwillingsplatten von Quarz mit sehr eigen- thümlichen Interferenzerscheinungen. — Von optisch zweiachsigen Krystalleu bringt eine Tafel Aragonit ^/.^ mm und 2 mm dick in Normal- und Diagonalstellung bei Natriumlicht, ebenso andere Cerussit, Kalium-Lithium-Platincyanür, Muscovit, Baryum-Platincyanür, Titanit, von diesem auch eine Aufnahme bei weissem Licht, ebenso Ammonium- Magnesiumphosphat, Topas, Gyps, Sanidin. Au anderen Platten wird der negative und positive Charakter der Doppelbrechung demonstrirt, andere Tafeln zeigen die Interferenzerscheinungen von Platten senk- recht zu einer optischen Achse, von Zwillingen zweiachsiger Krystalle und von Quarz- und Gypsplatten in gekreuzter Stellung. Die Photographien sind unübertroffen an Schärfe und Klarheit, die Schwierigkeiten, die sich der Herstellung von Photographien der Interferenzerscheinungen beim homogenen Licht entgegenstellen, sind hier thatsächlich überwunden, das Werk muss geradezu als ein Kunst- werk bezeichnet werden. R. Brauns. ßiuiie , F. , Bemerkungen über die Druckfestigkeit einigei" Quarz- und Felds path würfe! sowie über die Zugfestigkeit von G 1 i m m e r s t r e i f e n (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 262). Zur Bestimmung der Druckfestigkeit wHirde eine ScHENK'sche Maschine benutzt; die geprüften Quarzwürfel hatten eine Kantenlänge von einem Centimeter, die Drucktlächen gingen der Basis parallel. Bei sorgfältiger Herstellung des Probewürfels und genauester Ein- stellung des Präparats hat der Quarz den ausserordentlichen Druck von 15 000 kg auf 1 qcm ausgehalten, die Würfel brachen erst zusammen, als auf seiner nur 1 qcm grossen Druckfläche das Ge- wicht von anderthalb Waggonladungen ruhte ; der Zusammenbruch erfolgte explosionsartig. Die Druckfestigkeit eines Orthoklaswürfels betrug im Maximum 1700 kg auf 1 qcm, die Zugfestigkeit von Mus- covit reicht an die des Schmiedeeisens heran. R. Brauns. j.>g Neue Literatur. XIX, 1. ^eue Literatur 1. Lehr- und Handbücher. Apathy, St., Die Mikrotechnik der thierischen Morphologie. Eine kritisclie Darstellung der mikroskopischen Untersuchungsmethoden. 2. Abth. Leipzig (Hirzel) 190L 280 pp. S". 7 M. Cajal, S. Ramon y, Elementos de histologia normal y de tecnica micro- gräfica [Elemente der normalen Histologie und der mikrographischen Technik]. 3 ed. Madrid 190L 8". Gorham, F. P., A laboratory course in bacteriology. London (Saunders) 1901. 8". ö sh. Kayser, H., Handbuch der Spectroskopie. Bd. IL Leipzig (Hirzel) 1902. G96 pp. 8« m. 4 Ttln. u. 57 Figg. Mallory, F. B., a. Wright, J. H., Pathological technique. A practical manual for workers in pathological histology and bacteriology. including directions for the Performance of autopsies and for clinical diagnosis by laboratory methods. 2. ed. London (Saunders) 1901. 432 pp. 8". w. 137 figg. 13 sh. 2. Mikroskop und mikroskopische Apparate. a. Neue Mikroskope. Messter, E., Priiparir-:Mikroskop (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. VII, 1902, H. 10, p. 271). Regaud, Cl., Nouveau microscope pour l'etude des coupes en series (Comptes Kend. Assoc. dos Anatomistes 3. Lyon 1901, p. 202j. XIX, 1. Neue Literatur. 129 Wolff hügel , K. , Ein neues Trichinenmikroskop (Zeitschr. f. Fleisch- u. Milchhyg. 1901—1902, H. 3, p. 78). Bakers engineering microscope (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 697). Beck's London microscope (Journ. R. 3Iicrosc, Soc. 1901, pt. 6, p. 694), •Seibert's new microscope for crystallography and petrography (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 694). Seibert's new microscope no. 5 a (Journ. R. Microsc. Soc. 1901 , pt. 6, p. 697). Seibert's preparation microscope (Journ. R. Microsc. Soc. 1901 , pt. 6, p. 699). 1). Ocular. >Ic Gregor - Robertson , J. , Ehrlich's eye-piece for the differential count of red and white corpuscles in stained films (Glasgow med. Journ. vol. LV, 1901, no. 5, p. 339). c. Mikrometersc'hraube. (Marpmaun, G.,) Micrometer screws and tine adjustments as applied to modern Stands (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 699; vgl. Zeit- schr. f. angew. Mikrosk. Bd. VII, 1901, p. 33). d. Tisch. Messter, E., Beweglicher Objecttisch, genannt Kreuztisch (Zeitschr, f, angew. Mikrosk. Bd. VII, 1901, H. 9, p. 230). e, Beleuchtungsapparat, Beiles Lee, A., L'eclairage et l'emploi du condensateur dans la micro- grapliie histologique (La Cellule t. XIX, 1901, 2 fasc. p. 405). Seibert"s cylinder iris diaphragm (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 705). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XIX, 1. 9 130 Neue Literatur. XIX, 1. Sbibert's illuminating apparatus (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. G, p. 704). Watson's universal condenser (Juurn. R. Microsc. Soc. 1901, pt. (3, p. 704). f. Verschiedenes. (Dongier, R.,) Apparat zur Messung der Krümmung und anderer Con- stanten eines optischen Systems (Zeitschr. f. Instrumentenk. Bd. XXI. 1901, H. 12, p. 3(i2 ; vgl. Journ. de Phys. t. X, 1901, p. 2G6). Gordon, J. W., The Abbe diffraction theory (Journ. R, Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 029). L. B. E., Notes on the microscope I (Journ. applied Microsc. vol. V, 1902, no. 1, p. 1(321). (Reynolds, T. O.,) Device for leveling the microscope (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 720; vgl. Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, p. 1458). Thompson, S. P., Some experiments on the zonal aberration of lenses (Arch. Neerland [2] t. VI, 1901, p. 747). 3. Mikrophotographie und Projection. (Aspinwall, J.,) Methods of producing enlargements and lantern slides of microscopic objects for class demonstrations (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 707; vgl. Transact. Amer. Microsc. Soc. vol. XXII, 1901, p. 41). Dennis, D. W., Laboratory photography: Photomicrography II. An appa- ratus adapted to all kinds of work (Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, no. 11, p. 1525). Dennis , D. W. , Laboratory photography : Photomicrography III. (Journ. applied Microsc. vol. V, 1902, no. 1, p. 1618). Hering, K., Ueber die Herstellung stereoskopischer Wandbilder mittels Projectionsapparates (Arch. f. d. ges. Physiol. Bd. LXXXVII. 1901, H. 5—7, p. 229j. (Moll, AV. J.,) Apparat zur scharfen Einstellung des Projections-Mikro- skopes aus einiger Entfernung (Zeitschr. f. Instrumentenk. Bd. XXII, 1902, II. 1, p. 28; vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 129). (Wandolleck, B. ,) New object-holder for photomicrography (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 705; vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 1). XIX, 1. Neue Literatur. 131 4. Präparationsmethoden im allgemeinen. a. Apparate zum Präpariren. Bai'deen, Ch. R., A new carbondioxide freezing microtome (Proceed. Assoc. Amer. Anatomists 1900, p. 171; vgl. auch diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 299). (Birge, E. A.,) Cone net (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 719 : vgl. Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, p. 1405). (Boston, L. N.,) Combined slide and cover-glass forceps (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 718; vgl. Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, p. 143(J). Colin, E., Troicart zur sterilen Entnahme von Gewebtheilen (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 16, p. 625). Eyre, J. W. H. , A new centrifuge for bacteriologlcal work (British Med. Journ. 1901, vol. II, no. 2125, p. 773; vgl. Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 715). Holzapfel, K. , Gestell für Objectträger bei Reihenschnitten (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LIX, 1901, p. 457). (Kreidl, A.,) New stereoscopic loup (Journ. K. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 701; vgl. diese Zeitschr. Bd. XVllI, 1901, p. 10). Nabarro, D. N., A pipette with an improved mechanical device for ac- curately aspirating and delivering small quantities of liquid (Proceed. Phj^siol. Soc. London 1901, march). (Palmer, T.,) New thermo-regulator (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 718; vgl. Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, p. 1449). Regaud, Cl., Adaptation d'un mecanisme ä pedales aux microtomes ä paraffine (Comptes Rend. Assoc. des Anatomistes 3. Lyon 1901, p. 263). Regaud, Cl., Nouveau bain de paraffine chaulfe par l'electricite (Comptes Rend. Assoc. des Anatomistes 3. Lyon 1901, p. 261). (Starlinger, J.,) Neues REiCHERT'sches Schlittenmikrotom zum Schneiden unter Wasser (Zeitschr. f. Instrumentenk. Bd. XXII, 1902, H. 1, p. 31; vgl. diese Zeitschr. Bd. XVII, 1900, p. 435). Tedeschi, A., u. Roselli, A., Der selbstregulirende elektrische Thermostat (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 25, p. 969). Wesenberg, G., Eine einfache Tropfvorrichtung für sterile Flüssigkeiten (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 18, p. 703). Wilson, R. J. , A new animal holder (Proceed. New York Pathol. Soc. new. ser, vol. I, 1902, no. 7, 8, p. 132). Wolflf, B., Eine praktische aseptische Spritze für subcutane Injectionen (Münchener Med. Wochenschr. 1901, No. 43. p. 1702). Electric high-speed centrifuge (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 717). Mounting cabinet (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, p. 6, p. 718). 9* 132 Neue Literatur. XIX, 1. Seibert's loup stand (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 703). Seibert's new demonstration loup (Journ.. R. Microsc. Soc. 1901, pt. (3, p. 703). b. Präparationsmethoden. Bardeen, Ch. R., Born's method of reconstruction by means of wax plates as used in the anatomical laboratory of the Johns Hopkins University (Proceed. Assoc. Amer. Anatomists 1900, p. 193). Bardeen, Ch. R., Use of the material of the dissecting room for scientific purposes (Proceed. Assoc. Amer. Anatomists 1901, p. 203). Burzynski, A., Ueber die Conservirung der Organe in ihren natürlichen Farben (Poln. Arch. f. biol. u. med. Wiss. Bd. T, 1901, H. 1, p. 33). Chamot, E. M., Micro-chemical analysis XVIII, XIX (Journ. apphed Microsc. vol. IV, 1901, no. 11, p. 1529). Dodge, Ch. W., Immersion oil in coUapsible tubes (Journ. applied Microsc. v(d. IV, 1901, no. 12, p. 15G7). Jackson, C. M., Orientation of figures in topographical anatomy (Anat. Anz. Bd. XX, 1901, No. 12, p. 300). Jennings, H. S., Artiticial imitations of protoplasmic activities, and me- thods of demonstrating them (Journ. applied Microsc. vol. V, 1902, no. 1, p. 1597). Kadyi, H. , Das Formaldehyd im anatomischen Institute der Lemberger Universität (Poln. Arch. f. biol. u. med. Wiss. Bd. I, 1901, H. 1, p. 16). Knap, W. H., Elementary medical micro-technique (Journ. applied Microsc. vol. V, 1902, no. 1, p. 1608). Krause, W,, Orientirung von Abbildungen (Sitzber. d. Gesellsch. Naturf. Freunde Berhn 1901, No. 8, p. 199). Lindner, P., Die Adhäsionscultur, eine einfache Methode zur biologischen Analyse von Vegetationsgemischen in natürlichen oder künstlichen Näln-substraten (Wochenschr. f. Brauerei 1901, No. 41, p. 512). Marpmann, G., Eine neue Conservirungsflüssigkeit für zoologische Ob- jecte (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. VII, 1901, H. 9, p. 235). (Neisser, M., u. Wechsberg, Fr.,) Ueber eine einfache Methode zur Be- obachtung von Schädigungen lebender Zellen und Organismen [Bio- skopiel (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 16, p. 633; vgl. Münchener Med. Wochenschr. 1900, No. 37, p. 1261). Pearl, R. , and Weld, L. W., Notes on technique 1, 2 (Journ. applied Microsc. vol. V, 1902, no. 1, p. 1613). Rhonstein, R. , Eine einfache Conservirungsmethode für die Zwecke der klinisch mikroskopischen Diagnostik (Fortschr. d. Med. Bd. XX, 1902, No. 2, p. 41). Rossi, U., Sulla tecnica delle sezioni seriah in paraffina [Zur Technik der Paraffinserienschnitte] (Ann. d. Fac. di Med. e Mem. deU'Acad. med.- chir. di Perugia vol. XII, 1900, fasc. 1, 2, p. 7). XIX, 1. Neue Literatur. I33 (Sabin, F. R.,) Modelling and reconstruction metliod (Journ. R. Microsc. Suc. 1901, pt. G, p. 712; vgl. Johns Hopkins Hosp. Reports vol. IX, 1901, p. 925). Weber, A., Notes critiques sur l'etalement et les deformations des coupes ä la paraffine (Comptes Rend. Assoc. des Anatomistes 'S. Lyon 1901, p. 72). Acid-free cement f Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. (J, p. 721; vgl. Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. VII, 1901, p. 102). c. Reactions- und Tinctionsmethoden. Forgan, W. , Simple method of staining a large field of view witli tlie Compound microscope (Proceed. Scottish Microsc. Soc. vol. III, 1901, p. 32). (Häri, P.,) Modification of Hoyer's tliionin stain (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 714; vgl. Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LVIII, 1901, p. 678; diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 311). Herxheimer, G. , Ueber Fettfarbstoffe (Deutsche Med. Wochenschr. Bd. XXVII, 1901, No. 36, p. 607; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 6C)). (Kisskalt, C.,) Modification of Gram"s method (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 714; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, p. 281; diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 309). Michaelis, L., Bemerkungen zum Aufsatz von Karl Reuter (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 16, p. 626; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 68). Michaelis, L., Zur Theorie der Fettfärbung (Deutsche Med. Wochenschr. Bd. XXA' II, 1901, No. 44, p. 759 ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 67). (Spuler , A.,) New staining method (Journ. R. Microsc. Soc. 1901 , pt. 6, p. 714; vgl. Deutsche Med. Wochenschr. Bd. XXVII, 1901, p. 116; diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 183). 5. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. a. Niedere Thiere. Cook, M. T., Method for rearing Amceba (Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, no. 12, p. 1566). Friedemann, O., Untersuchungen über die postembryonale Entwicklung von Aurelia aurita (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXI, 1902, {). 227; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 71). -. Qi Neue Literatur. XIX, 1. (Goldfuss, O.,) Killing and preserving sliigs (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. (!, p. 712; vgl. Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. VII, 1901, p. 85). Goldschmidt, R., Untersuchungen über die Eireifung, Befruchtung und Zelltheilung bei Polystomum integerrimum Rud. (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXI, 1902, p. 397; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 73). Golowin, E. P., Nabljudenija nad nematodanii. I. Fagozitarnye organye [Beobachtungen über Nematoden. I. Phagocytäre Organe] (Mem. de rUniv. Imp. de Kazan 1901; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 19o2, p. 73). Hartmann, M., Studien am thierischen Ei. I. Ovarialei und Eireifung von Asterias glacialis (Zool. Jahrb. Abth. f. Anat. u. Ontogen. Bd. XV, 1902, p. 793; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 72). Hintze, R., Lebensweise und Entwicklung von Lankesterella minima (Chaussat) (Zool. Jahrb., Abth. f. Anat. u. Ontogen. Bd. XV, 1902, p. 693; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 70). Holmgren, E., Beiträge zur Morphologie der Zelle. I. Nervenzellen (Anat. Hefte, I. Abth., H. LIX, 1901, p. 2G9; vgl. diese Zeitschr. Bd. XLS, 1902, p. 79). Holmgren, E., Ueber das Verhalten des Chitins und Epithels zu den unterliegenden Gewebearten der Insecten (Anat. Anz. Bd. XX, 1901, No. 19, 20, p. 480; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 78). Pause, O., Chromatinfärbung (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 21, p. 804; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 69). Peters , A. W. , Some methods for use in the study of Infusoria (Amer. Naturalist vol. XXXV, 1901, no. 7, p. 553). Petrunkewitsch, A., Die Reifung der parthenogenetischen Eier von Artemia salina (Anat. Anz. Bd. XXI, No. 9, p. 256 ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 79). Prowazek, S. , Die Chromatophoren der Kopffüsser (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. VII, 1901, H. 8, p. 197). Tischler, G. , Ueber Heterodera-Gallen an den Wurzeln von Circaea lute- tiana L. (Ber. d. Deutschen Botan. Gesellsch. Bd. XIX, 1901, General- versaraml.-H. p. [95]; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 72). Tönniges, C, Beiträge zur Spermatogenese und Oogenese der Myriapoden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXI, 1902, p. 328; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 78). (Willcox , M. A.,) Rapid method for making slids of Amceba? (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 711; vgl. Journ. applied Microsc. voL IV, 1901, p. 1450). (Zaubitzer, H.,) Cultivation of Amoeba3 fJoiirn. R. Microsc. Soc. 1901, p. 6, p. 710; vgl. Arch. f. Hygiene 1901, No. 2). XIX, 1. Neue Literatur. 135 b. Wirbeltliiere. Anglade, D. , et Morel, Ch. , Sur un nouveau procede de coloration de la nevroglie (Journ. de Neurol. 1901, no. 10, p. 191 ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 484). Arnold, J., lieber feinere Structuren der Leber, ein weiterer Beitrag zur Granulalehre (Virchow's Arch. Bd. CLXVI, H. 2, 1901, p. 533; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 91). Arnold, J., Zur Kenntnis der Granula der Leberzellen (Anat. Anz. Bd. XX, 1901, No. 8, 9, p. 226-, vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 90). Bing, H. J., u. Eilermann, V., Zur Mikrochemie der Markscheiden (Arch. f. Anat. u. Physiol. 1901, H. 3, 4, p. 256 ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 103). Buffa, Su un nuovo metodo di determinare la resistenza dei globuli rossi del sangue [Ueber eine neue Methode, die Widerstandsfälligkeit der rothen Blutkörperchen zu bestimmen] (Giern. R. Accad. di Med. Torino vol. LXIV, 1901, no. 2, p. 76). Caguetto, G., Sulla reazione del guaiaco in presenza di alcune varietä di leucociti [Ueber die Guajakreaction bei Gegenwart einiger Leuko- cytenvarietäten] (Arch. per le Sc. Med. vol. XXVI, fasc. 2, 1902, p. 211). Dexler, H., Zur Präparationstechnik der Organe des Centralnervensystems (Zeitschr. f. Thiermed. Bd. V, 1901, H. 5, 6, p. 361). Enderlen u. Justi, Beiträge zur Kenntniss der ÜNNA'schen Plasmazellen (Deutsche Zeitschr. f. Chirurgie Bd. LXII, H. 1, 2, 1901, p. 82; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 98). Ewing, J. , Contribution to the pathological anatomy of malarial fever (Journ. of Exper. Med. vol. VI, 1902, no. 2, p. 119). Gerhardt, IT., Die Keimblattbildung bei Tropidonotus natrix (Anat. Anz. Bd. XX, No. 10, 11, 1901, p. 241; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 89). Godlewski jun., E., Die Entwicklung des Skelett- und Herzmuskelgewebes der Säugethiere (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LX, 1902, p. 111; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 82). GraboAver, C, Ueber Nervenendigungen im menschlichen Muskel (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LX, 1902, p. 1; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 107). Harris, H. F., A new method of staining elastic tissue (Proceed. Pathol. Soc. of Philadelphia N. S. vol. IV, 1901, no. 7, p. 167). Hirsclifeld, H., Ueber die Entstehung der Blutplättchen (Virchow"s Arch. Bd. CLXVI, H. 2, 1901, p. 195; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, ■ p. 95). Heuser, G. L., General methods for the study of the nervous System (Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, no. 12, p. 1557). Hunter, W., On the presence of nerve-fibres in the cerebral vessels (Journ. of Physiol. vol. XXVI, 1901, no. 6, p. 465; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 107). X36 Neue Literatur. XIX, 1. Ito, Zur vitalen Färbung des Blutes (Allg-. Med. Central -Zeitg., 1901, No. 101, p. 1185; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 94). Kadyi, H., Ueber die Färbung der nervösen Centralorgane nach Beizung mit 8alzen schwerer Metalle (Poln. Arch. f. biol. u. med. Wiss. Bd. I, 1901, H. 1, p. 55; vgl. auch diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 483j. Kishi, K., Das Gehörorgan der sogenannten Tanzmaus (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXXl, 1902, p. 457; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 100). Knaj»i), R., Beiträge zur Färbung des Harnsedimentes mit alizarinsulfon- saurem Natron (Centralbl. f. innere Med. Bd. XXIII, 1902, No. 1, p. 1). KorflF, K. V., Zur Histogenese der Spermien von Phalangista vulpina (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LX, 1902, p. 232; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 90). Ledermaun, R., Ueber die Fettsecretion der Schweissdrüsen an den Hinter- pfoten der Katze (Arch. f. Dermatol. u. Syphihs Bd. LVIII, 1902, H. 1, 2, p. 159; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 8G). Lefas, E., Sur un procede simple de coloration des fibres elastiques dans les coupes d'organes (Bull, et Mem. Soc. d'Anat. Paris t. LXXVI [Ser. 6, t. HI], 1901, no. 7, p. 481). Leishman , W. B. , Note on a simple and rapid method of producing Romano WSKY staining in malarial and other blood films (British med. Journ. 1901. vol. II, no. 2125, p. 757; vgl. Journ. R. Microsc. Soc. 1901, ])t. G, p. 715). Levlnsohu, G., Ueber das Verhalten der Nervenendigungen in den äusseren Augenmuskeln des Menschen (Arch. f. Ophthalmol. Bd. LIII, H. 2, 1901, p. 295; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 108). Löwit, M., Die parasitäre Natur der Leukämie (Centralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XII, 1902, No. 22, p. 913). Meyer, S., Eine Eisenimprägnation der Neurofibrillen (Anat. Anz. Bd. XX, 1902, No. 21, p. 535; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 101). (Michaelis, L.,) Ueber den Chemismus der Elastinfärbung und seine prak- tische Anwendung auf Sputumpräparate (Monatsh. f. prakt. Dermatol. Bd. XXXIII, 1901, No. 12, p. G40; vgl. Deutsche Med. Wochenschr. 1901, No. 14; diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 310). Michaelis, L. , u. AVoIff, A., Die Lymphocyten. Ein Beitrag zur Frage nach ihrer Specificität (Deutsche Med. Wochenschr. Bd. XX VII, 1901, No. 38, p. G51; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 9G). Minervini, R. , Modificazioni del metodo di Weigert per la colorazione specifica del tessuto elastico [Abänderungen der WEiGERT'schen Methode zur specifischen Färbung des elastischen Gewebes] (Bull. R. Accad. Med. di Genova vol. XVI, 1901, no. 1, p. 20; vgl. diese Zeitschr. Bd. XVHI, 1901, p. IGl). Negri, A. , Osservazioni sulhi sostanza colorabile col rosso neutro nelle ematie dei vertebrati [Beobachtungen über die mit Neutralroth färbbare Substanz bei Wirbelthier-llämatienJ (Mem. R. Inst. Lombardo di Sc. e Lett. vol. XIX, [X, 3], fasc. 8, 1902, p. 145). Nemilutf, A. , Zur Frage der Nerven des Darmkanals bei den Amphibien [Nebst einem russischen Resume] (Trudy Spb. Obschtsch. Est. Otd. XIX, 1. Neue Literatur. 137 Sool. i Fisiol. [Arb. d. St. Petersb. naturforsch. Ges., Abtli. f. Zool. u. Physiol.] Bd. XXXII, H. 2, p. 59; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 110). Papi)enheim, A., Eine panoptische Triacidfärbung (Deutsche Med. Wochen- schr. 1901, No. 4G; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 95). Pappenheim, A. , Wie verhalten sich die ÜNNA'schen Plasmazellen zu LymphocytenV (Virchow's Arch. Bd. CLXVI, 1901, p. 424; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 98). Patellani, S. , Moditicazioni del metodo di Mallory per la colorazione del tessuto connettivo [Abänderungen der MALLORy'schen Methode zur Färbung des Bindegewebes] (Gazz. degli Ospedali vol. XXII, 1901, no. GG, p. 993). Rawlins , B. L. , A few remarks on the technic of blood preparations (Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, no. 11, p. 1324; vol. Y, 1902, no. 1, p. IGIO). Reddiugius, R, A. , Die Zellen des Bindegewebes (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd. XXIX, II. 3, 1901, p. 405; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 81). Retterer, Ed., Structure, developpement et fonctions des ganglions 1} mpha- tiques (Journ. de l'Anat. et de la Physiol. t. XXXYII, 1901, no. 5, p. 473; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 105). Scliir.schoff, D., Beitrag zur Kenntniss der zellförmigen Elemente der Ei- häute bei Vögeln (Beitr. z. pathol. Anat. u. z. allgem. Pathol. Bd. XXIX, H. .3, 1901, p. 414; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 87). Schwalbe , E. , Technische Bemerkung zur Carmint'iirbung des Central- nervensystems (Centralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XII, 1902, No. 21, p. 881). Schwalbe, E., Ueber Eisen in Carcinomzellen (Centralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XII, 1902, No. 21, p. 874). Schwalbe, E., Zur Blutplättchenfrage (Anat. Anz. Bd. XX, 1901, No. 15, IG, p. 385). (Scott, G.,) Formalin or other fixing vapour foUowed by absolute alkohol as a wet method for blood films (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1. Bd. XXXI, Ref., 1902, No. 2, p. 54 ; vgl. Journ. of Pathol. a. Bacteriol. 1900). Sjövall, E. , Ueber die Spinalganglienzellen des Igels. Ein neuer Befund von krystalloi'den Bildungen in Nervenzellen. Die intracellulären „Kanälchen"-Systeme (Anat. Hefte, H. LVIII, 1901, p. 239; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 106). Stewart, G. N., A contribution to our knowledge of the action of saponin on the blood corpuscles and pus corpuscles (Journ. of experim. Med. vol. VI, 1902, no. 3, p. 257). Stransky, E., Zur Conservirung von Faserfärbungen (Neurol. Centralbl. Bd. XX, 1901, No. 21, p. 983; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 101). Studnicka. F. K., Beiträge zur Kenntniss der Ganglienzellen. II. Einige Bemerkungen über die feinere Structur der Ganglienzellen aus dem Lobus electricus von Torpedo marmorata (Sitzber. d. K. Böhm. Ge- sellsch. d. Wiss. Prag, 1901 ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 106). 138 Neue Literatur. XIX, 1. Szili, A. , Zur Anatomie und Entwicklungsgeschichte der hinteren Iris- schichten, mit besonderer Berücksiclitigung des Musculus sphincter iridis des Menschen (Anat. Anz. Bd. XX , 1901 , No. 7 , p. IGl ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 100). Tarclietti, €., Di un nuovo metodo per diflerenziare il sangue umano da quelle di altri animali [lieber eine neue Methode zur Differenzirung des menschlichen Blutes von dem anderer Thiere] (Gaz. degli Osped. vol. XXII, 1901, no. 6, p. 631 ; Boll. R. Accad. med. di Genova vol. XVI, IIIOI, no. 4, p. 117). Tiniofejew, D. A., Ueber die Nervenendigungen im Bauchfelle und in dem Diaphragma der Säugethiere (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LIX, 1902, p. 629; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 109). (Uhlenlmth.) Method for distinguishing between different kinds of blood (Journ. ß. Microsc. Soc. 1901, pt. (), p. 721 ; vgl. Deutsche Med. Wochen- schr. Bd. XXVII, 1901, p- 82). Vignolo-Lutati , C, Experimentelle Beiträge zur Pathologie der glatten Musculatur der Haut (Arch. f. Dermat. u. Syphilis Bd. LVII, H. 3, 1901, p. 323; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 83). Wolff, M., Ueber die EHRLicn'sche Metlijdenblautarbung und über Lage und Bau einiger peripherer Nervenendigungen (Arch. f. Anat. u. Phy- siol.; Anat. Abth. 1902, p. 155). e. Mikroorganismen. Antoni, F., Om den Gramska färgnings-metodens förhaallande tili gono- kokkerna [Ueber die GßAM'sche Färbungsmethode, auf Gonokokken ungewandt] (Hygiea 1901, Febr.). Bajardi, A., La tecnica della distribuzione dei liquidi in bacteriologia e le applicazioni della „Pera Centanni" [Die Technik der Flüssigkeitsver- theilung in der Bacteriologie und die Anwendungen der P. C] (Ann. d'Igiene Sperim. vol. XI, 1901, fasc. 4, p. 537). Bazialli, F., Sulla riduzione del colore fusco-indaco-carminico da parte di ciilture bacteriche [Ueber die Reduction der Fuchsin -Indigcarmin- Farbe durch Bacterienculturen] (Gaz. degli Osped. 1901, maggio). Biffl, U., A proposito di un nuovo metodo di isolamento del bacillo del tifo [Ueber eine neue Isolirungsmethode des Typhusbacillus] (Riforma med. 1901, no. 213, p. 748). Biot, Nouvelle methode de coloration intensive des bacilles de Koch (Comptes Rend. Assoc. des Anatomistes 3. Lyon 1901, p. 234). Bosse, B., Eine Nachprüfung der DEYCKE'schen Nährböden (Centralbl. f. Bacteriol. Abtii. 1, Bd. XXX, No. 21, p. 798). Cahu, Ueber die nach Gram färbbaren Bacillen des Säuglingsstuhles (Cen- tralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 19, p. 721). XIX, 1. Neue Literaftur. 139 Casagrandi , O., Tecnica della concentrazione dei liquidi in bacteriologia [Technik der Concentration der Flüssigkeiten in der Bacteriologie] (Ann. d'Ig-iene Sperim. vol. XI, 1901, fasc. 4, p. 529). Casagrandi, O., Tecnica per l'allestimento di culture su materiale poroso imbevuto di soluzioni nutritive diverse [Ueber die Herstellung- von Culturen auf porösem mit verschiedenen Nährlösungen durchtränktem Material] (Giorn. R, See. Ital. d'Igiene 1901, no. 9, p. 412). Engel, C. S., Kurzer Abriss der bacteriologischen Technik (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. VII, 1902, H. 10, p. 254). Ernst, P., Ueber den Bau der Bacterien (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 2, Bd. VIII, 1902, No. 1, p. 1 ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 113). (Eyre, J. W. H. ,) Method tbr rapid Solution of gelatin and agar in the preparation of nutrient media (Journ. R. Microsc. Soc. 1901 , pt. 6, p. 709; vgl. British Med. Journ. 1901, vol. II, p. 788). Fraenkel, C, Zum Nachweise der Milzbrandbacillen (Hygien. Rundsch. 1901 , No. 13 ; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1 , Bd. XXXI , Ref., 1902, No. 1, p. 24). Gage, St. de M., Notes on testing for Bacillus coli in water. Test for B, coli in large volumes (Journ. applied Microsc. vol. IV, 1901, no. 8, p. 1403). Grimbert, L. , et Legros , G. , Sur un milieu lactose, destine ä remplacer le petit-lait tournesole de Petruschky (Comptes Rend. Soc. de Biol. 1901, no. 32, p. 912). Hawksley, T., Method of using the new graduated pipette with screw corapressor for performing the typhoid serum test [Widal reaction] — London 1901. 8 pp. 8*^. (Hayaschikawa, J.,) Die Verwendbarkeit der Harngelatine zur Züchtung der Typhusbacillen (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXXI, Ref., 1902, No. 2, p. 53; vgl. Hygien. Rundsch. 1901, No. 19, p. 925; diese Zeitschr. Bd. XVHI, 1901, p. 3G9). (Herman.) New apparatus for cultivating anaerobes (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. G, p. 709; vgl. Bull, de l'Acad. Roy. de Med. de Belgi- que t. XV, 1901, p. 259). (Hoff, H. J. van't,) Raising the melting-point of gelatin by means (»f for- malin (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 719; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, p. 368; diese Zeitschr. Bd. XVHI, 1901, p. 3(34). ( Holub , C. V.,) Insects as living substratum for cultivating infectious dis- eases of man and animals (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 710; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, p. 284). Hunter, W. , The diagnosis of the presence of Bacillus coli communis by uicans of neutral red (British Med. Journ. 1901, no. 2125, p. 791). (Joclimann, G.,) Acid media for cultivating tubercle bacilli (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. G, p. 710; vgl. Hygien. Rundsch. 1901, No. 1). iKedrowski, W. J.,) Ueber die Cultur der Lepraerreger (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXXI, Ref., 1902, No. 3, p. 90; vgl. Zeitschr. f. Hygiene u. Infectionskrankh. Bd. XXXVII, 1901, p. 52; diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 116). Klein, A., Method of counting bacteria and some applications thereof 240 Neue Literatur. XIX, 1. (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 720; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXIX, 1901, p. 72; diese Zeitsclir. Bd. XVII, 1900, p. 509). (Lepierre, C.,) Glucoproteins as cultivation media for micro-organisms (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. G, p. 709; vgl. Comptes Rend. de l'Acad. des Sc. Paris t. CXXXIII, 1901, p. 113). (Makgill, R. H.,) Neutral red for detecting- Bacillus coli in water (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. 6, p. 715; Journ. of Hyg. vol. I, 1901, p. 430). (Müller, A.,) lieber die Verwendung des von Hesse und Niedner em- pfohlenen Nährbodens bei der bacteriologischen Wasser Untersuchung (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 23, p. 882; vgl. Arch. f. Hj-giene Bd. XXXVIII, 1900, H. 4, p. 791). (Nakanishi, K.,) Method for demonstrating the structure of Bacteria (Journ. R. Microsc. Soc. 1902, pt. G, p. 720; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, p. 98; diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 115). Neucki, L., o Podczaski, T. , odröznianiu lasecznika Kocha od la- secznika smegmae [Differentialdiagnose des Tuberkel- und des Smegma- bacillus] (Gaz. lekarska 1901, no. 45; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXXI, Ref., 1902, No. 3, p. 90). Niesseu, M. v. , Eine einfache Culturmethode für den Gonococcus (Arch. f. Dermatol. u. Syphilis Bd. LVII, 1901, H. 3, p. 429). Peirce, G. J., Staining Bacteria in the root tubercies of leguminoiis plants (Journ. applied Microsc. v(^l. IV, 1901, no. 11, p. 1528). (Peppler, A.,) Piorkowski's method of detecting typhoid bacilli (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. (j, p. 721 : vgl. Botan. Centralbl. Bd. LXXXVI, 1901, p. 182). Petterson , A. , Ein sichtbarer Nachweis von Alexinwirkungen (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 19, p. 72G). (Pitfleld, R. L.,) Ammonium persulfate as a decolorising fluid for staining spores and Sputum (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. G, p. 713; vgl. Philadelphia Med. Journ. vol. VII, 1901, p. 872). (Plato, J.,) Ueber Gonokokkenfärbung (Monatsh. f. prakt. Dermatol. Bd. XXXIII, 1901, No. 12, p. G40; vgl. Allgem. Med. Centralzeitg. 1900, No. 88; diese Zeitschr. Bd. XVII, 1900, p. 112). Puschtschiwy, B. , Einige Worte aus Anlass der Publication Dr. Radke- wiTSCii's und ergänzende Mittheihingen zu der Arbeit über den Kar- toffelsaft (Eshenedelnik 1901, no. 8) [Russisch]. (Räbiger,) Eine neue färberische Darstellung der sogenannten Kapseln der Milzbrandbacillen (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd^ XXX, 1901. No. 24, p. 937; vgl. Zeitschr. f. Fleisch- u. Milchhyg. Bd. XI, 1901, No. 3, p. 68). Rickards, B. R.,) Apparatus and method for rapidly staining large numbrc of sputum specimens (Journ. R. Microsc. Soc. 1901, pt. G, p. 712; vgl. Journ. Boston Soc. of Med. Sei. vol. V, 1901, p. 391). Roseufeld, A., Ueber die Involutionsformen einiger pestähnlicher Bacterien auf Kochsalzagar (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 17, p. G41j. XIX, 1. Neue Literatur. 142 Rosenthal, G., Separation des raicrobes anaerobies cultives en tubes de gelose profonde par Tisoleraent et le lavage en boite de Petri (Comptes Eend. Soc. de Biol. 19U1, no. 33, p. 941). Saveljeff, S. T., Zur Frage der Differentialdiagnose zwischen dem Bacillus coli und typhi (Protok. d. Sitz. d. kaiserl. kaukasischen med. Gesellsch. 1900, no. IG, p. 454 [Russisch]; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 17, p. (375). Smith, L., Flagella staining with night blue (Journ. of Med. Research vol. VI, 1901, no. 2, p. 341). Unna, P. G., Ueber die feinere Structur der Kokken (Deutsche Med.-Zeitg. 1901, No. 44). Vallet, G., Une nouvelle technique pour la recherche du bacille typhique dans les eaux de boissons (Arch. de Med. exper. et d'Anat. pathol. 1901; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXXI, Ref., 1902, No. 3, p. 89). Vriens, J. G. C. , Erhöhung des Schmelzpunktes der Nährgelatine mittels Formalin (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 19, p. 741). Walbaum , H. , Zur Methodik der bacteriologischen Wasseruntersuchung, mit Angaben über Bereitung des Nähragars (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 21, p. 790). (Waldvogel,) Zur Teclmik der Tuberkelbacillenfärbung (Centralbl. f. Ba- cteriol. Abth. 1, Bd. XXX, 1901, No. 18, p. 711). Weissenberg, H,, Ein registrirender Bacterienspirometer (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 2, Bd. VIII, No. 12, p. 370; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 112). (Yoiing, H. H.,) Culture of Gonococcus (Journ. R. Microsc, Soc. 1901, pt. (j, p. 710; vgl. Johns Hopkins Hosp. Reports vol. IX, 1900, p. 677). Zinno , A., Beitrag zum Studium der Entstehung der Toxine, mit beson- derer Berücksichtigung neuer Culturböden mit starker Erzeugung von Toxinen (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXXI, Orig., 1902, No. 2, p. 42). Zinuo , A. , Di un nuovo terreno di cultura per i batteri [Ueber einen neuen Nährboden für die Bacterien] (Riforma med. 1901 , no. 289, p. 759). d. Botanisches. Boston, L, N. , Cultivation of the Aspergillus on urine (Proceed. Pathol. Soc. of Philadelphia. New ser. vol. IV, 1901, no. 5; vgl. Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXXI, Ref., 1902, No. 2, p. 54). Bürger, J., Zur Herstellung von Diatomeen-Präparaten (Zeitschr. f. angew. Mikrosk. Bd. VII, 1901, H. 9, p. 236). 142 Neue Literatur. XIX, 1. Bütschli, O., Bemerkungen über Cyanophyceen und Bacteriaceen (Arch. f. Protistenk. Bd. I, 1902, p. 41 ; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX , 1902, p. 119). Coker, C, Notes on the gametophytes and embryo of Podocarpus (Botan. Gaz. vol. XXXIII, 1902, p. 89; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 123). Ducamp, L., Recberches sur lombryogenie des Araliacees (Ann. des Sc. Nat., Botanique Ser. VIII, t. XV, 1902, p. 319: vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 124). Gager , C. St. , The development of the pollinium and sperm-cells in As- clepias cornuti Decaisne (Ann. of Bot. vol. XVI, 1902, p. 123; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 125). Hassenkamp, A. , lieber die Entwicklung der Cystokarpien bei einigen Florideen (Botan. Zeitg. Bd. LX, 1902, p, 65; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 120). Kienitz-Gerloff, F., Neue Studien über Plasmodermen (Ber. d. Deutschen Botan. Gesellsch. Bd. XX, 1902, p. 93). Kohl, J. G., Untersuchungen über das Carotin und seine physiologische Bedeutung in der Pflanze. Leipzig (Bornträger) 1902, 206 pp. 8''. (Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 121.) Overton, J. B., Parthenogenesis in Thalictruui purpurescens (Botan. Ga- zette vol. XXXIII, 1902, p. 363). - Plaut, H. C, Züchtung der Trichophytiepilze in situ (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXXI, 1902, Orig., No. 5, p. 213; vgl. diese Zeitschr- Bd. XIX, 1902, p. 119). Rosenberg, O., lieber die Pollenbildung von Zostera (Meddel. frän Stock- holms Högskolas Botan. Inst. — Upsala 1901; 21 pp. 8'^'). Saito, Anatomische Studien über wichtige Faserpflanzen Japans mit be- sonderer Berücksichtigung der Bastzellen (Journ. Coli, of Sei. Tokyo vol. XV, 1901, p. 395; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 125). Webber, H. J., Spermatogenesis and fecundation of Zamia (U. S. Depart. of Agricult. Bull. no. 2, Washington 1901; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 123). Wisselingh, C. van, Untersuchungen über Spirogyra. Vierter Beitrag zur Kenntniss der Karyokinese (Botan. Zeitg. Bd. LX, 1902, p. 115). e. Mineralogisch - Geologisches. (l'Achiardi, G. , Descrizione di alcune rocce della Colonia Eritrea [Be- schreibung einiger Gesteine der Erythräischen Colonie] (Atti Soc. Toscana di Sc. Nat. vol. XVIII, 1902). Cohen, E., Das Meteoreisen von N'Gourej'ma unweit Djenne, Provinz Macina, Sudan (Mitth. a. d. naturwiss. Verein f. Neu -Vorpommern u. Rügen Bd. XXIII, 1901). XIX, 1. Neue Literatur. I43 Cornu, A. , Determination des trois parametres optiques principaux d'un cristal, en g-randeur et en direction, par le retVactometre (Bull. Soc. Franc, de Mineral, t. XXV, 1902, p. 7). Cornu, A., Demonstration et usage des formules relatives au retVactometre (Bull. Soc. Franc, de Mineral, t. XXV, 1902, p. 15). Dannenberg, A., Die Deckenbasalte Sardiniens (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 331). Dölter, C, Ueber gegenseitige Löslichkeit geschmolzener Mineralien (Cen- tralbl. f. Mineral. 1902, p. 199). (Dowdy, S. E.,) Preparation of crystals as microscopic objects fJourn. R. Microsc. Soc. 1901, pt. G, p. 711 ; vgl. Pharm. Juurn. vol. LXVI, 1901, p. 198). Finckh, L., Ueber die Gesteine des Kenya und des Kilimandjaro (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 204). Haiiswaldt , H. , Interferenzerscheinungen an doppeltbrechenden Krystall- platten im convergenten polarisirten Licht, photographisch aufgenom- men. Atlas mit 33 Ttin. u. Erläut. Magdeburg 1902. (Vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 126.) Hennig, A., Basalt-Tuff von Lillö (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 357). Ipjjen, J. A,, Ueber einige aplitische Ganggesteine von Predazzo (Cen- tralbl. f. Mineral. 1902, p. 369). Kley, P. , Ueber mikrochemische Analyse (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 198). Kruft, L. , Die Phosphoritführung des vogtländischen Obersilur und die Verbreitung des Phosphorits im Altpaläozoicum Europas (Neues Jahrb. f. Mineral. Beilagebd. XV, 1902, p. 1). Linck, G. , Apparat zur Demonstration der Gebirgsfaltung (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 362). Milch , L. , Beiträge zur Kenntniss der granitischen Gesteine des Riesen- gebirges (Neues Jahrb. f. Mineral. Beilagebd. XV, 1902, p. 105). Möhle, Fr., Beitrag zur Petrographie der Sandwich- und Samoa-Inseln (Neues Jahrb. f. Mineral. Beilagebd. XV, 1902, p. 66). Mügge, O., Ueber einige regelmässige Verwachsungen der Glimmer mit anderen Substanzen (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 353). Rinne, F., Ueber das Verschwinden und Wiedererscheinen des Magnetis- mus beim Erhitzen und Abkühlen von Magneteisenerz (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 294). Rinne, F., Bemerkungen über die Druckfestigkeit einiger Quarz- und Feld- spathwürfel sowie über die Zugfestigkeit von Glimmerstreifen (Cen- tralbl. f. Mineral. 1902, p. 262; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 127). Sach.s, A., Der „Weissstein" des Jordansmühler Nephritvorkommens (Cen- tralbl. f. Minoral. 1902, p. 385). Schroeder van der Kolk, J. L. C, Over hardheid in verband met splijt- baarheid, voornamelijk bij mineralen [Ueber Härte und Spaltbarkeit, besonders bei Mineralien] (Verhandl. d. Koninkl. Akad. van Wetensch. te Amsterdam Bd. VIII, 2, 1902). 144 Neue Literatur. XIX, 1. Sommerfeldt, E., Studien über den Isomorphismus (Neues Jahrb. f. Mineral. 1902, Bd. II, p. 43). De Souza Brandao, V., Ueber den Staubfall in Portugal vom Januar 1902 (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 257). Trenzen , C. , Beiträge zur Kenntniss einiger niederhessischer Basalte (Neues Jahrb. f. Mineral. 1902, Bd. II, p. 1). Wallerant, F., Sur un nouveau modele de refractometre (Bull. Soc. Franc, de Mineral, t. XXV, 1902, p. 54; vgl. diese Zeitschr. Bd. XIX, 1902, p. 125). Weinschenk, E., Ueber die Plasticität der Gesteine (Centralbl. f. Mineral. 1902, p. 161). Weinschenk, E. , Dynamometamorphismus und Piezokrystallisation (Cen- tralbl. f. Mineral. 1902, p. 193). Westermaier, A. , Die Pflanzen des PaläzoTcums im Lichte der physio- logischen Anatomie (Neues Jahrb. f. Mineral. 1902, Bd. I, p. 99). Band XIX. Heft 2. Eine Neuerung am Reicliert'schen Schlittenmikrotom. Von Dr. Josef Starlin^er in Wien. Hierzu ein Holzschnitt. Die Firma ('. Reichert in Wien bringt eine Neuerung an ihren Schlittenmikrotomen , die ihrer technischen Originalität sowohl , als auch ihrer praktischen Bedeutung halber einige Beachtung verdient. Die Neuerung selbst ist aus umstehender Abbildung deutlich erkennbar. Sie betriti't den Mechanismus der Messerführung und hat den Zweck das Hin- und Herschieben des Messers nicht mehr durch gleichlaufende Drehung des Antriebes zu leisten , sondern es unab- hängig von der Drehrichtung zu machen. Bisher stand der Antrieb mit dem Kettenrade in unmittelbarer Verbindung, und jede Drehung des einen übertrug sich in die gleichsinnige des anderen. Nun schieben sich zwischen beide ein grösseres (b) und zwei kleinere Zahnräder (h und i) und ein durch einen Hebelarm (e) excentrisch mit dem grossen Zahnrade verbundenes Zahnrad (d) ein. Von diesen neuen Bestandtheilen ist Zahnrad (h) mit dem An- triebe und Zahnrad (i) mit dem Kettenrad (a) fix verbunden. Die Fortleitung der Bewegung von einem auf das andere System ge- schieht nach einander durch das Zahnrad (ö) , den Hebelarm (c) und das Zahnradsegment (d). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XIX, 2. 10 146 Starling-er: Neuerung- am Reichert'schen Schlittenmikrotom. XIX, 2. Durch den excontriscli am Zahnrade s angebrachten Hebel wird die kreisende Bewegung den zu einer Reflexbewegung , dieses Rades in ein Auf- und Abwärts- bewegeu des Radsegmentes (h) umgewandelt, was weiters das Vor- und Rückwärts- drehen des Rades (?') und schliesslich das Vor- und Rückwärtsgleiten des Mes- sers herbeiführt. Die Ver- bindung von Zahnradsegment (d) und Hebelarm (e) ist ver- scliiebbar und erlaubt die Messerbewegung derart zu reguliren, dass entweder die ganze Schlittenbahn oder nur ein Theil derselben be- nutzt wird. Soviel über die Technik dieser Neuerung selbst, die h()chst einfach ist und präcise functionirt. Aber mit der technischen Seite allein ist der Werth einer Erfindung an einem praktischen Instrumente noch nicht bestimmt. Es fragt sich also zunächst , was lei- stet diese Neuheit für die Praxis ? Die Umwandlung der Wechseldrehung in eine ein- seitige hat an sich für die Praxis des Schneidens keine wesentliche Bedeutung. Das Hin- und Herschieben des Messers durch wechselnde Drehung des Antriebes wird alsbald für den Schueiden- jranz mechanisch vor sich seht. die Für den Handbetrieb ist es also völlig gleichgültig, ob die Bewegung so oder so vor sich zu gehen hat. Von diesem Standpunkte allein also wäre der Werth dieser Erfindung ziemlich gleich Null. Aber XIX, 2. Ötarlinger: Neuerung ;uu Reichert'sclien Schlittenmikrotom. 147 wo immer die Hand ausgeschaltet und deren Verrichtungen der Mechanik übertragen werden, muss mau zweierlei unterscheiden. Die Hand vermag allerdings und natürlich leichter zu nüanciren, aber die Regelmässigkeit und Gleichartigkeit der Bewegung wird dennoch von der Mechanik allein mehr garantirt. Das ist. auch hier zu sehen. Die Objecthebung geschah ehedem und geschieht auch jetzt noch durch Anstossen des Messerschlittens au einen Hebel, der direct mit der Mikrometerschraube in Verbindung steht. — Früher wurde der Stoss mit der Hand ausgeübt , was nicht jedesmal mit derselben Intensität geschah, und weshalb leicht Ungleichheiten in der Schnitt- dicke erzeugt wurden. Jetzt vollzieht sich das beim fortlaufenden Drehen von selbst und immer in ganz derselben Stärke. Das ist sicherlich ein Fortschritt. Der Hauptvortheil dieser Neuerung ist aber meines Erachtens noch gar nicht ausgenützt, und er besteht darin, dass durch die ein- seitige Drehung , wie sie hier ermöglicht ist , leicht die handliche Thätigkeit überhaupt ausgeschaltet werden kann. Das würde einen wesentlichen Fortschritt bedeuten. Für den Praktiker braucht man dies kaum weiter auszuschmücken ; man bekommt nicht bloss seine beiden Hände frei zur Behütung und Versorgung des Schnittes, son- dern man gewinnt auch erheblich an Zeit, weil man nicht nach jedem Schnitt aussetzen muss. Heute, wo die Bedeutung der vollständigen Serien in der neuropathologischen Forschung immer mehr hervortritt, würdigt sich dieser Hinweis wohl von selbst. Die Bewegung des Mikrotomes mit den Füssen nach Art der Nähmaschinen , scheint mir ohne alle Schwierigkeit herstellbar , und ohne Zweifel lässt sich mit den Füssen bald dieselbe Gleichmässig- keit im Führen erlernen, wie es bislang mit den Händen mög- lich war. Dort, wo Elektricität in Verwendung steht, könnte man sogar nocli einen Schritt weiter gehen und die Elektricität selbst als Motor benützen, und vielleicht wird einmal Das Wirklichkeit, was heute noch als etwas trivial erscheinen mag: das ist das „Motormikrotom". Wien, 9. September 1902. [Eingegangen am 12. September 1902.] 10* 148 Kolmer u. Wolf: Methode zur Herstellung v. Paraffinschnitten. XIX, 2. [Aus dem Institut für allgemeine und experimentelle Pathologie in Wien.] lieber eine einfache Methode zur Herstellung von dünnen Paraffinschnitten ohne Reagenseinwirkung. Von Walter Kolmer und Dr. Heinrich Wolf in Wien. Auf Grund der Angaben von Altmann ^ über seine Methode „zur Erhaltung der vollen Reactionsfähigkeit der Gewebe" sollte ver- sucht werden, eine geeignete einfache Anordnung zu finden, um von überlebendem Gewebe ohne Einwirkung eines Fixiruugsmittels dünne Paraffiuschnitte herzustellen. Dem Gedankengange Altmann's folgend, wurden zunächst ver- schiedene Kältemischungen ausgeprobt, da aber keine sich als ge- eignet erwies, dann feste Kohlensäure verwendet. Schliesslich ergab sich die hier in Kürze mitgetheilte Versuchsanordnung: Wir benutzten die im Handel vorkommende flüssige Kohlensäure. Auf die käuflichen Stahlcylinder wurde ohne Verwendung eines Reducirventils eine etwa 20 cm lange Messingröhre luftdicht an- geschraubt. Ueber dieses Rohr wurde ein etwa kindkopfgrosser Beutel aus doppeltem Sammt — welcher Stoff sich am besten be- währte — gestülpt und mit einer Schnur und Klemmpincette be- festigt. Der Kohlensäurerecipient wurde so gelegt, dass immer die Ausflussötfnung sich unter dem Niveau der Flüssigkeit befand. Dann wurde auf einen Augenblick der Hahn vollkommen geöffnet. (Dies ist geboten, weil bei langsamem Oeffnen sich das Rohr leicht mit fester Kohlensäure verstopft.) Sogleich füllt sich der Sammtbeutel prall mit fester Kohlensäure, welche nach Abschliessen des Hahnes durch Umstülpen des Beutels in einen kleinen Blecheimer von etwa 10 cm Tiefe gebracht, und mit einem Pistill fest zusammengestampft wurde. Nach zwei- bis dreimaliger Widerhohmg dieses Verfahrens •) Altmann, R., Die Elementarorganismen. Leipzig 1894. XIX, 2. Kolmer u. Wolf: Methode zur Herstellung v. Paraftinschnitten. 149 erhält man einen Presskuchen von fester Kohlensäure, welcher wegen seiner geringen freien Oberfläche geeignet isolirt durcli 10 bis 12 Stunden eine gleichmässige Temperatur von etwa — 80^ C. bei- behält. Die Isolirung erreichten wir dadurch, dass wir den Blech- eimer in mehrere, gegenseitig wieder durch Watte isolirte Glascylinder stellten und das Ganze in einen sehr dickwandigen Steinguteimer brachten. Mit Hülfe dieses einfachen Verfahrens ist es uns gelungen, durch Wechseln der festen Kohlensäure nach etwa je 10 Stunden, Avas ja leicht durchführbar, mit 30 Litern flüssiger Kolilensäure durch 100 Stunden eine gleichmässige Temperatur von — 80*^ zu erzielen, wozu gewiss sonst recht kostspielige Apparate erforderlich wären. Auf die wie angegeben zubereiteten Presskuchen wurde nun ein etwa einen Liter fassender, gläserner J^xsiccator gestellt, in dessen Boden ein kleiner , kupferner Hohlcylinder mit Hülfe von Gummidichtungen und Flanschen luftdicht eingesetzt war. Dieser Kupfercylinder trug auf seinem Boden eine Schicht Paraffin von 32^ Schmelzpunkt ; auf diese wurden die frisch dem Thiere entnommenen kleinen (bis 50 Cubikmillimeter grossen) Gewebestücke gelegt und der Kälte ausgesetzt. Diese froren im Augenblick durch. Eine Schale mit Phosphorpentoxyd wurde nun in den Exsiccator gestellt, ein Thermometer eingesenkt, der Exsiccator geschlossen und mit der Wasser- oder Quecksilberluftpumpe imter Einschaltung eines Trocken- gefässes mit Schwefelsäure sofort luftleer gemacht. Nach etwa 100 Stunden waren die Gewebstücke vom W^asser befreit. Der Ex- siccator wurde auf einen Thermostaten gestellt, und die Gewebestücke schmolzen auf diese Weise unmittelbar im luftleeren Raum ins Pa- raffin ein. Ohne besondere Mühe Hessen sich die Blöcke dieses sehr weichen Paraffins auf dem Gefriermikrotom bis unter ,5 // schneiden. Wir erhielten so Schnitte von wasserfreien Geweben ohne Reagens- einwirkung und brachten sie in Xylolcanadabalsam oder, um dies zu vermeiden, in Paraffinum liquidum. Man erhält auf diese Weise von verschiedenen Geweben gute Schnitte, die, wenn das Object nicht zu gross war, keine Schrumpfung zeigen. Man kann diese Schnitte nach dem Verfahren Altmann's auf dem Objectträger fixiren und färben. Mehr Bedeutung aber hat diese Methode bei Anwendung der Färbungen durch Farbstoft'injection in die Blutbahn. Es ist uns gelungen, bei „vitaler Färbung" mit Methylenblau und Neutralroth oder mit einem Gemenge, beider ohne Anwendung irgend eines Fixi- rungsmittels, haltbare Färbungen zu bekommen. Es zeigten sich dabei in Ganglien die NissL-Sehollen deutlich gefärbt, was für ihre 150 Schoenemann: Färbung und Aufbewahrung von Schnittserien. XIX, 2. oft bestrittene Präexistenz spricht. Diese Färbungen, sowie auch die mit Neutralroth gefärbten Granula in Ganglienzellen und in Bindegewebszelleu (Mastzellen ?) haben sich seit sechs Monaten unter dem Deckglase unverändert erhalten. Ohne uns ein ürtheil darüber erlauben zu wollen, inwiefern diese Versuchsanordnung (durch Abkühlen, Aussalzung, Wassereut- ziehung, Fettlösung in Paraffin) eine Veränderung beziehungsweise Fällung der Eiweisskörper bedeutet, glauben war doch, dass diese leicht durchführbare Methode dazu dienen könnte, manchen Fragen der Histologie und Physiologie näher zu treten und gedenken dies- bezügliche Versuche in grösserem Maassstabe fortzusetzen. Wien, 15. October 1902. [Eingegangen am 18. October 1902.] [Aus dem Anatomischen Institut in Bern.] Färbung und Aufbewahrung von Schnittserien auf Papierunterlage. Von Dr. A. Schoenemanu, Privatdocent in Bern. Die Mängel, welche den zur Zeit gebräuchlichen Methoden der Herstellung und Aufbewahrung von Schnittserien grösserer Objecte anhaften, äussern sich vor allem darin, dass die einzelnen Schnitte bei der Nachfärbung und bis zur vollständigen Montirung auf Glas der Gefahr der Verzerrung und anderweitiger Schädigung ausgesetzt sind, und dass ferner die Beibehaltung der Reihenfolge complicirte Verfahren und Apparate voraussetzt. Das Verfahren selber ist zeitraubend und kostspielig, die Aufbewahrung sodann erfordert, hauptsächlich mit Rücksicht darauf, dass vielleicht nur einzelne Schnitte einer genauen mikroskopischen Untersuchung unterworfen werden sollen , unverhältnissmässig viel Raum •, denn in der ünge- XIX,2. Schoenemann: Färbung und Aufbewahrung von Sclmittseiien. 151 wissheit, welclie einzelnen kScbnitte aus der ganzen Reilie genauer mikroskopisch untersucht werden sollen, ist man eben genöthigt, die ganze, lückenlose Schnittserie aufzubewahren. Ich habe deshalb, angeregt durch meinen hochverehrten Freund und Lehrer Herrn Prof. Strasser in- Bern, seine Versuche, in dieser Richtung Abhülfe zu schaffen, gerne weitergeführt und mein Augen- merk namentlich darauf gerichtet, ob es nicht doch möglich sei, un- gefärbte , mikroskopische Celloidin- oder Paraffinschnitte direct vom Mikrotommesser auf eine geeignete, biegsame und schneidbare Unter- lage aufzukleben, dann mit dieser die verschiedenen Färbeproceduren vorzunehmen und dabei die Schnitte gefärbt zu bekommen, ohne dass sich die Papierunterlage mitfärbt. Für den Fall , dass solches gelingen würde, ergab sich als zweite Aufgabe, einen biegsam bleiben- den Harzfirniss zu finden, mit welchem die Schnitte sammt ihrer Unterlage durchtränkt und überstrichen werden konnten, um unbe- grenzt haltbare, trocken aufzubewahrende und biegsame Bänder zu liefern. Selbstverständlich müsste an diese Bänder, beziehungsweise an die so verbreiteten Schnitte das Postulat gestellt werden, dass sie einer mikroskopischen Untersuchung zugänglich blieben, — End- lich war es drittens nöthig, dafür zu sorgen, dass die auf ihrer Unterlage auf solche Weise eingeschlossenen Schnitte jederzeit von ihrer provisorischen Unterlage gelöst , zum Zwecke einer feineren Untersuchung auf Glas übertragen und dort unter Deckglas in Canada- balsam eingebettet werden konnten. Nach vielen Misserfolgen glaube ich nun diese drei Aufgaben in zufriedenstellender Weise gelöst zu haben, und theile ich im Folgenden meine Ergebnisse in extenso mit. Bei der Untersuchung der ersten EntAvicklung der Nasenhöhle' habe ich mich seiner Zeit naturgemäss der Paraffineinbettung be- dient. Als ich mich aber mit älteren Objecten zu beschäftigen anfing, um auch hier die Umbildungsprocesse der Nasenhöhle und der Nasen- muscheln, sowie die Verhältnisse des Felsenbeins zu verfolgen, musste ich mich der Celloidineinbettung zuwenden. Bei diesen grösseren Objecten, bei welchen die Verknöcherung schon weiter fortgeschritten ist, erweist sich ja die Paraffineinbettungsmethode als insufficient, weil der entkalkte Knochen durch die verschiedenen Proceduren bei der Paraffineinbettung wieder hart und spröde wird , während die ^) Schoenemann, A., Beitrag zur Kenntniss der Muschelbildung und des Muschelwachsthums (Anat. Hefte 1901). 152 Schoenemann: Färbung- und Aufbewahrung von Schnittserien. XIX, 2. Celloidineinbettung diese Nachtlieile nicht zeigt. Ich erkannte und wurde auch durch Professor Strasser darauf hingewiesen , dass gegenüber der bisher übliclien Art der Celloidineinbettung, wobei Lösungen des Celloidiu in Aether und Alkoliol verwendet Averden, die 1901 von Stepanow^ empfohlene Verwendung einer Lösung von Celloidiu in Nelkenöl und Aether und die Nachhärtung in Benzol etc. einen sehr bemerkenswerthen Fortschritt bedeutet. Die STEPANOw'sche Methode hat den grossen Vortheil, dass sie bei kürzerer Behandlungsdauer eine viel vollkommenere Einbettung liefert. Ueberdies erlaubt sie die Objecte trocken oder annähernd trocken und mit Paraffinmikrotom zu schneiden. Sie vereinigt so die Vortheile der Paraffinmethode mit denjenigen der älteren Celloidin- methode, ohne an den Nachtheilen der beiden zu leiden. Ich habe die von Stepanow angegebenen Verfahren nachgeprüft und im allgemeinen bewährt gefunden, allerdings war ich gezwungen, im einzelnen zahlreiche Abänderungen zu versuchen, um das Stepa- Now'sche Verfahren meinen Untersuchungsobjecten anzupassen, die offenbar viel grösser als die SxEPANOw'schen Objecte und überdies stark knochenhaltig sind. Ich werde deshalb zunächst in Kürze über diejenige Modification des SxEPANOw'schen Verfahrens berichten, die sich mir schliesslich als vollständig zuverlässig und leistungsfähig erwiesen hat. Die Vorbereitung meiner Objecte (vollständige Nasenhöhlen von Neugeborenen , Felsenbeine von Erwachsenen etc.) ist bis zum ab- soluten Alkohol dieselbe, wie sie für die alte Celloidinmethode und für die Paraffinmethode in Frage kommt. Zum Entkalken benutzte ich früher eine Tprocentige Salpeter- säurelösung, später aber ersetzte ich dieselbe mit grösstem Vortheil durch die in neuester Zeit warm empfohlene sclnveflige Säure in gesättigter Lösung. Dabei habe ich gefunden, dass, so lange die Objecte in der Säure verweilen, durch äusseres Anfühlen oder Ein- stechen der Entscheid schwierig zu treften ist, ob die Entkalkung in genügender Weise vor sich ging. Die Objecte bleiben nämlich, so lange sie in der Säure verweilen, hart, erst beim Auswässern werden sie weich. Es beruht dies oftenbar darauf, dass die schwef- lige Säure die Knochensalze der:irt modificirt , dass dieselben sich 1) Stepanow, E. M., Eine neue Einbettungsmethode in Celloidin (Diese Zeitsclir. Bd. XVII, 1 !)()(), p. 185). XIX, 2. Schoenemann: Färbung und Aufbewahrung von Schnittserien. 153 erst nachträglich im Wasser lösen. Die eigentliche Entkalkung der Knochen erfolgt also erst beim Auswässern. Aus dem absoluten Alkohol bringe ich die Objecte auf Stunden bis Tage je nach der Gi-össe der Blöcke in ein Gemisch von : Aether 2 Th. Nelkenöl 1 „ Von da kommen sie in die SxEPANOw'sche Celloidinlösung, welche besteht aus : Celloidinspähne, feinste, getrocknete . . log Nelkenöl (oder Eugenol) 5'0 „ Aether 20 „ Alkohol absolut, tropfenweise, bis . . . 1-0 „ Die Zeit, während welcher die Objecte in dieser Celloidinlösung bleiben müssen, variirt natürlich auch wieder je nach der Grösse derselben, für kleinere Objecte genügen sicherlich ein paar Stunden, für grössere dürften ein paar Tage nicht zu viel sein. Wenn man annehmen kann, dass die Durchtränkung in hinreichendem Maasse erfolgt ist, kommen die Objecte in ein viereckiges oder rundes Kästchen, dessen Boden aus einer ziemlich dicken Glasplatte besteht und dessen Seiten gebildet sind von einem um den Rand der Glas- platte herumgelegten, durch Gummi arabicum zusammengeklebten Papierstreifen. Das offene Lumen des Kästchens sieht nach oben. In dieses Kästchen wird das mit Celloidin durchtränkte Object hinein- gethan, thunlichst orientirt und mit Nelkenöl -Celloidinlösung bis zur reichlichen Bedeckung übergössen. Hiernach stellt man das Kästchen mit dem Object in ein verschliessbares Gefäss, und giesst in dieses letztere bis zu etwa ein Drittel der Höhe des Kästchens Chloroform. Giesst man mehr Chloroform um das Kästchen herum , so besteht Gefahr, dass dieses letztere trotz der beschwerenden Glasplatte zu schwimmen anfängt , und gelegentlich auch zum grossen Schaden einer homogenen Einbettung umkippt. Für etwa 24 Stunden lässt man sodann das Kästchen in der gedeckten Chloroformdose; nach dieser Zeit sind die peripheren Theile des Celloidins zu einer gleich- massigen Rinde erstarrt, und kann man nunmehr zum Zwecke einer schnelleren Durchhärtung den Chloroformzusatz vermehren bis zur eigentlichen Ueberschwemmung des Kästchens. Nach genügend er- folgter Härtung schält man den umhüllenden Papierstreifen ab und lässt das Object noch einige Zeit im Chloroform liegen. 154 Schoenemann: Färbung und Aufbewahrung von Schnittserien. XIX, 2. Dies ist das Verfahren, das mir sehr gute Resultate geliefert hat. Ich bin von demselben hier und da in sofern abgewichen als ich statt einer Aether- Nelkenöl -Celloidinlösung deren zwei bis drei alle von steigender Celloidinconcentration anwandte. Hauptsächlich habe ich dies da benöthigt, wo es sich darum handelte, ausser- ordentlich derbe Blöcke zu erhalten. Ferner auch bei den Celloidin- corrosionen des Mittelohres und des Ohr-Labyrinths, über die ich an anderer Stelle berichten werde. Eine Modiiication ist auch die anstatt des Chloroforms oder, wie es Stepaxow gebraucht, anstatt des Benzols Xylol als Härtungsflüssigkeit anzuwenden. Sind die Celloidinobjecte genügend hart geworden , so kommen sie in Cedernholzöl. Die vollständige Durchtränkung des Blockes mit diesem letzteren ist eine unerlässliche Bedingung für die Ver- wendbarkeit der Blöcke zum Trockenschneiden. Dieselbe ist dann eine zufriedenstellende , wenn die das Object umhüllende Celloidin- masse vollständig durchsichtig geworden ist wie Glas^ und das ein- gebettete Object durch das Celloidin hindurch bis in die feinsten Einzelheiten erkannt werden kann. Dadurch wird natürlich die spätere Orientirung der Schnittebene ganz bedeutend erleichtert. Will man die Objecte nicht trocken schneiden, sondern in SOprocentigem Alkohol, so kann man zunächst die Kästchen statt in Chloroform in ein Halbbad bringen von SOprocentigem Alkohol, und nach erfolgter Erstarrung der peripheren Schichten den ganzen Block in SOpro- centigen Alkohol versenken bis zum Moment des Schneidens. Es dauert jedoch ziemlich lange bis SOprocentiger Alkohol sämmtliches Nelkenöl ausgezogen hat. Ich finde, dass ein grosser Vortheil der Aether-Nelkenöl-Celloidin- methode gerade in der Möglichkeit des Trockenschneidens besteht. Allerdings kann man zu diesem Zweck nicht die für die Celloi'din- blöcke bisher verwendeten langen und deshalb immer mehr oder weniger federnden Messer gebrauchen. Nur diejenigen Formen der Mikrotommesser, die man sonst für Paraffiublöcke gebraucht, sind ver- werthbar. Die Messerstellung wird sich der Härte und Schneidbar- keit des Objectes anpassen müssen. Ich habe gefunden , dass im allgemeinen die Mitte zwischen Querstellung und einer solchen von 45** Schiefstellung die beste ist. Im einzelnen gestaltet sich sodann das weitere Vorgehen so, dass die mit Cedernöl vollständig durchtränkten Blöcke mit ihrer Unterseite, d. h. der Glasplatte auf einen ebenen Mikrotomtisch auf- geklebt werden. Ich verwende als Klebemittel concentrirtes CoUo- XIX, 2. Schoenemann: Färbung und Auf bewahrung von Schnittserien. 155 diura. Fehlt es an Zeit, um die Eintrockmmg des Collodiiims ab- zuwarten, so kann man den Block auch mit heissem Paraffin auf den Tisch aufschmelzen. Und nunmehr beginnt als zweiter Hauptabschnitt das Schnei- den und dann das Aufkleben der Schnitte auf eigens für meine Methode hergestelltes Papier. Was im Princip die Herstellung dieses farbwiderstandsfähigen Papieres anlangt, so besteht dieselbe darin, dass man bei besonders dafür geeigneten Pauspapieren die farb- fähigen Substanzen durch Vorbehandlung mit Mineralsäuren zerstört. Da die Herstellung dieses Papieres mit technischen Schwierigkeiten verbunden ist, habe ich die bekaimte Centralstelle für mikroskopische Bedarfsartikel, den Herrn Inhaber des Dr. GRÜBLEn'schen Laborato- riums in Leipzig veranlasst, nach meinen genauen Vorschriften dieses Papier herzustellen und dasselbe in jeder beliebigen Form, auch in Rollen, in den Handel zu bringen. Man legt sich also neben dem Mikrotom eine Anzahl solcher mit Bleistift nummerirter Papierstreifen zurecht und klebt nun die Celloidinschnitte in fortlaufender Reihenfolge mit einer höchstens syrup- dicken C e 1 1 i d i n n e 1 k e n ö 1 1 ö s u n g auf ; dabei lasse ich einen ziemlich grossen Theil der seitlichen Ränder des Streifens frei. Ein so beschickter Papierstreifen hat also etwa folgendes Aussehen 1. Neon. Nasenhöhle OOOOOOOO Schnittdicke 30 u. Ist der Papierstreifen mit einer genügenden Anzahl Schnitte be- deckt , so presse ich dessen Oberfläche mit einem ziemlich groben trockenen Filtrirpapier, damit sich auf diese Weise die Schnitte glatt auf die Unterlage anlegen. Eine Gefahr, dass die Schnitte am Filtrirpapier haften bleiben , besteht nicht. Die Celloidiimelkenöl- Klebemasse bindet schon nach ganz kurzer Zeit die Schnitte an ihre Unterlage fest. Die Papierstreifen kommen nunmehr mit Beibehaltung ihrer natürlichen Reihenfolge in SOprocentigen Alkohol , iit welchem sie das Cedernholzöl abgeben sollen. Zweckmässig ist es , die Streifen mit Dazwischenlagerung gleich grosser Filtrirpapierstreifen schon während des Schneidens auf einander zu thürmen und jeweilen die oberste Schicht mit einer beschwerenden Glassplatte zu bedecken. Durch diese Vorsichtsmaassregel bleiben die Papierstreifen bei dem im SOprocentigen Alkohol zugleich sich vollziehenden Härtungsprocess 156 Schoeneiuann: Färbung und Aufbewahrung vun Schnittserien. XIX, 2. der Klebemasse glatt mul eben. Im SOprocentigen Alkohol, welcher mehrmals zu wechseln ist , können die Papierstreifen beliebig lange aufbewahrt bleiben. Damit ist der zweite Act der ganzen Be- handlungsmethode des Schneidens und Aufklebens beendigt. Auf einzelne ^Moditicationen desselben werde ich später zu sprechen kommen. Es folgt die Färbung. Aus dem SOprocentigen Alkohol kommen die Papierstreifen in ein Wasserbad , in demselben treten da und dort in den Celloidinschnitten trübe Flecke auf, hauptsäch- lich dann, wenn der SOprocentige Alkohol zu wenig lange eingewirkt hat. Sie haben, wenn sie nicht allzu intensiv sich bemerkbar machen, für das weitere Gelingen der Färbung keine Bedeutung. Aus dem Wasserbade bringt man die Schnittstreifen in die Farbe (augewendet wurde von mir vor allem verdünnter Hämalaun [Grübler] , ferner verdünntes GRENACHER'sches Hämatoxylin, verdünntes Delafield- sches Hämatoxylin). Der Vortheil, verdünnte Hämatoxylinlösungen anwenden zu können , muss natürlich dadurch aufgewogen werden, dass mau die Streifen mehrere Stunden in der Farblösung liegen lässt. Dafür tritt aber auch die Kernfärbung um so schärfer und deutlicher nachher hervor. Legt man auf diesen Umstand kein allzu grosses Gewicht, so können selbstverständlich auch concentrirte Farblösungen Verwendung finden. Der Vorgang , den die Papier- streifen in dem Farbbade durchmachen, erinnert lebhaft an die Ent- wicklung der photographischen Platten im Entwickler. Man sieht, wie die Schnitte allmählich das Hämatoxylin aufnehmen und sich von der nur ganz schwach gefärbten Papierunterlage immer deutlicher abheben. Man darf sich durch die schwache Färbung der Papier- unterlage nicht irre führen lassen. Sie ^ erschwindet bei der später zu beschreibenden weiteren Behandlung. Ist man der Ansicht, dass die Schnitte genügend gefärbt sind, so kommen sie zur Abspülung in ein Wasserbad, am besten in tiiessendes Wasser. In diesem letzteren ditferenziren sich die wohl- getarbten Schnitte von der Unterlage noch deutlicher. Die Papier- streifen müssen nun weiter entwässert und zum Zwecke der Doppel- färbung mit Eosin nachgefärbt werden. Ich vollführe diese beiden Proceduren zu gleicher Zeit, indem ich die Papierstreifen aus dem Wasser in 95procentigcn, mit Eosiu ziemlich intensiv gefärbten Alkohol verbringe. Das Wasser, das die Papierstreifen aus dem Wasserbad mitbringen, verdünnt dann den 95procentigen Alkohol derart, dass keine Gefahr des Ablösens der Schnitte besteht. XIX, 2. S c h o e n e lu a n n : Färbung- und Aufbewahrung- von Schnittserien, i ö 7 Die Schnitte li a 1) e n sich in sehr kurzer Zeit mit p]osiu gefärbt, oder besser noch üb er färbt; sie werden j e t z t] i n (las C a r b 1 x y 1 o 1 b a d gebracht (A c i d u m c a r - b 1 i c u m purum 1*0, X y 1 1 3*0), in welchem sie verweilen bis jedwede Trübung- im Papier oder in den Schnitten vollständig ver- schwunden ist. Dieser Moment tritt dann ein , wenn beide voll- ständig- entwässert und durchtränkt sind. Aber nicht nur als vorzüg- liches Entwässerungsmittel hat sich das Carbolxylol mir in diesem Fall für unentbehrlich erwiesen, sondern auch als sehr guter Regu- lator für die Färbung. Im Carbolxylol verliert das Papier, das einen ganz leisen Schimmer von Blaufärbung aus dem Wasserbade ' und einen röthlichen Schimmer aus dem Eosinbade behalten hat, diesen blauen und röthlichen Ton, und es wird die Färbung durch Eosin auf ein richtiges Maass zurückgeführt : Carbolxylol zieht den Ueberschuss von Eosin aus. Aus dem Carbolxylol werden die Schnittstreifen in Xylol ver- bracht , dort sollen sie das Carbol abgeben ; denn dieses letztere schadet der Farbbeständigkeit der Schnitte. Mit dem Einlegen der Streifen in Xylol hat die dritte Hauptpr c e dur , die Fär- bung ihren Abschluss gefunden, denn von da an muss man sich entscheiden, ob man die Streifen trocken oder feucht aufbewahren resp. untersuchen will. Beliebt das Letztere, so legt man die Streifen in CedernholziU, dessen Unschädlichkeit den gefärbten Schnitten gegen- über von mir wenigstens für die Dauer von einigen Monaten fest- gestellt ist. Will man sodann die Schnitte mikroskopisch untersuchen, so legt man die Papierstreifen aus dem Cedernholzöl auf eine ent- sprechend grosse Glasplatte und bedeckt den jeweilen zu betrachten- den Schnitt mit einem Deckglas oder mit einem Glimmerplättchen. Will man hingegen die Schnittserie trocken aufbewahren , so kann dies vermittels irgend eines rasch trocknenden und nicht spröde werdenden alkohol- und ätherfreien Lakes geschehen. Ein sehr bequemes Mittel zur Erreichung dieses Zweckes dürfte auch die Anwendung meines Elastin lackes, dessen Hauptbestandtheil eingedicktes Terpentin darstellt , sein. Derselbe ist erhältlich bei Dr. Grübler u, Co. , Leipzig. Ich bringe also die Schnittserien ^) Man kann übrigens diese Andeutung- einer Blaufärbung- des Papieres noch corrigiren, indem man die Papierstreifen aus dem Wasserbad in eine v einprocentige Alaunlösung- für 24 Stunden bringt und hernach tüchtig auswässert. 158 Schocneinann: Färbung- und Aufbewahrung von Schnittserien. XIX, 2. aus dem Xylol in ein Elastinhickbad und lasse sie hier liegen, bis ich annehmen kann, dass sie durchtränkt sind. Die seitlich von den Schnitten freigelassenen Felder des Papierstreifens lässt man aus dem Gefäss herausragen, damit sie später als unbeschrautzte Handhabe zum Herausnehmen dienen. Die nach etwa 24stün- digem Liegen völlig durclitränkten Streifen nimmt man sodann her- aus und spannt sie auf einen Holzrahmen. Der Lack trocknet relativ sehr schnell (schon nach 12 bis 24 Stunden), und man muss durch öfteres Ueberpinsehi der Streifen dafür sorgen, dass die gefärbten Schnitte in der That beständig unter einer Lackschiclit sind, sonst treten irreparable Flecke auf. Eventuell sich bemerkbar machende Falten resp. Verbiegimgen können später ausgegUchen werden, indem man die Streifen sobald sie nicht mehr kleben (nach etwa 2 bis 6 Tagen) zwischen feines Filtrirpapier legt. Dort trock- nen sie von selbst, ohne dass sie am Papier ankleben. Sie ertragen sogar behufs gründlicherer Erlangung einer ghitten Fläche eine ge- linde Pressung (Glätteisen). Nur muss man dafür besorgt sein, dass die zwischen Filtrirpapier gepressten Streifen an einem kühlen Ort aufbewahrt werden. Viele Streifen zeigen nach dem völligen Trocknen auf der Oberfläche Flecke, wie blind gewordenes Glas. Diese Flecke verschwinden aber, wenn man später die Ober- fläche nochmals mit Elastinlack überpinselt. Dadurch wird die Transparenz der Streifen beinahe bis zur Durchsichtigkeit erhöht, und die Schnitte lassen eine mikroskopische Betrachtung, welche bis zu einer Vergrösserung von 250 linear und mehr geht, ganz gut zu. Damit wäre ich eigentlich mit meinen Angaben zu Ende. Es erübrigt mir noch, das Verfahren zu besprechen, mittels dessen man in den Stand gesetzt ist, die so auf Papierunterlage montirten Schnitte auf Glas zurück zu versetzen. Nothwendig wird eine solche Möglich- keit durch den Umstand , dass wohl die Grenze des genaueren mikroskopischen Studiums der auf Papierunterlage ruhenden Schnitte eine relativ beschränkte ist. Einzelne Schnitte, die man für besonders wichtig erachtet, und welche man für das exacte Studium Heber zwischen Glas in Canada- einschluss haben möchte, kann man aus dem Streifen mitsammt der Papierunterlage herausschneiden, ohne dass die Continuität der letzte- ren leidet. Durch Einlegen in gelinde erwärmtes Xylol oder kaltes Chloroform wird der Lack vollständig entfernt. Hernach bringt man auf einen Objectträger etwas dicken Canadabalsam oder besser noch Elastinlack, und klebt damit gleichsam den noch am Papier haften- XIX, 2. Schoenemann: Fiirbung und Aut'bewalirung voiiSchnittserlen. 15;) den aber „entlackten" Schnitt fest. Nunmehr legt man anf die Rückseite der Papierunterlage einen doppelten mit Aether 2 Th. und absohlten Alkohol 1 Th. getränkten Filtrirpapierstreifen. Nach etwa 2 Minuten kann man die Papierunterlage von dem aut dem Glase intact haftenden Schnitte abziehen und ersteren in Canadabalsani einschliessen. Sollten bei dieser Procedur Flecke, d. h. Trübungen auftreten , welche meist unwillkürlich von hinzugekommenen Wasser herrühren (Athem !), so sind dieselben leicht wegzubringen mit einigen Tropfen Kreosot, die man nachher wieder abtupft. Das weitere Vorgehen des Einschlusses in Canadabalsam ist das gewohnte. Zum Schlüsse seien mir noch einige Bemerkungen erlaubt, be- züglich zweckmässiger Modificationen und P^rweiterungen der einzelnen Proceduren. Zunächst ist die Celloidin-Nelkenöl-Einbettung und das Trocken- schneiden nach Durclitränkung mit Cederuöl nicht eine Conditio sine qua non für die Montirung der Schnitte in oben angegebener Weise auf farbwiderstandsfähiges Papier. Man kann auch, wie mich viel- fache Erfahrung gelehrt hat, Celloidinschnitte, die unter SOprocentigem Alkohol geschnitten sind oder in demselben längere Zeit lagen, mit dem Nelkenöl -Celloidin aufkleben. Man muss nur die Vorsicht ge- brauchen , die aufgeklebten Schnitte eine Weile an der Luft an- trocknen zu lassen. Sie werden hiernach mit Filtrirpapier ziemlich energisch auf die Unterlage anpresst. Ich habe sogar besonders bei dünnen und grossen Schnitten, welche auf trockenem Wege her gestellt worden waren, öfter den Kunstgriff angewandt, sie vor dem Aufkleben in 80- bis 90procentigen Alkohol zu legen, weil sie sich in diesem sehr schön entfalten und strecken. Hernach folgte in der oben angegebenen Weise das Aufkleben auf Papier mit Nelkenöl- Collodiura. Will man Paraffinschnitte vom Mikrotommesser direct auf farbwiderstandsfähiges Papier aufkleben, so kann dies mit der gleichen Klebemasse geschehen , die für die Celloidinschnitte an- gegeben wurde. Im Gegensatz zu den Celloidinschnitten müssen aber die auf- geklebten und glattgepressten Paraffinschnitte mit einer Schicht Collo- dium überpinselt werden, damit sie bei der späteren Ablösung auf Glas genügenden Halt haben. Das weitere Vorgehen wäre dann bei ungefärbten Objecten : Fntfernen des Paraffins im Xylolbad , dann Alkoholbad von 90- procentigem Alkohol, endlich Wasserbad. Von da fallen die Pro- 160 Schoenemann: Färbung und Aufbewahrung von Schnittserien. XIX,2. ceduren mit den oben für die ('elloidiuscbuitte geschilderten zu- sammen. Voraussichtlich kommt man auch öfters in den Fall, aufgeklebte .Schnittserien ungefärbt und trocken für spätere Untersuchungen zu- rückstellen und auf beAvahren zu wollen. Es kann in ähnlicher Weise geschehen, wie schon Strasser 1895 angegeben hat. Die Celloidin- schnittstreifen werden nämlich aus dem 80procentigen Alkohol zwi- schen Filtrirpapier gelegt, gepresst und gut getrocknet, hernach zieht man sie durch gewärmtes flüssiges Paraffin. Dadurch erhalten diese Schnittstreifen einen Paraffinüberzug, der später bei weiterer Verwerthung der Objecte mit Chloroform oder Xjiol leicht entfernt werden kann. Für direct auf Papier aufgeklebte Paraffinschnitte ist dieses Vorgehen von vornherein gegeben. Inwieweit meine Methode des Aufklebens der Schnittserien aut farbwiderstandsfähiges Papier und des Färbens auf demselben auch für andere Färbemethoden sich bewährt, kann ich nicht endgültig entscheiden. Ich habe allerdings auch nach dieser Richtung, so weit es meine Erfahrungen mir gestatteten, viele Versuche angestellt, von denen ich sagen kann , dass sie mich in hohem Maasse be- friedigten. Eine grosse Genugthuung wäre es mir allerdings, wenn von denjenigen Forschern, die viel mit WEiGERT'scher Färbung zu thun haben , diese Methode als leistungsfähig qualificirt würde , denn dann wäre beispielsweise für die Anfertigung von grossen Serien des Centralnervensystems eine bemerkenswerthe Vereinfachung zu verzeichnen. Von diesen in Frage stehenden Methoden habe ich die Wei- GERT'sche Färbung, und zwar auch diejenige Modification, welche mit einer Chrombeize ausgeführt wird , mehrfach angewandt. Es muss bemerkt werden, dass sich das Papier in der Hämatoxylin -Lösung anfänglich ziemlich intensiv blauschwarz färbt, sobald man aber die gefärbten Schnitte sammt der Papierunterlage in die Differenzirungs- flüssigkeit bringt, verliert das Papier sehr rasch seine Farbe, während die Schnitte dieselbe bewahren und sich erst allmählich aufhellen. Das Gleiche gilt von der ÜEiDENHAiN'schen Hämatoxyliu-Färbung mit vorangehender Eisenammonalaun-Beizung. Ich habe deshalb die Hoffnung, es dürfte meine Methode der Färbung aufgeklebter Schnitte auf farbwiderstandsfähigem Papier nicht allein für Hämalaun- Eosin -Doppelfärbung anzuwenden sein, sondern auch zu weiterer Verwendung mit complicirteren Färbe- XIX, 2. Chilesott i: Une coloration elective des cylindres d'axe. iQi methoden wie die Weigert'scIic , HEiDENHAiN'scbe etc. P^ärbungs- methode auffordern. Mein hochverehrter Freund und Lehrer Herr Professor Strasser in Bern war so freundlich, mir einen Platz in seinem Laboratorium zur Verfügung zu stellen. Dafür, sowie für seine mannigfaltige An- regung, sage ich ihm an dieser Stelle meinen aufrichtigen Dank. Bern, 12. Juli 1902. [Eingegangen am 16. Juli 1902.] [Institut pathologique de l'Univeisite de Munich. Obermedicinalrath Prof. Dr. BOLLINGER.] Une coloration elective des cylindres d'axe. (Carmin aqueux chlorhydrique.) Par le Dr. Ermaniio Chilesotti. Dans un travail que j'ai publie recemment^ et oü j'exposais une coloration diffuse des cylindres d'axe au carmin , je promettais d'en donner une elective des que j'y aurais etabli certaines modalites secondaires. Je crois etre aujourd'hui en mesure de le faire. Dans la teclmique du Systeme nerveux la coloration elective des cylindres d'axe a toujours otfert les plus grandes difficultes. Tandis qu'il existe pour les cellules ganglionnaires , pour les gaines medullaires, pour la nevroglie, de nombreuses methodes electives et süres, les cylindres d'axe se sont toujours montres rebelles a une coloration specifique uniforme. 1) Chilesotti, E., Eine Carmintärbung der Achsencylinder, welche bei jeder Vorbehandlungsmethode gelingt [Urancarminfärbung nach Schmaus, modificirt] (Centralbl. f. allgera. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XIII, 1902, No. 6, 7, p, 193). Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XIX, 2. 11 162 Chilesotti: Une coloration elective des cylindres d'axe. XIX, '2. Strähuber ^ dit dans un travail recent : „Die wenigen hier an- o-egebenen electiven Färbungen, die STROEBE'sche, sowie die Gold- färbungen von Freud, Cohnheim, Upson u. A. geben ja häufig recht gute, aber keine constanten Resultate und bedürfen einer langen Vorhärtung mit MüLLER'scher Flüssigkeit." J'ajouterai a ces methodes electives que Strähuber critique, la methode de Golgi au nitrate d'argent et celle au sublime de mer- cure, suivie des modifications de Pal, Kölliker, Flechsig, Obregia, et Celle au nitrate d'argent de Ramön y Cajal , lesquelles, comme c'est generalement connu, - donnent des resultats tres incertains et, dans la meme preparation, produisent des iles trop colorees et d'autres decolorees ; de plus, elles ne sont executables que sur de tres petita morceaux, et, si elles otfrent des avantages pour Thistologie nor- male, elles n'en presentent aucun pour l'anatomie pathologique. La coloration a l'hematoxyline de Bolton^ n'est qu'aleatoire ^ ; eile colore tantot les cylindres d'axe tantot les gaines meduUaires tantot les deux. Celle de Fajersztajn,' egalement a Thematoxyline, donne aussi, comme le dit l'auteur lui-meme, des iles oü la coloration est inter- vertie, ou bien oü eile colore trop ou pas du tout. De plus ou ne peut executer ces deux dernieres methodes que sur des coupes gelees n'ayant pas ete exposees j\ l'actiou de l'alcool ; comme on doit alors renoncer a l'inclusion, ces procedes ne sont pas applicables ä certaius cas pathologiques ni ä des morceaux de quelque extension. La „vitale Methylenblaumethode" de Ehrlich*^ et deBEXHE' u'est destinee qu'ä des etudes experimentales sur les animaux. Nombre d'autres ^) Strähuber, A., Eine elective Färbung des Achsencylinders, be- ziehungsweise isohrte Tinction eines seiner Bestandtheile (Centralbl. f. allgem. Pathol. u. pathol. Anat. Bd. XII, 1901, p. 422 •, voir ce Journ. Bd. XYIII, 1901, p. 482). ^) Kahlden, K. V., Technik der histologischen Untersuchungsmethoden. 5. Auti. Jena (Fischer) 1898. p. 127—128. 3) BoLTOX, S. J., Journ. of Anat. a. Physiol. vol. XXIIl, 1899, p. 292. •*) Fajersztajn, J., Ueber den Hämatoxylin-Chromlack als Mittel zur Färbung der Achsencylinder (Polnisches Arch. f. biol. u. med. Wiss. Bd. I, 1901, p. 8; voir ce Journ. vol. XVIII, 1901, p. 479). *) Fajerszta.tn, f., CEuvre citee. ") Ehrlich, P., Das Sauerstoifbedürfniss des Organismus. Eine farben- analytische Studie. Berlin 1885. ') Bethe, A. , Eine neue Methode der Methylenblaufixation (Anat. Anz. Bd. XII, 1896, No. 18, p. 488; voir ce Journ. Bd. XIV, 1897, p. 212). XIX, 2. Chilesotti: Une coloration elective des cylindres d'axe. 163 methodes, corame rimpregiiation molybdenique de Bethe \ celle au fer de S. Meyer ^ celle au chlorure d'or d'ApÄxHY '', la coloratiou avec acide osmique et fuchsine acide de Malley^, et bleu d'autres, n'ont ete creees et ne serveut que pour Thistologie intime du cylindre d'axe meme et n'ont pas d'application topograpliique ni, pour le moment, anatomo-pathologique. Dernierement Strähuber^ a fait faire un grand pas en avant ä la coloration elective des cylindres d'axe dans les coupes en cel- loidine, en combinant rimpregnation des gaines meduUaires a la maniere de Weigert, la coloration au bleu d'aniline de Stroebe et la dilFe- renciation de Pal. Avec cette metbode, de grande valeur, les cylindres d'axe se detachent en bleu intense sur le fond incolore ; la coloratiou est uni- forme et eile donne de tres bons resultats, meme sur des coupes tres etendues. Etant donnees les qualites de cette coloration il semblerait donc inutile d'en cliercher une autre ; j'exposerai brieve- ment les raisons qui m'ont determine a continuer les recherches sur ce sujet et a presenter aujourd'hui uue nouvelle metbode. Strähuber intitule son travail „Eine elective Färbung des Acbsen- cylinders, resp. isolirte Tinction eines seiner Besta ndtbeile" et a la page 424 il dit: „. . . niemals meine Acbsencylinderfärbung bis an die Zelle beranreicbte , aucb nirgends feinst verzweigte Fasern gefärbt werden konnten", et p. 426: „Fragen wir uns nun, ob die Färbung das ist , was sie sein soll , eine elective Acbsencylinder- färbung, so lässt sich mit Ja oder Nein darauf antworten. Nein, denn sie färbt nicht den Bestandtheil des Achsencylinders, der einzig- als der wesentliche gilt, die Fibrillen, sie färbt nicht einmal alle Achsencylinder, und Ja, denn sie färbt den Bestandtheil desselben, der in den meisten Fällen dessen Hauptmasse ausmacht" etc. ^) Bethe, A., Das Centralnervensystem von Carcinus Maenas. IL Theil (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LI, 1898, p. 382; voir ce Journ. Bd. XV, 1898, p. 87). '-) Meyer, S. , Eine Eisenimprägnation der Neurofibrillen (Anat. Anz. Bd. XX, 1902, No. 21, p 535; voir ce Journ. Bd. XIX, 1902, p. 101). ^) Apäthy, St., Das leitende Element des Nervensystems und seine topographischen Beziehungen zu den Zellen. 1. Mittheilung (Mittheil. d. Zool. Station Neapel Bd. XII, 1897, p. 495; voir ce Journ. Bd. XV, 1898, p. 75). ■*) KuPFFER, C, Ueber den Achsencylinder der markhaltigen Nerven- fasern (Sitzber. d. math.-phys. Kl. d. k. bayr. Acad. d. Wiss. 1883, H. 3, p. 566 ; voir ce Journ. Bd. II, 1885, p. 106). ^) Strähuber, A., ffiuvre citee. 11* I(j4 Cliilesotti: üne coloration elective des cylindres d'axe. XIX, 2. J'ai remarqiie cependant, en executant bieu de fois la coloration de Strähuber, que, tandis que les sections longitiulinales des cylindres d'axe se coloraient intensivement en bleu, presque toutes les sections verticales restaient incolores et on ne pouvait les mettre en evidence qtie par petites places et d'ime maniere tres irreguliere. En outre, tandis (lue la coloration est uniforme pour tons les cylindres d'axe superieurs a une certaine grosseur , eile ne colore pas les fibrilles finement ramifiees ^, de fac^-on que les places occupees par ces der- nieres apparaissent dans la preparation comme des iles incolores quelquefois tres etendues. C'est pourquoi j'ai chercbe une coloration qui s'etende a toutes les parties Constituantes du cylindre d'axe, qui le suive jusqu'ji la cellule nerveuse , qui colore aussi la cellule si intimement liee ä lui", qui atteigne les fibrilles meme les plus fines, et qui , enfin , mette aussi bien en evidence les sections verticales des cylindres d'axe. Ces avantages nouveaux justifient aujourd'bui la publication de ma methode. En voici l'expose: Fixatio7i et iTwpregiiation. Avant tout, je tiens a dire que cela n'influence en rien la coloration de prendre les raorceaux sur un cadavre frais. .Te les ai pris soit immediatement apres la mort, soit 28 a .36 heures plus tard. De meme la grandeur des morceaux n'a pas d'importance. La coloration a tres bien reussi sur toute l'etendue de coupes comprenant toute la partie superieure de la moelle allongee liumaine ou tout le pont de Varole, La meilleure methode de fixation et impregnation est de con- server longtemps dans le liquide de Müller (plusieurs mois). Mais ce procede n'est pas pratique, demandant beaucoup de temps, et la coloration reussit presque' aussi bien avec la fixation peudant au moins 4 jours dans le formol -Müller (formol concentre: 1 partie, liquide de Müller: 10 parties) ou dans le formol. Le degre de concentration de ce dernier n'a pas grande importance ; j'emploie d'habitude une Solution d'environ 10%. Si les morceaux ont ete con- serves trop longtemps dans le formol (plusieurs annees), la coloration en souffre beaucoup. Si Ton adopte le formol-MüLLER, on aura soin ^) Strähuber, p. 424. '^) Koelliker (Anat. Anz. — Ergänzung z. Bd. XVIII, 1900, p. 205) dit: „Le priino fibre nervosa dello embrione non sono altro che prolungamenti soU(ü di cellule nervöse." XIX, 2. Chilesotti: Une coloiation elective des cylindros d'axe, 165 de le clianger des qii'il commencera a, se decomposer, seloii l'avertis- sement de son auteur ^. Les morceaux, une fois fixes, seront laisses pendant 5 a G jours dans le liquide d'impregnation pour les gaines medullaires de Weigert (bichromate de potasse 5, ahm chromique 2, eau distillee 100 ; cuire, eventuellement filtrer). Naturellement, comme pour la coloration des gaines medullaires selou Weigert, les morceaux portes dans ce liquide ne doivent pas depasser une epaisseur de 3 a 4 millimetres. Leur etendue n'a pas d'importance. II n'est pas necessaire de les rincer dans l'eau entre la fixation et l'impregnation. Les morceaux conserves dans le liquide de Müller peuvent y rester plusieurs annees et n'ont pas besoin d'autre impregnation. Deshydratation et inclusion. Le traitement avec al- cool est necessaire pour rendre possible Finclusion en celloidine, pour oter l'exces de liquide d'impregnation, et pour produire les modifi- cations particulieres qui favorisent la coloration. On suit pour cela la methode habituelle pour la coloration des gaines medullaires d'apres Weigert: Suspension des morceaux dans Falcool a 70 a robscnrite jusqu'jl ce que celui-ci ne se colore plus en jaune ; ensuite alcool a 96 et alcool absolu, alcool-ether, celloidine. Souvent, lorsque les morceaux sortent de la celloidine, ils sout trop impregnes de bichromate de potasse pour que la coloration elective des cylindres d'axe puisse reussir. II faut que limpregnation ait un certain degre moyen qui oscille entre des limites bien plus etroites que Celles qui permettent la coloration des gaines medullaires d'apres Weigert, ün degre trop fort empeche totalement la colo- ration , c'est-a-dire que les coupes la perdent tout a fait dans les liquides differenciateurs ; un degre trop faible rend la differenciation ulterieure inegale de sorte qu'on obtient des iles colorees d'une maniere ditt'use. On ne peut pas donner de regle fixe pour obtenir le degre favo- rable ; tous ceux qui oiit travaille techniquement dans le Systeme nerveux savent avec quelle variabilite des morceaux ditlerents prennent et perdent ditferemment le bichromate de potasse. J'ai observe la dedaiis les plus grandes variations. Si les morceaux, en sortant de la celloi- dine, ont une couleur brune tres foncee, il faudra les laisser quelques ') Orth , J. , Ueber die Verwendung des Formaldehyd im patholog'i- schen Institut zu Göttingen (Berliner klin. Wochenschr. 189G, No. 13; voir ce Journ. Bd. XIII, 1896, p. 31Gj. 166 C h i 1 e s 1 1 i : Une coloration elective des cylindres daxe. XIX, 2. joiirs dans Falcool k 70, oü, comme c'est connu, ils perdent encore une certaiiie quantite de bichromate, ce qiü est rendu visible par le depot gris qui, a la lumiere, trouble le liquide. Mais au bout d'un certain temps la perte devient trop grande et compromet la differen- ciation. En general le sejour dans l'alcool a 70 ne doit pas depasser 10 a 12 jours pour les morceaux traites selou la methode de Weigert, et 2 mois pour ceux qui ont ete conserves dans le liquide de Müller. Je repete que bien de morceaux se comporteut ditferemment. Comme on voit il est impossible de donner des regles techniques exactes ;i ce sujet. Je peux seulement dire que pour obtenir des coupes bien colorables il ne faut pas porter au microtome des morceaux d'une coloration trop foncee ni tirant trop sur le brun, de meme, la nuance ne doit pas s'etre transformee en gris verdätre trop clair. Les degres intermediaires : brun jaune verdätre ou gris jaune, donnent en general de tres belles preparations. En considerant ce que je viens d'exposer, si, apres Tinclusion, on ne peut pas faire subir tout de suite aux morceaux les traite- ments ulterieurs , on peut les conserver de la maniere que je vais dire, afin de les avoir prets pour la coloration quand on le desire. Ou bien, on peut les tenir dans la derniere Solution de celloidine, meme pendant quelques mois; ou bien, en les sortant de la celloi- dine on peut les mettre directement dans le chloroforme, oü ils s'endurcissent tres rapidement et seulement jusqu'au degre necessaire, et se conservent inalteres pendant tres longteraps, ne perdant qu'une quantite tout ä fait insignitiante de bichromate. Ni dans un cas ni dans l'autre les morceaux ne souft'rent, pas meme pour la coloration de Weigert, ni pour celle de Strähuber. Avant de les couper au microtome, on les laisse au moins quelques heures dans l'alcool ä environ 70, oü ils perdent le chloroforme, ce qui eclaircit leur cou- leur. Si apres ga ils sont encore trop fonces on les laisse dans l'alcool encore quelques jours, jusqu'ä ce qu'ils aient pris la nuance deja mentionnee, favorable ä la coloration. J'ai beaucoup insiste sur cette question de limpregnation parce qu'elle est la plus importante pour obtenir de bons resultats. Coupe des morceaux. La coloration reussit d'autant mieux que les coupes sont plus minces. Au microtome il ne faudra pas couper ä })his de 20 /<, autrement la superposition de plusieurs couches de cylindres d'axe fera paraitre la coloration incertaine et confuse et la nevroglie ne sera pas parfaitement decoloree de fagon uniforme. II faudra snrtout prendre garde que les coupes n'aient XIX, 2. Chiles otti: Une coloration elective des cylindres d'axe. 167 pas d'inegalites d'epaisseiir ; poiir que la coloration se prodiüse par- tout elective, il est necessaire que les coupes soieut partout d'epaisseur uniforme. II va de soi que les coupes conservees plusieurs jours dans l'alcool perdent le bichroraate plus vite que les morceaux, et des lors offrent les memes inconvenients. Coloration. La Solution colorante se fait de la maniere suivante. Ou met un granime de carmiu nacarat (Merck, Darm- stadt) finement pulverise dans un ballon de verre avec environ 250 cc d'eau simple faqua fontis) et on fait bouillir pendant une demi-heure. Une ebullition plus prolougee ne gate rien. Le liquide se reduit ä environ 200 cc et il prend une couleur rouge tres foncee semblable a, celle du carmin d'alun. Alors on laisse refroidir completement la Solution qui reste d'un rouge fonce, limpide, et qui donne quelque depöt. Le mieux est de la laisser reposer pendant 24 heures. On la transvasera sans la secouer pour la delivrer du depöt. On ajoute alors , pour chaque cc de Solution transvasee, une goutte de Solution alcoolique (alcool a 70) a 1^/^ d'acide chlorhydrique pur; c'est-a-dire 3 cc de Solution chlorliydrique, pour 100 cc de Solution de carmin. On secoue fortement pour melanger. Alors le liquide se trouble et devient d'un rouge clair tres vif. Au bout de 5 minutes on melange de nouveau en secouant vivement. On laisse reposer pendant 24 beures pour que l'eventuel depöt tombe au fond ; pour en debarrasser la Solution, qui se maintiendra du reste toujours trouble , on la transvase sans la secouer. Des lors eile est prete ji etre employee. Elle se conserve longtemps ; j'en ai depuis six mois qui colore tres bien; avec le temps eile devient plus foncee, et il nie semble que son pouvoir colorant angmente d'intensite. Pour la preserver des moisissures, auxquelles eile est tres exposee, on y ajoutera une petite quantite (environ 1 : 1000) de thymol finement pulverise. Je dois encore dire que s i o n e m p 1 o i e de 1 ' e a u d i s t i 1 1 e e 1 a Solution n ' a u r a pas de pouvoir colorant. Le degre tres faible d'alcalinite de l'eau naturelle est süffisante et necessaire pour dissoudre le carmiu autant qu'il faut ; eusuite Faddition de l'acide chlorhydrique accomplit les changements qui rendent la Solution apte ä colorer. — Differentes Solutions alcalines ajoutees meme en proportion tres faible a l'eau distillee, n'ont donne aucun resultat favorable. La qualite de la poudre de carmin a la plus grande importance. 168 Chilesotti: Une coloration elective des cylindres cl'axe. XIX, 2. On sait qiie chaqiie fabricaut a des secrets particiüiers pour la fabricatioii du carmiu^, et que, par siiite, ehaque carmin represente une combinaison chimique diftereute, J'ai experimente seulement cehii de Merck (Darmstadt), eu vente chez Buchner u. Sohn (Mün- chen), et celiii de GrIibler (Leipzig). Le premier m'a donue de tres bous resultats ; le second s'est montre tont a fait inutilisable dans ce but. La coloration des eoiipes s'execute ainsi : On les passe dans l'eaii pour les delivrer de l'alcool; ensuite on les laisse au moius 20 heures dans la Solution colorante. Un sejour plus long ne g:\te rien; il est meme tres favorable ; Jen ai laisse pendant plusieurs semaines et elles n'ont pas souffert le moiudre dommage. La Solu- tion deja employee peut servir de nouveau, si toutefois on n'y a pas immerge des coupes trop impregnees de bichromate, car celui-ci, en se dissolvant dans le liquide, trouble son pouvoir colorant. D i ffc r c n ciat i o n. Sorties du carmin , les coupes seront rincees dans l'eau distillee oii eile pourront rester meme quelques heures si l'on a soin d'eviter toute reaction alcaline, meme tres legere. — Elles doivent etre intensivement et uniformement rouges, de fagon qu'on ne puisse plus distinguer aucune de leurs particularites de structure. Le contour de celloidine aussi doit etre intensivement colore, de sorte qu'on ne le distingue plus guere de la substance nerveuse que par sa transparence , et non par une nuance de cou- leur differente. Si la coupe ne se presente pas de cette maniere c'est qu'il y a eu une taute dans l'impregnation, et le resultat final Sera detavorable. II peut arriver que quelque coupe couserve attachee de la poudre de carmin, deposee d'une maniere anormale pendant la colora- tion. II faudra alors Ten debarrasser en la secouant dans l'eau et, au besoin, en la brossant tres legerement dans l'eau avec un pinceau fin. Avant de passer les coupes dans les liquides de diöerenciation il faut prendre bien garde a ce qu'elles n'aient pas de plis profonds. Pour les etendre, on peut les passer dans l'acool fort, les detendre eventuellement avec un pinceau et les remettre dans l'eau oü elles acheveront de s'aplanir. La oii il y a des plis profonds la differen- ciation n'agit que partiellement. Le mieux est de difterencier ehaque coupe separement parce ^) Lee, A. B., u. Mayer, A., Grundzüge der mikroskopischen Technik. ■1. Aufl. Berlin (Friedländer) 19()L p. 149. XIX, 2. Chilesotti: Une coloration elective des cylindies d'axe. igg que cette Operation exige une grande siirveillance. Un immerge d'abord la coupe pendant environ 30 secondes, en la mainteuant legerement agitee, dans une Solution aqueuse de permanganate de potasse a 1 : 2500 (pratiquement on verse une partie de la Solution ordinaire de Pal ^/^^'/q? <^aiis environ 5 parties d'eau). II vaut niieux que la concentration soit plus failde plutot que plus forte. p]nsuite on passe la coupe directement dans une Solution aqueuse saturee d'acide sulfureux (SO., a 5^/q). La duree exaete du sejour dans ce liquide na pas d'importance ; 10 secondes sont süffisantes, mais on peut aller jusqu'n une minute Sans danger. Enfin on lave bien dans Teau. On repetera la ditfereuciation jusqu ä ce que la coupe n'ait plus qu'une couleur rose pale tres faible, sillonnee ga et lä de traits plus rouges de forme et d'epaisseur tres differentes. Alors on la lavera bien dans l'eau distillee, on la passera par Talcool a 96 et ])ar le xylol phenique, et on la montera en bäume de Canada. Le permanganate agit sur le carmin comme decolorant , et a une action forte et assez rapide. En mt'nne temps il donne a la section une teinte de rouille. L'acide sulfureux arrete a l'instant la decoloration, et fait dis- paraitre presque aussi rapidement la teinte de rouille ; de cette facon, avec la ditferenciation fragmentee , il permet aussi de se rendre compte des progres de la decoloration, qui marche avec une rapidite differente pour les ditferents morceaux. Le lavage dans l'eau, avant de reprendre la ditferenciation, est necessaire pour empecher l'acide de nuire a l'uniformite de l'action du permanganate , et de gäter rapidement cette Solution , forte pour le carmin , mais tres faible devant l'acide. On ne peut pas donner une regle pour etablir combien de fois on doit repeter cette Operation; en general c'est entre ö et 10 fois. Quand la coupe est deja devenue un peu pale, il taut dimiuuer pro- gressivement la duree de Timmersion dans le permanganate, en la reduisant juscpia 6 a 4 secondes. Souvent quelques secondes suffi- sent pour decider de la ditferenciation et decolorer trop ou trop peu. La surveillance diligente se rapporte seulement j\ Taction du permanganate ; la duree du sejour dans l'acide sulfureux na, comme je Tai dit, que peu d'importance; jusqu'ä une minute il ne gäte pas, on peut meme dire qu il ravive un peu la nnance de la colo- ration ; un sejour de plusieurs rainutes commence a dissoudre le carmin. 170 Chilesotti: Une coloration elective des cylindres d'axe. XIX, 2. La cellouline perd completement la coiileur bien avant que la differenciation soit accomplie. La ditferenciation offre quelque diffi- culte et exige ime certaine pratique parce qii'on ne peiit se regier que sur les variations de couleur macroscopiqiies de la coiipe. Le controle soiis le microscope est tres iiicommodc, les cylindres d'axe n'apparaissant bien qu'apres l'eclaircissement dans le xylol. II serait donc trop long d'executer la deshydratation et reclaircissement cbaqiie fois qu'on voudrait controler les progres de Toperation. Avec un peu de pratique on arrive facilement ä determiner avec exaetitude le meilleur monient pour mettre terme a la decoloration. Les coupes peuvent ensuite sejourner sans dommage plusieurs heures dans l'alcool et quelques jours dans le xylol phenique. Voiei le resultat de la coloration : Les cylindres d'axe sont colores en rouge intense (l'intensite est plus grande dans les morceaux conserves dans le liquide de Müller) jusqu'aux plus minces fibrilles, soit dans les sections lougi- tudinales soit dans les verticales. Les cellules ganglionnaires sont aussi intensivement rouges, leur contour est souvent estompe ou peu precis , la partie entourant le noyau et ce dernier resteut toujours colores , meme si une differen; ciation trop longue a decolore en partie les cylindres d'axe. On ne voit jamais de dessin de substance tigroide. La nevroglie, les gaines medullaires , les prolongements proto- plasmiques des cellules sont completement incolores. Par contre, une partie des corpusciiles sanguins et une partie des parois des vaisseaux, surtout la tunique raoyenne, restent colorees. Le tissu conjonctif, en general, ne se decolore que partiellement. D'habitude les noyaux de la nevroglie sont d'un rouge orange. Exceptionnellement la partie des prolongements protoplasmiques la plus procbe de la cellule peut rester faiblement coloree ; on le voit surtout dans les cellules de Purkinje. Les bords de la preparation , s ils ne possedent pas des fibres reunies en faisceaux, restent presque decolores sur l'epaisseur de quelques /-t, quelle que soit la largeur du contour de celloidine. Je ne sais ä quoi attribuer ce fait que j'ai souvent observe aussi avec la coloration des gaines medullaires d'apres Weigert. Les preparations se conservent tres bien, j'en ai laisse au soleil pendant (juelques jours et elles n'ont subi d'alteration d'aucune sorte. XIX, 2. Chilesotti: Une culoration elective des cylindres d':ixe. 171 Je crois necessaire de repeter encore (luelqnes nvertissements siir certaiues modalites de cette coloration, poiir eviter les insucces. La oü il y a des inegalites dans la coiipe , la differenciation s'aceomplit tres mal. Le degre d'impregnatioii avec le bichromate de potasse a la plus grande infiuence sur le resiiltat final. Par exemple taiidis que dans certaines coupes d'nn niorceau bien im- pregne de la moelle allongee, j'obtenais les cellules et les cylindres d'axe de la lamelle olivaire tres nets et distincts sur le fond decolore, dans d'autres coupes du meme morceau, que j'avais laisse encore plusieurs jours dans l'alcool , il restait dans les lamelies olivaires ({uelques iles rougeatres de nevroglie qui ue disparaissaient que si Ion prolongeait la ditterenciation jusqu'a ce que les cylindres d'axe de la substance blanche perdissent leur intense coloration. II est donc bon , dans certains cas d'impregnation imparfoite , d'executer, dans les differentes coupes du meme morceau , des diflferenciations ä deux degres , lune pour la substance blanche et l'autre pour la grise. Lorsque Timpregnation est un peu faible, quelques rares gaines resteut colorees, quelques rares sections verticales de cylindres d'axe se decolorent ; niais il est toujours facile de distinguer les quelques gaines colorees, des cylindres d'axe soit normaux soit älteres. Pour ce (fui concerne les sections verticales on s^ gardera de prendre pour des gaines colorees les sections des tout petits vaisseaux. Je n'ai pas encore obtenu de resultats constants dans la sub- stance grise, soit de l'ecorce du cerveau soit des noyaux de la base, non plus que dans la STibstance gelatineuse de Rolando. Sur ees points la nevroglie reste souvent en grande partie coloree, a vrai dire moins intensivemeut que les cylindres d'axe, de Sorte qu'on peut les distinguer parmi eile, mais pas assez clairement pour permettre un diagnostic certain des fines fibrilles. Je n'ai obtenu ici de heiles preparations que quand l'epaisseur des coupes ne depassait pas 5 /^, ce qui est difticile a obtenir avec l'inclusion en celloidine. Je dois cependant noter que souvent avec un faible grossisse- ment on croit voir une ile de nevroglie coloree la oii un grossisse- ment plus fort montre au contraire un reseau serre de cylindres d'axe etroitement entrelaces et, quelquefois, superposes en plusieurs couches. La coloration reussit particuliferement bien dans la substance blanche, le corps calleux, le centre ovale, la couronne rayonnante, 172 C'hilesotti: Une coloration elective des cylindres d'axe. XIX, 2. dans le pont de Varole, dans la moelle allongee, dans le cervelet, oü la conche gramileuse reste coloree en rouge orange , dans la moelle epiniere, surtoiit si on en fait des coupes longitudinales. II reste encore une question a traiter. Quelles sont les parties du cylindre d'axe qui se colorent avec cette methode ? Dans mes preparations les sections vertieales se presentent toujours comme de petitcs plaques inteusivement rouges, homogenes, tantot rondes tantot anguleuses, irregulieres de differentes fagons. Quel que soit le gros- sissement on ne voit jamais aucune particularite de structure. La coloration de Strähuber, par contre, donne souvent des formes bleues en croissant ou en cercle, avec des renflements, et contenant souvent un point brun ä 1' Interieur. Ma coloration dans les fibres normales ne met jamais en evidence la „leichte flache Anschwellung des Achsencj'linders in regelmässigen Abständen, etwa entsprechend dem Bilde eines geraden Federstriches, bei dessen Anlegung auf die Feder in kurzen Abständen ein leichter, flüchtiger Druck ausgeübt Avurde" que Strähuber decrit ^, mais le cylindre d'axe apparait plutot comme un faisceau de forme non cylindrique et un peu roule sur son axe , comme l'ont deja decrit ScHULTZE et Schenk " ; il montre quelques petites irregularites des con- tours mais (jui ne ressemblent pas ä celles que l'on remarque avec le bleu d'aniline. — Les cylindres d'axe colores avec ma methode apparaissent toujours plus minces que ceux colores au bleu d'aniline. Les fonnations nommees „gouttes de myeline" ne se colorent pas avec ma methode, tandis ciu'elles se colorent fortement avec celle de Strähuber. Dans les sections longitudinales des fibres normales, avec ma methode, la ligne rouge du cylindre d'axe est ininterrompue, par contre, Strähuber, avec le bleu d'aniline, a constate de frequentes petites interruptions de coloration, correspondant d'habitude aux etranglements de Raxvier, :i travers lesquelles on voit passer seule- ment le faisceau incolore des flbrilles primitives. II pense que ce faisceau incolore est trop gros pour etre compose par les seules ^) Strähuber, A., (Euvre citee, p. 425. -) Schenk, S. L., Elementi di istologia normale dell'uomo. Trad. ital. citn note di C. Goegi, p. 82. XIX, 2. Chiles otti: Une coluration elective des cylindres d';ixe. 173 tibrilles et, par siiite, il admet daus le cylindre d'axe trois parties : 1) une siibstance colorable avec le bleu d'aniline, ä laquelle pour le momeut il ne veut pas domier de uom , et qui serait „periaxiale oder sagen wir peritibrilläre Substanz"; c'est celle qui a ete decrite aussi sous le nom de nevroplasme et que Neumann ^ appelle periaxiale, en disant qu'elle forme la partie Interieure des nommees „gouttes de myeline". Kölliker- nie l'existence de cette substance fluide. — 2) Les fibrilles primitives qui ne se coloreut pas avec le bleu d'aniline. — 3) Une substance fluide comme la premiere, mais qui ne se colore pas avec le bleu d'aniline et qui serait peut-etre le nevroplasme des fibrilles non colorees, ou une substance diff6rente. Strähuber declare qu'on ne peut pas decider la question. Je ne traiterai pas ici la structure du cylindre d'axe, chose incertaine, tres discutee et sur laquelle je n'ai pas fait de reclierches originales ; je n'ai donc pas d'opinion personnelle bien decidee et je ne pourrais que comparer entre eux les travaux des autres ; ce n'en est pas le lieu ici. Mais , que le cylindre d'axe soit compose de fibrilles et dune substance interfibrillaire, comme le disent Kupffer'', Malley et Schifferdecker ^, ou qu'il soit un ecbafaudage a, reseau contenant un fluide, comme le soutienuent Leydig'' et Held*', ces parties essentielles sont par ma metliode colorees in toto, ce qui est demoutre par l'image rouge homogene occupant sans Interruption le centre de la fibre nerveuse, et que j'ai decrite auparavant. La partie qui ne se colore pas est celle que Strähuber appelle sub- stance periaxiale ou perifibrillaire, qui, seule, se colore avec le bleu d'aniline , et qui n'arrive pas jusqu'a la cellule, mais semble liee ä la presence de la gaine meduUaire. Les Images diff'erentes dounees par les deux methodes , et que *) Neumann, E., Nervenmark- und Achsencylindertropfen (Virchow's Arch. Bd. CLII, H. 2, 1898, p. 241; volr ce Journ. vol. XV, 1898, p. 363). ^) Kölliker, A. , lieber Achsencylindertropfen (Anat. Anz., Ergänz, z. Bd. XVIII, 1900, p. 172). '') Kupffer, (Euvre citee. ^) Schifferdecker, P. u. Kossel, A. , Gewebelehre, Bd. II, p. 201 —204. '") Leydig, f.. Der reizenleitende Theil des Nervengewebes (Arch. f. Anat. u. Physiol. Anat. Abth. 1897, H. 5, 6, p. 431). ®) Held, A., Beiträge zur Structur der Nervenzellen und ihrer Fort- sätze (Arch. f. Anat. u. Physiol. Anat. Abth. 1895—1897, H. 3, 4, 5, G und Supplement-Band). 174 Chilesotti: Une coloration elective des cylindres d'axe. XIX, 2. j'ai decrites plus haut, demontreut la difference des parties respec- tivement colorees. Je ne saurais expliquer pourquoi , avec le carmiu , on obtient du cylindre d'axe une image completement coloree sans aucune particularite de structure, taudis que les prolongements protoplasmi- ques, qui contiennent comme lui les fibrilles primitives de Bethe-', restent tout a fait incolores. La methode que j'ai exposee sert surtout pour l'etude topo- prapliique des cylindres d'axe et pour celle de leurs alterations pathologiques. En resume la methode est la suivante : 1. Fixation. Liquide de Müller pendant 4 mois ou davan- tage; ou bleu formol-MüLLEii (1 : 10) ou bien formol (environ I^Jq) pendant 4 jours au moins. 2. Impregnation (seulement pour les morceaux fixes en formol-MtJLLER ou en formol). Sejour dans le liquide d'impregnation pour les gaines medullaires de Weigert, pendant 5 Jours. o. Inclusion en celloidine, aussi longtemps qu'on le desire. Endurcissement de la celloidine et conservation des morceaux dans le chloroforme, si on ne veut pas les colorer tout de suite. Sejour dans l'alcool ä 70, si la couleur des morceaux est trop foncee. 4. Coupes äussi minces que possible surtout pour la substance grise ; en tout cas ne depasser jamais 20 ju. Eviter toute inegalite d'epaisseur. 5. Coloration. Solution colorante : Faire bouillir pendant une demi-heure 1 g de carmin nacarat (Merck, Darmstadt) finement pulverise, dans environ 250 cc d'aqua fontis ; laisser reposer pen- dant 24 heures ; transvaser pour debarrasser le liquide du depöt: ajouter une goutte de Solution alcoolique (alcool a 70) ä 1 ^/^ d'acide chlorhydrique pur, par cc de carmin aqueux (c"est-a-dire 3 cc pour 100 cc) ; secouer fortement a deux reprises a 5 minutes d'intervalle ; laisser reposer 24 heures ; transvaser pour debarrasser la Solution du depot (pas filtrer!). Ajouter environ 1 : 1000 de thymol pour preserver des moisissures. Les coupes resteront au moins 20 heures dans la Solution colorante. 7. Lavage des coupes dans l'eau distillee. Prendre soin de 1) Bethe, A. , Ueber die Primitivfibrillen (Morphol. Arb. Bd. VIII, 1898, p. 95). XIX, 2. Chilesotti: Une coloration elective des cylindres d'axe. 175 les debarrasser des plis et de la poudre de carmin qiii , anormale- ment, peiit se deposer pendant la coloration. 8. Diff er enciation. Immerger les coupes pendant 30 se- condes dans iine Solution aqueuse de perraanganate de potasse ^/»aoo (c'est-ä-dire 5 parties d'ean et 1 partie de la Solution ä ^I^^Iq fle Pal). Les passer pendant 10 a 60 secondes dans une Solution aqueuse saturee d'acide sulfureux (SO.^, 5^/o). Laver dans l'eau. Repeter l'operation en diminuant progressivement le sejour dans le perman- ganate, jusqu'ä ee que la coupe prenne une coloration rose sillonnee de traits plus rouges. Changer les Solutions des qu'elles commencent a s'alterer. 9. A 1 c 1 96, X y 1 1 p li e n i ij u e , bäume de C a n a d a. Les cylindres d'axe et les cellules ganglionnaires seront intensement colores eu rouge ; la nevroglie et les gaines meduUaires resteront completemeut decolorees ; les corpuscules sanguins, les noyaux de la nevroglie, le tissu conjonctif ne seront decolores que partiellement. J'espere aussi avoir demontre par ce travail sur la coloration elective et par celui sur la coloration diflfuse, que le carmin, presque abandonne ces dernieres annees dans la technique du Systeme nerveux, peut encore donuer pour les colorations en masse des cylindres d'axe des resultats meilleurs que ceux qu'on a obteuus jusqu'fi present avec les autres substances colorantes ou impregnantes. J'appelle sur lui l'attention des microscopistes , en esperant que de nouvelles recherches viendront reudre plus facile la technique et meilleurs- les resultats de la coloration elective des cylindres d'axe. En terminant je tiens Ji exprimer k M. le Prof. Doct. Schmaus mes meilleurs remerciements pour l'interet qu'il a bien voulu prendre a ce travail. Munich, Juillet 1902. Note. .T'avais deja envoye le travail ci-dessus h ce Journal , lorsque j'ai pris connaissance d'un ouvrage tout recent de Kaplan^, dans lequel , eutre autres , il donne une nouvelle coloration elective des ') Kaplan, L., Nervenfärbungen (Neurokeratin, Markscheide, Achsen- cylinderj. (Arch. f. Psych, u. Nervenkrankh. Bd. XXXY, 1902, H. 3, p. 825.) ]jß Gdlovine: Sur le fixage du Neutralroth. XIX, 2. cylindres d'axe. La substance colorante qivil emploie est r„Anthracen- eiseiigalhistinte", poiir le reste la technique de la coloration se rapproclie de celle de Strähuber et de la mienne, toiites n'etant que des derivations de la methode Weigert-Pal. Comme la coloration de Kaplan exige ime impregnation des morceaux pendant au moins trois mois dans une Solution de sels de chrome, je n'ai pas encore eu le temps de Texecuter pour en com- parer les resultats avec les miens. D'apres ce que dit Tauteur j'ai dejä vu qu'ils en ditferent en ce que les cellules ganglionnaires ne sont pas colorees. Munich, Septembre 1902. [Eingegangen am 23. Juli 1902.] Sur le fixage du Neutralroth/ Par le Dr. Eugene Golovine ä Kazan. Au cours de mes recberches sur la pbagocytose cbez les Nematodes, j'ai eu l'occasion plus d'une fois de nie convaincre de l'opportunite des colorations vitales par le Neutralrotb dans l'etude de cette question. Ce colorant ditferencie faeilement et d'une maniere tres nette le Systeme pbagocytaire des Nematodes libres marins et d'eau douce, telles que les divers Oncbolaimus, Oyatbolaimus, Symplocostoma, Trilobus etc. Malbeureusement les Images qu'on obtient avec le Neutralroth etant comparativement de courte duree, l'etude detaillee sur les objets vivants de divers tissus, colores par ce reactif devient tres difficile. Jusqu'a present aucune methode n'avait ete proposee pour fixer le Neutralroth. VjU consequence deja en 1899, pendant mes ') Voir aussi Golovine, E., Recberches sur les Nematodes (Mem. de rUniv. Imp6r. de Kazan t. V, 1901 [en russe]). XIX, 2. Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. 17 7 etudes dans le laboratoire de feu mon maitre A. 0. Kowalewsky ä la Station Biologiqne de Sevastopol, je m'etais mis ä la recherche d'ime methode i^our fixer ce colorant. Or, il s'est trouve que le fixage du Neutralroth qui avait jus- qu'a preseut parn comme impossible etait en realite uue chose fort simple. Deja en automne 1899 j'avais eu Toccasion de deniontrer dans le meme laboratoire des coupes du Systeme phagocytaire des divers Nematodes, colorees intra vi tarn par le Neutralrotb. Les methodes elaborees par moi ont ete verifiees depuis sur quelques autres animaux (Nauplius, Turbellaria, Ampliioxus etc.) et jusqu'ä present m'ont toujours parfaitemeut reussi. Mes premieres etudes furent dirigees dans le but de trouver une combinaisou du Neutralroth ne se dissolvant pas dans l'eau, l'alcool et d'autres substances, employees pour le fixage des tissus, pour leur deshydration et leur traitement ulterieur. Malgre de vastes recherches dans ce sens je n'ai pas reussi ä trouver une pareille combinaison du Neutralroth et je penche a croire qu'en general eile n'existe pas. L'etude de divers precipites, qu'on obtient en agissant par les divers reactifs sur le Neutralroth, dissous dans l'eau, ou sur les animaux colores par lui, demontre qu'efFectivement on ue peut pas obtenir une combinaison du Neutralroth tout a fait insoluble dans l'eau et Talcool. — Toutefois le probleme de fixage du Neutralroth se resoud parfaitement ainsi qui suit: on precipite le Neutralroth dans les tissus colores par lui par uii reactif quelconque, en ne faisant pas attention, pour le moment, si ce precipite se dissout ou non dans l'eau et l'alcool ; ensuite on fixe et on deshydrate l'objet par les reactifs dans lesquels le precipite obtenu du Neutralroth ne se dissout pas. Le traitement de l'objet, colore intra vitam par le Neutral- roth se divise ainsi en parties suivantes : 1) precipitation du Neu- tralroth; 2) fixage de l'objet; o) Lavage et deshydration; 4) enrobage dans la paraffiiie ; 5) coloration hystologique des coupes. De nombreux essais ont demontre que la precipitation du Neu- tralroth et le fixage de l'objet peuvent etre aisement combines, c'est a quoi persounellement je prefere toujours recourir. 1. Fixage. — On peut precipiter le Neutralroth et fixer en meme temps l'objet par les reactifs suivants : a) B i c h 1 r u r e d e m e r c u r e. — Ce reactif peut etre employe ou en Solution conceutree dans l'eau, ou en qualite d'ingredieut de Zeitschr. f. wisa. Mikroskopie. XIX, 2. 12 178 Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. XIX, 2. divers melanges, employes dans la technique actiielle pour le fixage des tissiis. Dans tous les cas on regoit la meme combinaison mercurique du Neiitralrotb. Cette combiuaisou ne se dissout pas dans l'essence de girofle, tohiol, xylol, l'ether et la paraffine. Elle se dissont peu dans l'eau et tres facilement dans I'alcool de diverse concentration, dans la glycerine, le cbloroforme et les essences de bois de cedre et d'origan. La combinaison mercurique du Neutralrotli a la meme couleur que le Neutralrotb lui-meme. Elle se depose en cristaux microsco- piques en forme d'aiguilles tres fines. Ce qu'il y a de tres remarquable, c'est qu'apres le fixage par le sublime de l'objet colore intra vitam par le Neutralroth, les diverses nuances, qu'a pris le colorant sous l'action des acides et des alcaiis des tissus restent intactes. De cette fagon on a la possi- bilite de determiner la reaction des diverses parties de l'objet sur les coupes, ce qui presente certainement un immense avantage sur l'etude de la reaction dans les tissus vivants. Parmi les divers melanges fixateurs, contenant le sublime j'obtiens toujours de bons resultats avec le melange 5 : 1 de la Solution sa- turee du sublime dans l'eau et de l'acide acetique. Si on veut conserver sur les coupes les nuances du Neutralroth qui demontrent la reaction acide ou alcaliue des tissus, on fixe l'objet par la Solution saturee du sublime, neutralisee par le chlorure de soude avec une petite quantite d'acide acetique. Parmi les melanges du sublime que j'ai eu l'occasion d'essayer, les suivants m'ont donne des resultats tout ä fait satisfaisants : sublime -|- acide picrique (melanges de Rabl ^ et de Mann ^). A ces melanges on peut ajouter de l'acide osmique dans la proportion habituelle: 5 cc de 1 ^/^ sur 100 cc du melange. On obtient aussi de bons resultats avec le melange platino-osmique-acetique de Hermann'^. Les Solutions saturees du sublime dans I'alcool a, 50 ä 80^ avec du chlorure de soude et autres, proposees par quelques auteurs. ^) Rabl, C, Einiges über Methoden (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XI, 1894, p. 164). -) Mann, G., Ueber die Behandlung der Nervenzellen für experimentell- histologische Untersuchungen (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XI, 1894, p. 479). ■■') Hermann, F., Beiträge zur Histologie des Hodens ( Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXXIV, 1889, p. 58; voir Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. VI, 1889, p. 325). XIX, 2. Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. I79 ne couvienuent pas pour les objets colores par le Neutralroth, car ils ne precipitent pas ce dernier. b) Acide chromique. — Les Solutions d'acide chromique, meme tres diluees a partir de ^.^ %? ^"^^i que les divers melanges fixateurs, dans lesquelles il entre comme ingredient, precipitent le Neutralroth. Le Chromate de diamidoraethyltokiphenazine qui se forme dans ces cas se depose en forme de petits cristaux rouges tres ressemblant par leurs formes k ceux qu'on obtient en precipitant le Neutralroth par le sublime. Ces cristaux se dissolvent assez bien dans l'eau et encore mieux dans l'alcool, le chloroforme et la gly- cerine. Ils ne se dissolveut pas dans l'ether, le toluol, le xylol et la paraffine. Parmi les divers melanges a l'anhydride chromique, on obtient des resultats satisfaisants avec les melanges de Flemming (melange fort) et le melange ehromo-picrique de Fol avec Tacide osmique ou sans lui. c) Bi Chromates de potasse et de soude. — Ces deux sels fixent parfaitement le Neutralroth dans les tissus en formant avec lui la meme combinaison que l'acide chromique. Le melange de bichromate de potasse et d'acide osmique (100 cc de bichromate ä 5 % + 5 ä 6 gouttes d'acide osmique h 1 ^/q) donnant de tres bons resultats pour le fixage ordinaire de petites Nematodes, peut etre employe pour le fixage des objets colores par le Neutralroth. La liqueur de Müller et la liqueur de Johnson (bichromate de potasse -(- acide osmique -|- bichlorure de platine) donnent ä peu pres les memes resultats. Cependant ce dernier u'est bon seulement que fraichement prepare. Les Solutions alcooliques au bichromate de potasse et d'ammoniaque, et les divers melanges alcooliques avec ces sels, ne precipitent pas le Neutralroth. d) 1 d u r e de potasse. — Ce sei , employe habituellement avec le iode (Jod-Jodkaliumlösung) donne par double decomposition un precipite cristallique tres fin du colorant transformant le Neutral- roth en iodure de dimethyldiamidotoluphenazine. Ce dernier se dis- sout dans l'eau et l'alcool aussi bien que le Neutralroth. II ne se dissout pas dans le toluol, le xylol et la paraffine. e) Acide picrique. — La Solution saturee de l'acide dans l'eau a 30 ^ C. precipite le Neutralroth en aiguilles tres fines rouge fonce, qui se dissolvent assez bien dans l'eau et l'alcool et ne se dissolvent pas dans le toluol, le xylol et la paraffine. Cette com- binaison picrique du Neutralroth se forme aussi si on agit sur lui par les Solutions concentrees ä 30 "^ C. de l'acide picrique dans l'alcool ; 12* 180 Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. XIX, 2. ä des temperatiires plus basses une partie du coloraut reste eu Solution. Parmi les divers melanges picriques j'ai essaye seulement la liqueur de Kleinenberg et le melange picro-acetique (80 cc de la Solution saturee de l'acide picrique dans l'eau -{- 20 cc d'acide ace- tique). Ces fixages m'ont donne aussi de bous resultats. f) B i c h 1 r u r e de p 1 a t i u e. — La Solution k ^/^ ä 1 ^/^ de bichlorure de platine dans l'eau precipite le Neutralroth en lins cristaux rouge fonce, se dissolvant tres peu dans l'eau et compara- tivement peu dans l'alcool. Parmi les melanges fixateurs contenant ce sei, jai essay6 seule- ment les melanges mentionues plus haut. g) C h 1 r u r e d ' o r. — Ainsi que le sei analogue de platine, le cblorure d'or precipite trös bien le Neutralroth dans les tissus. La combinaisou platinique du Neutralroth et son aurate peuvent etre reduit jusqu'ä metal, Les deiix combinaisons se dissolveut tres peu dans l'eau, c'est pourquoi on peut prolonger le lavage des preparations presqu'ä Tenlevement total des chlorures. Apres la reduction du depöt, le metal reste exclusivement dans les parties de l'objet, ou se trouvait le Neutralroth. Comme je n'ai pas encore termine les experiences avec ces sels, ainsi qu'avec le chlorure de palladium, je m'abstiens pour le moment de donner une description plus detaillee de cette methode, la remettant ä une communication prochaine. Les essais aualogues avec l'azotate de l'argent ont moutre que ce sei dans les rapports indiques est considerablement Interieur aux chlorures de platine et d'or. Les methodes decrites de fixage des objets colores par le Neutral- roth, demontrent que ce fixage peut etre realise presque par tous les reactifs et melanges fixateurs employes dans la technique histolo- gique actuelle pour le fixage des tissus. Font exception seulement les Solutions pures d'acide osmique, de formaldehyde — fixages peu employes — et tous les sels cuivriques (la liqueur de Pvipart et Petit, par exemple, et autres). 2. Lavage et deshydration. — Parmi toutes les sub- stances, enumerees ci-dessus fixant les tissus et precipitant le Neutral- XIX, 2. Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. 181 roth, aucune ne doiiue de combinaison absolnment insohible dans l'eau et l'alcool. Ainsi le lavage complet de l'objet par l'eau oii Talcool ne peiit etre realise. Cependant certaines combiuaisons, par exemple, le Chromate de diraethyldiamidotoluphenaziiie, son anrate, son platinate ou sa combinaison palladiqne , ne se dissolvent pas meme en presence de quantites minimes de la Solution mere, c'est pourquoi on peut laver ä Teau presque jusqu'ä Tenlevement complet du reactif fixateur les objets , fixes par l'acide chromique , ces sels et les clilorures auriqne, platinique et palladiqne. Le lavage deünitif de Tobjet fixe par tous ces reactifs doit etre tont de meme produit par les Solutions des substances, ne dissolvant pas les combinaisous obtenues du Neutralrotli. Apres de nombreux essais je me suis arrete sur les Solutions concentrees dans l'eau de l'acide vanadique, picrique ou raolybdenique, du picrate d'ammoniaque et sur les Solutions de diverses coucentrations de molybdate d'ammoniaque. Les objets , fixes par le sublime ou ses melanges avec l'acide osmique , ne peuvent pas etre laves pas les Solutions de l'acide molybdenique et ses sels , car au cours du lavage se forme le molybdate de mercure , insohible dans Feau, Ce molybdate produit autour de l'objet une couche de cristaux qui remplissent aussi les tissus et gätent alors les coupes. Dans de pareils cas on doit laver l'objet par les Solutions concentrees d'acide picrique ou de picrate d'ammoniaque ou — si Ton ne veut pas obtenir une coloration histo- logique en jauue — par la Solution concentree d'acide vanadique. Le molybdate de mercure se dissout facilement dans les Solu- tions acidulees , c'est pourquoi on peut laver par les Solutions de l'acide molybdenique ou du molybdate d'ammoniaque les objets, fixes par le sublime -|- acide acetique. Les objets fixes par les melanges fixateurs dans lesquels entrent les Chromates, les chlorures d'or, de platine, l'azotate d'argent, le iode -j- iodure de potasse etc., peuvent etre laves par tous les reactifs indiques ci-dessus. Toutes les combinaisous du Neutralroth qu'on obtient pendaut le fixage se dissolvent dans l'alcool, c'est pourquoi la deshydration de Tobjet par ce dernier ne peut etre appliquee. Tout de meme on peut facilemeut deshydrater l'objet avec la gradation voulue par les Solutions alcooHques des acides molybdenique et picrique ou de leurs sels ammoniacaux. tg2 Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. XIX, 2. Habituelleraeiit je commence la desliydratioii de l'objet par les Solutions aloooliques de molybdate d'ammoniaque. Ni ce molybdate, ni l'acide molybdeuique ne se dissolvent dans l'alcool absolu, aussi avee l'augmentation de la concentration de de l'alcool, la solubilite de ces snbstances diminue-t-elle. Les alcools faibles dissolvent comparativement une grande quau- tite de molybdate et, en fortes concentrations, deforment toujours les objets delicats. Je me suis arrete aux Solutions suivantes comme me donnant toujours des resultats parfaitement satisfaisants. 1. Eau 70 cc Molybdate d'ammoniaque, Solution saturee 40 gouttes Alcool ä 90« 30 cc 2. Eau 60 cc Molybdate d'ammoniaque, Solution saturee 40 gouttes Alcool ä 90" 40 cc 3. Eau 50 cc Molybdate d'ammoniaque, Solution saturee 40 gouttes Alcool ä 90» 50 cc 4. Eau 40 cc Molybdate d'ammoniaque, Solution saturee 35 gouttes Alcool ä 90" 60 cc 5. Eau 30 cc Molybdate d'ammoniaque, Solution saturee 30 gouttes Alcool ä 90» 70 cc 6. Eau 20 cc Molybdate d'ammoniaque, Solution saturee 30 gouttes Alcool ä 90" 80 cc 7. Eau 10 cc Molybdate d'ammoniaque, Solution saturee 20 gouttes Alcool ä 90" 90 cc La Solution saturee de molybdate d'ammoniaque en quantites indiquees plus haut se dissout directement dans les alcools k 20 k 45"; mais dans les alcools plus forts eile ne se dissout plus directement et donne un depöt de cristaux. Tout de meme on peut la dissoudre dans ces alcools en la dissolvant auparavant dans l'eau, qu'on prend XIX, 2. Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. 183 pour la preparation de Talcool de la concentratiou voulue et puis en ajoiitant avec precaiition goutte par goutte l'alcool ;i 90*^ et en secouaut constammeut le flacon pour dissoudre le depöt qui se forme. Si on acidule legerement l'alcool par l'acide clilorhydrique, par exemple , ou par l'acide acetique , ou peiit alors coiislde- rablemeiit aiigmenter le contenu du molybdate d'ammoniaque dans l'alcool, le sei acide de ce molybdate etaut plus soluble que le sei neutre. On peut iutroduire le molybdate d'ammoniaque dans l'alcool a 85^ a 98 '^ seulement en acidulant l'alcool par l'acide chlorliydrique ou acetique ou en saturant l'alcool un peu chautfe par le picrate d'ammoniaque ou l'acide picrique. Pour preparer la Solution a l'alcool absolu on compte 30 gouttes de la Solution concentree du molybdate d'ammoniaque et on ajoute jusqu'ä la Saturation de l'acide picrique sec. Puis on complete ce melange jusqu'ä 100 cc par alcool absolu acidule de 1 ä 2 gouttes d'acide clilorhydrique concentre. J'ai egalement obtenu de bons resultats avec une simple Solution saturee de picrate d'ammoniaque ou d'acide picrique dans l'alcool absolu. On peut aussi compter 10 ä 15 gouttes de la Solution ä 50 ^/^ de molybdate d'ammoniaque dans l'eau et les diluer par 25 cc d'alcool absolu acidule par 2 ä 3 gouttes d'acide cblorhydrique con- centre. Le leger trouble, qui reste quelquetbis apres la dissolution du molybdate est sans importance pour le resultat final. Enfin on peut molybdeniser l'alcool absolu par quelques gouttes de Solution bouillante et fralcbement preparee du molybdate acide d'ammoniaque (sur 10 cc d'alcool absolu 2 a 3 gouttes de molybdate). Quelle que soit la metbode par laquelle on a deshydrate l'objet, on doit toujours finir la deshydration par la Solution concentree du picrate d'ammoniaque dans l'alcool absolu. Cette derniere enleve la Solution molybdenique et ne colore absolument pas l'objet. Le depöt de Neutralroth, apres ce traitement, conserve justement la couleur qu'il avait apres le fixage. 3. Eclaircissement de l'objet et ejirobag e da^isla paraffine. — Le toluol, le xylol et l'essence de giroÜe ne dissol- vent pas les precipites du Neutralroth iiidiques ci-dessus ; on peut IQ^ Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. XIX, 2. alors s'en servir pour reclaircissement de l'objet et pour le montage a la paraffiue ou au bäume de Cauada. Dans les cas oü il est indispensable de faire passer graduelle- ment l'objet de l'alcool absolu ä la liqueur eclaircissante, et quand on doit le traiter par les melanges alcooliques, il est indispensable de saturer Talcool eraploye par l'acide picrique ou le picrate d'am- moniaque. Ces derniers se dissolvent dans le toluol et le xylol quoique eii quantite mininime, mais süffisante pour qu'on puisse enlever les picrates de lobjet au nioyen de ces substances. Aprfes avoir change plusieurs fois le reactif eclaircissant, on regoit l'objet tout a fait libre de l'acide picrique et de picrate d'ammoniaque. L'objet, traite par uue des methodes decrites, est enrobe dans la paraffine par le procede habituel. Pour coUer les coupes on doit se servir du melange de Schälli- BAUM, car la Solution d'albumine dissout le Neutralroth. Je prepare le coUodion pour ce melange en dissolvant la photoxyline ou la celloidine dans le melange d'6tlier et de l'alcool absolu 2 : 1. 4. Coloration histologique des coupes. — Dans beaucoup de cas, pour avoir la possibilite de s'orienter dans la stru- cture de l'objet colore intra vitam par le Neutralrotli, il est indispen- sable d'obtenir encore une coloration histologique des coupes. Parmi les nombreux colorants histologiques, proposes actuellement, je n'en ai trouve aucun qui fut propre k ce but; les uns ne coloraient pas du tout les coupes, les autres les coloraient mais enlevaient le Neutralroth. Font exception les picrates mentionn6s et l'eosine. Ce dernier donne avec le Neutralroth une combinaison qui ne se dissout pas dans l'eau. Ajoute a la liqueur fixatrice au sublime, il colore l'objet Sans enlever le Neutralroth. Mais cette methode est d^fectueuse, car l'eosine donne une coloration diffuse des tissus. Tout de meme pour avoir la possibilite de s'orienter dans un objet connu, eile peut etre utile. Pour la coloration histologique je prepare une Solution d'hema- toxyline au molybdate : Eau 100 CO Hematoxyline lg Chloralhydrate 7—9 „ Molybdate acide d'ammoniaque, Solution ä 50<>/o . . 20 — 30 gouttes. XIX, 2. Golovine: Sur le fixage du Neutralroth. 185 La couleur est prete dans 8 a 10 jours si on la tient dans un flacon ouvert et au soleil. Les coupes se colorent en quelques secondes. Kazan, Septembre 1902, [Eingegangen am 7. October 1902.] 186 Referate. XIX, 2. Keferate. 1. Präparationsmethoden im allgemeinen. SchlUOrl, G., Die pathologiscb-histologischen Unter- sucbungsmethoden. 2. Aufl. Leipzig (Vogel) 1901, 263 pp. S^. Das Buch des Verf. hat vier Jahre nach der ersten, also ver- hältnissmässig schnell eine zweite Auflage erlebt. Wenn man das- selbe durchsiebt, wundert man sich darüber nicht. Es ist ein sehr inhaltreiches, kurz und klar geschriebenes Buch, welches das Nöthigste von den normal - histologischen Untersuchungsmethoden enthält und dann eingehender die pathologisch-anatomischen Methoden behandelt. Ein ausführliches Register erleichtert die Auffindung des Gewünschten. Das Buch kann nur empfohlen werden. Schiefferdecker (Bonn). Malassez, L., Sur les oculaires ä glace microm^trique et a usages multiples. Note complementaire (Arcb. d'Anat. Microsc. t. IV, fasc. 2, 3, 1901, p. 219 — 230 av. 3 figg.). Verf. bat in einer früheren Arbeit^ einige von seinen neuen Mikrometerocularen beschrieben , di'e er construirt hat , um die bei den jetzigen vorhandenen Nachtheile zu vermeiden. Es sind in- zwischen vielfach Anfragen betreffs dieser neuen Oculare an ihn ge- richtet worden und so bespricht er hier die fundamentalen Unter- schiede. Weiter bespricht er einige, schon früher construirte Modelle und endlich theilt er einige Verbesserungen mit, die er an einem 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVIII, 1901, p. 28. XIX, 2. Referate. ^87 der in der vorigen Arbeit beschriebenen Modelle inzwischen hat anbringen lassen. Es muss aller dieser Dinge wegen auf das Original verwiesen werden. Schiefferdecker {Bonn). Raniou y Cajal, S., Pequenas comunicaciones tecnicas. Procedimieuto de impregnacion de los discos de Ran VIER en los centros nerviosos. — Meto- dos de coloracion del axon media nte los re- ductores en combinacion con las sales de oro y con las de plata. — Procedimientos de teüido de la grasa de los centros nerviosos [Kleine technische Mittheilungen, Imprägnationsver- fahren der Ranvier 'scheu Scheiben in den Nerve ncentren. — Färbemethodeu des Achse n- cylinders durch reducirende Mittel im Verein mit den Salzen des Goldes und denen des Sil- bers. — Verfahren der Fettfärbung der Ner- vencentren] (Rev. trimestral Microgr. t. V, fasc. 2, .3, 1900, p. 95—109). I. Methode zur Färbung der K i 1 1 s u b s t a n z der cen- tralen Nervenfasern. Da die Silberfärbung der Zwischen- scheiben der Nervenfasern in den Centralorganen nur schwer einiger- maassen ausgiebig gelingt, hat Verf. eine neue Methode dafür aus- findig zu machen gesucht. Dieselbe ist die Folgende. Nicht zu dicke Stücke der Nervencentren werden bis zu 5 Tagen und länger gehärtet in der folgenden Mischung: Wasser 70 cc Formel 30 „ Unterschwefligsaures Natrium 2 — 4 g Dann kommen sie auf 2 bis 4 Tage in eine einprocentige Lö- sung von Silberuitrat. Ein- bis 2stündiges Auswaschen in Wasser (am besten in fliessendem, sonst auch in mehrfach gewechseltem destillirtem), Härtung in Alkohol, Schnitte, Damarlack oder Balsam. II. Methoden zur Färbung der A c h s e n c y 1 i n d e r der centralen Nervenfasern. A. Py rogaUus säur e und Gold chlor id. Eine der besten und sichersten Methoden. Man kann die Stücke einlegen oder auch injiciren. 1) Die Stücke werden 10 Tage oder länger in der folgen- den Mischung gehärtet. jgg Referate. XIX, 2. Formol 30 cc Wasser ^0 „ Pyrogallol 3 g Die Flüssigkeit härtet ausgezeichnet und erlaubt, schon nach 4 Tagen zu schneiden, wenn im Ofen bei 36° angewendet, sonst nach 8 oder 10 Tagen. Eine länger dauernde Härtung von einem Monat und mehr ist nur nützlich. 2) Uebertragen der Schnitte für eine bis 2 Minuten in Alkohol, Absaugen dieses mit Fliesspapier, oberflächliches Kinbetten mit erwärmtem Scalpell in einen Paraftinblock, Beim Schneiden wird das Messer mit verdünntem Alkohol befeuchtet, 3- bis 4maliges Auswaschen der Schnitte in destillirtem Wasser. Während dieser Manipulationen muss man den Gebrauch von metal- lischen Instrumenten möglichst vermeiden, da an jeder Berührungs- stelle das Präparat sonst später einen schwarzen Fleck bekommt. Man kann die Stücke übrigens auch in gewöhnlicher Weise in Celloidin oder Paraffin einbetten. 3) Uebertragen der Schnitte in ein Porcellan- gefäss mit Wasser, dem einige Tropfen Ammoniak zugesetzt sind. Bestimmte Nerventheile (z. B. Medulla spinalis) quellen hierin sehr stark. Dann muss mau eine gesättigte und filtrirte Lösung von Lithiumcarbonat oder von Ammoniumcarbonat nehmen. Die Reaction gelingt auch ohne Alkali, wird aber mit Hülfe eines solchen besser. Die Lösung darf nur eine halbe Minute einwirken ; Schnitte gelblich. 4) Gründliches Auswaschen in destillirtem Wasser (3- bis 4mal wech- seln). 5) Uebertragen in eine Goldchloridlösung von 1 : 2000 bis 3000. Um die Herstellung dieser zu vereinfachen , macht Verf. es so, dass er in ein mit Wasser gefülltes Porcellangefäss einige Tropfen einer einprocentigen Goldchloridlösung bringt, bis die Lösung leicht gelblich erscheint. Die Einwirkung des Lichtes oder der Zusatz von organischen Säuren fz. B. Ameisensäure) beschleunigen die Reduction, schaden aber der Schönheit. Die Reduction vollzieht sich auch in der Dunkelheit im Laufe von 30 Minuten bis zu 12 Stunden. Je verdünnter die Goldlösung ist und je zahlreicher und grösser die Schnitte sind, um so länger dauert es. In der Goldlösung werden die Schnitte in wenigen Minuten grauviolett, dann schwarzviolett und schliesslich schwarz und undurchsichtig. In jeder dieser Phasen kann man die Schnitte herausnehmen und aufheben. Doch finden sich leicht unregelmässige Niederschläge. Verf. zieht es daher vor, im Gold zu überfärbeu (Einwirkung von einer bis 12 Stunden) und dann die Schnitte zur Diftereuzirung mit LuGOL'scher Lösung zu be- handeln. 6) In der LuGOL'schen oder GRAii'schen Lösung bleiben XIX, 2. Referate. 189 die Schnitte 5 Minuten bis eine Stunde , je nach der Dicke und je nach der Menge des Metalhiiedersclilages , so hinge bis die graue Substanz eben anfängt durchscheinend zu werden (gewöhnlich nicht länger als 15 Minuten). Waren die Schnitte sehr fein, so verdünnt man die LuGOL'sche Flüssigkeit besser mit der halben Menge von Wasser. 7) Jetzt kommen die Schnitte in ein Lösungsmittel für Jodgold, z. B. in eine 20procentige Lösung von unterschwefligsaurem Natrium. 8) Schliesslich gründliches Auswaschen in Wasser, Alkohol, Lack. Die Achsencylinder sollen jetzt dunkelviolett bis schwarz auf hellem Grunde erscheinen, die Markscheide hellrosa, die Nervenzellen hellviolett, die chromatische Körnung ungefärbt. Die Kerne sowohl der Nerven- wie der Gliazellen hellblau mit deutlichem Netz. Ist die Färbung gut gelungen, so ist sie so vollständig wie bei einem WEiGERT'schen Präparat. An den Stellen der RANViER'schen Ein- schnürungen wird die Färbung des Achsencylinders heller , ver- schwindet aber niemals. Es färben sich nur die markhaltigen Fasern wie bei allen Achseucylinderfärbungen mit Ausnahme der GoLGi'schen. — Verwendet man zur Einbettung der Stücke Celloidin, so erhält man sehr viel bessere Schnitte. Da der Alkohol aber das Pyrogallol auszieht, so muss man in diesem Falle, wie folgt, verfahren: 1) Die Schnitte kommen wieder in Wasser, das 2- bis omal gewechselt wird, um den Alkohol zu entfernen. 2) Sie kommen für eine bis 2 Stun- den in eine wässerige Sprocentige Lösung von Pyrogallol. 3) Sie werden 3- bis 4mal in destillirtem Wasser ausgewaschen, um den Ueberschuss der Säure zu entfernen. Dann folgt die Behand- lung mit Alkali, Goldchlorid etc. wie bei den nicht eingebetteten. Die Färbung ist hier insofern anders , als die Achsencylinder sich heller färben, das Myelin ungefärbt bleibt und die Zellen schwarz- violett werden, so dass ihre Fortsätze gut zu erkennen sind. Das Goldbad muss bei den Celloidinschnitten übrigens immer länger einwirken (2 bis 12 Stunden), und ferner muss stets die Lugol- sche Flüssigkeit zur Diflferenzlrung verwendet werden. — B. Tan- nin und Goldchlorid. Die Methode entspricht in Wirkung und Ausführung vollständig der vorigen, der Goldniederschlag ist weniger fein. Gehärtet wird in einer Mischung von Tannin 5, Wasser 70, Formol 30, wenigstens 4 Tage im Ofen (37^) oder 8 bis 10 Tage bei Zimmertemperatur. Die Schnittconsistenz ist ausgezeichnet. LuGOL'sche, Flüssigkeit muss angewendet werden. — C. Tannin oder Gallussäure und Silbernitrat. Die in der eben angegebenen Härtungstlüssigkeit mit Tannin oder in 190 Referate. XIX, 2. Wasser. 100, Formol 30, Gallussäure bis zur Sättigung, gehärteten Stücke können auch mit Silbernitrat behandelt werden. Methode : 1) Die Schnitte kommen zunächst in ganz verdünnten Alkohol (agua alcoholizada), werden dann wenigstens eine Stunde lang (länger scha- det nichts) der Einwirkung einer 2procentigen Tauninlösung oder einer gesättigten Lösung von Gallussäure unterworfen , welche mit einigen Tropfen Essigsäure versetzt sein müssen. Celloidinschnitte kommen wie bei A noch in ein Bad von Tannin oder Gallussäure. 2) Rasches Auswaschen der Schnitte in 2- bis 3mal gewechseltem Wasser. 3) Einlegen in eine einprocentige Silbernitratlösung mit Zusatz von einigen Tropfen Ammoniak für 5 bis 30 Minuten ; un- durchsichtige Schwarzfärbung. 4) Nach leichtem Abwaschen kommen die Schnitte in einen Abschwächer, z. B. in eine dreiprocentige Lö- sung von Ammoniumpersulfat, das jetzt viel in der Photographie ge- braucht wird. Nach 5 Minuten fängt der Silberniederschlag an sich aufzuhellen, und nach einer halben Stunde oder weniger sind die Schnitte im allgemeinen hellbraun. Dann Herausnehmen und Ab- waschen in einer Lösung von Natriumsulfit, um die Einwirkung des Abschwächers aufzuheben. Als Abschwächer kann man auch mit gutem Erfolge benutzen das Kaliumeisencyanür mit nachfolgendem Abwaschen in unterschwefligsaurem Natrium (wird noch bei einer späteren Methode besprochen werden). 5) Auswaschen in reichlichem Wasser. 6) Uebertragen in ganz verdünnten Alkohol. 7) Alkohol, Nelkenöl oder Origanumöl, Balsam oderDammarlack. Hellgelber Unter- grund mit braunschwarzen Achsencylindern nach Tannin oder mit grau- schwarzen nach Gallussäure. Man kann übrigens die Tanninschnitte auch zum Schlüsse mit Gallussäure behandeln , was mitunter noch bessere liilder ergiebt. — D. Hydrochinon und Sil b er nitr at. Diese Methode ergiebt nach Verf. ähnliche Bilder wie die GoLGi'sche für die Zellen, ihre Ausläufer etc. und kann daher als Controlmethode für jene gebraucht werden. Wegen der genaueren Ausführung ver- weise ich auf das Original. — E. Hydrochinon und alkali- sches Silbernitrat. Die reducirenden Mittel, wie das Hydro- chinon, wirken auf die Silbersalze, falls diese alkalisch sind, auch ohne Licht ein. Darauf beruht die folgende hier angegebene Methode, welche die Achsencylinder sehr deutlich schwarzbraun hervortreten lässt, während die Markscheiden und die Zellen hell bleiben. 1) Frost- schnitte oder solche nach oberflächlicher Einbettung in Paraffin kom- men in destillirtes Wasser. Während des Schneidens kann das Messer mit Alkohol befeuchtet, und ebenso können die Stücke vor dem XIX, 2. Referate. 191 Paraffineinschluss leicht entwässert werden, um den Einschluss zu erleichtern. 2) Nach 2- bis .Smaligem Abwaschen in destillirtem Wasser kommen die Schnitte für 2 Minuten oder mehr in eine ,5pro- centige Essigsäure (wichtig!). 3) Einmaliges Abwasclien in destillir- tem Wasser. 4) Die Schnitte verbleiben von 10 Minuten bis zu mehreren Stunden in der folgenden Silberlösung (längere Zeit schadet nichts): Silbernitrat 0*5 g, destillirtes Wasser 100 cc, Ammoniak einige Tropfen. Die Menge des Alkalis kann ohne Schaden in ziem- lich weiten Grenzen schwanken. Verf. benutzt gewöhnlich eine Lösung, welche nur soviel Ammoniak enthält, um den bei der Mischung beider Flüssigkeiten entstehenden Niederschlag zu lösen. 5) Die Schnitte kommen je nach ihrer Dicke auf eine halbe bis 4 oder 5 Minuten in eine O'öprocentige Lösung von Kaliuraeisencyanür. Sind die Schnitte aussergewöhnlich dick , oder dauert die Entfärbung sehr lange, so setzt man der Flüssigkeit noch einige Tropfen Natron- oder Kalilauge oder Ammoniak zu. Die Schnitte sollen sich hierin nicht vollständig aufhellen, sondern nur in der grauen Substanz eine hell- braune Färbung bekommen, zu hell dürfen sie nicht werden. Weniger gut ist eine Sprocentige Lösung von Ammoniumpersulfat. 6) Ein- wirkung einer löprocentigen Lösung von unterschwef ligsaurem Na- trium während einiger Minuten. Zeigen die Schnitte hierin nicht einen gelben oder hellbraunen Ton in der grauen Substanz, so werden 5 und 6 wiederholt, Ist die Färbung dagegen zu schwach, so kann mau sie mit den in der Photographie gebräuchlichen Mitteln ver- stärken (Sublimat und Ammoniak , Kupferbromat und Hydrochinon, Quecksilberjodat und Natriumsulfit etc.) oder auch durch die An- wendung des Goldchlorids. 7) Abwaschen in viel Wasser. 8) Ver- dünnter Alkohol (agua alcoholizada), starker Alkohol, Nelkenöl, Xylol- Dammar. Sind die Schnitte , was bei Gross- und Kleinhirn öfter vorkommt, in der grauen Substanz während des Bades in der Kalium- eisencyanürlösung hellgrau , so muss man ihre Imprägnation ver- stärken, bevor man sie in diese Lösung bringt; man nimmt die Schnitte aus der Silberlösung und bringt sie ohne abzuwaschen in die Härtungsflüssigkeit (Formol-Hydrochinon) oder noch besser in den in der Photographie gebräuchlichen Entwickler von Hydrochinon mit Alkali. In wenigen Secunden werden die Schnitte ganz schwarz, und nach einigen Minuten und einem leichten Abwaschen in Essigsäure- wasser (agua acetica) kommen sie wieder in das alkalische Silber- nitrat, in dem sie 5 bis 15 Minuten verbleiben. Wenn uöthig kann man dies auch 2- bis 3mal wiederholen bis die Schnitte absolut un- 192 Referate. XIX, 2. durchsichtig siucl. Hierauf folgt dann 5 und 6. Mit Celloidinein- bettung geht diese Methode noch nicht. Sie soll etwa dieselben Dienste leisten können wie die WEiGERx'sche und vielleicht auch für Degenerationen von Werth sein. Mitunter färben sich auch die Markscheide und die LANTERMANN'seheu Einkerbungen , namentlich wenn nach einer sehr starken Imprägnation die Abschwächer (Ammo- niumpersulfat und LuGOL'sche Lösung) unvollkommen wirken. Bei dieser Methode kann man auch die Zellen noch nach Nissl färben. III. Fettfärbung der Stücke des Nervensystems. Die MARCHi'sche Färbung hat die Nachtheile , dass sie ziemlich viel Zeit in Anspruch nimmt und nicht immer scharf genug die Marksubstanz von dem freien Fett unterscheiden lässt. Als guter Ersatz wird die folgende Methode empfohlen. Man härtet 4 bis 6 Tage in der folgenden Mischung: Kaliumbichromat, Sprocentige wässerige Lösung . . 20 cc Osmiumsäure, einprocentige Lösung 5 „ Eisenperchlorür, concentrirte Lösung .... 1 — 3 „ Die Stücke werden so hart, dass sie nach 5 Tagen ohne Celloidin- einbettung geschnitten werden können. Es genügt, sie durch ober- flächliches Eingiesseu auf einem Paraftinblock zu fixiren. Das Messer wird mit verdünntem Alkohol (agua alcoholizada) befeuchtet. Die Schnitte, welche dank der Durchsichtigkeit ihres Grundes ziemlich dick sein können, werden in Wasser abgewaschen, entwässert und in Dammar aufgehoben. Markhaltige Fasern gelb , wenige dunkel- grau. Im Rückenmark speciell sind viele schwarze Fasern. Das Fett ist völlig schwarz. — Diese Methode hat den Nachtheil, dass in Folge der grossen Härte und Brüchigkeit eine Celloidineinbettung nicht möglich ist ; man kann sich statt ihrer auch der folgenden be- dienen, welche die Präparate nicht so hart macht. Kaliurabichromat, Sprocentige wässerige Lösung . . 20 cc Osmiumsäure, einprocentige wässerige Lösung . . 5 „ Kaliumeisencyanür, Sprocentige Lösung .... 5 „ Man kann in Alkohol nachhärten und in Celloidin einbetten. Das Fett erscheint schwarz auf einem durchsichtigen, röthlichgelben Unter- grunde. Man sieht in den Capillargefässen des Gehirns erwachsener und junger Säuger eine grosse Anzahl von perivasculäreu Zellen mit Fetttröpfchen, welche schon von Obersteiner erwähnt sind. Schiefferdecker {Bonn). XIX, 2. Referate. X93 Regaiid , C, Un procede pour empecher le decoUement des coupes a la paraffine destinees ä etre colorees sur lame (Bibliogr. Anat. t. IX, fasc. 2, 1901, p. 51—56). Das von dem Verf. angewendete Verfaliren besteht im wesent- lichen darin, die Oberfläche der in beliebiger Weise aufgeklebten und dann von dem Paraffin befreiten Schnitte mit einem äusserst dünnen Collodiumhäutchen zu überziehen , das mau nicht trocknen lässt. Das Verfahren ist das folgende : 1) Das Aufkleben der Schnitte kann nach irgend einer Methode geschehen , die die Aus- breitung der Schnitte auf warmem Wasser erlaubt. Verf. bedient sich gewöhnlich der Vorschrift von Gulland mit reinem Wasser (für Objecte, welche in einem Sublimatgemisch oder in einer Pikrin- säure oder Pormol enthaltenden Mischung fixirt sind) oder der von Reinke als „japanisch" bezeichneten Methode (für Objecte, welche in Chrom- oder Osmiumgemischen fixirt sind). 2) Die an freier Luft oder im Ofen bei 35^ getrockneten Schnitte werden durch Xylol vom Paraffin befreit. Man verwendet hierzu vortheilhaft Gläser mit Xylol, in welche die Präparate ganz eingetaucht werden, am besten zwei solche Xylolgläser nach einander. 3) Sodann kommen die Prä- parate nach einander in zwei Gläser mit 95procentigem oder absolutem Alkohol. Bis hierher pflegen sich bekanntlich die Schnitte nur dann abzulösen, wenn man die Objectträger hin- und herbewegt oder wenn sie dick und gefaltet sind. Das Erstere ist überflüssig. Die Ab- lösung beginnt erst, wenn man die Präparate aus dem starken Alkohol in schwächere Alkohole oder in Wasser bringt. 4) Aus dem 95pro- centigen oder absoluten Alkohol überträgt man die Präparate in ein fünftes Glas, welches die folgende Collodiumlösung enthält: Collodium, officinelles (nicht ricinatum) ... 20 A^'oU. Aether 40 „ Alkohol, absolut 40 „ Eine Lösung von Collodium nur in absolutem Alkohol anzuwenden ist nicht vortheilhaft, ebenso wenig eine noch stärker verdünnte. Man kann dieselbe Collodiumlösung lange Zeit benutzen, falls sie immer wieder in einem gut geschlossenen Gefässe aufbewahrt wird. Die Präparate verbleiben in der Collodiumlösung von einer halben bis zu 2 Minuten, dann lässt man sie gut abtropfen (sie dürfen aber nicht trocken werden) und überträgt sie in ein sechstes Gefäss, das Alkohol von 70 oder 80 Procent enthält. Die CoUodiumschicht, Zeitsohr. f. wiss. Mikroskopie. XIX, 2. 13 j^94 Referate, XIX, 2. welche den Objectträger überzieht, wird sofort als ein zusammen- hängendes , sehr zartes , vollkommen durchsichtiges , an dem Glase haftendes Häutchen niedergeschlagen, das die Schnitte schützt. 5) Jetzt kommen die Präparate direct oder nach 60proceutigem Alkohol in Wasser und können darauf allen für die Färbung etc. nöthigen Manipulationen unterworfen werden, ohne dass die Schnitte sich ablösen. Zum Schlüsse kann man dann mittels absoluten Alko- hols und bestimmter Oele das CoUodiumhäutchen auflösen. Verf. weiss nicht, ob das CoUodiumhäutchen sich auch in stark alkalischen Lösungen nicht ablösen würde, jedenfalls widersteht es einem mehr- tägigen Aufenthalt in Anilin - Safranin (nach Zwaardemaker). — Er geht zum Schluss noch auf die verschiedenen, bisher angegebenen Verfahren mit Collodium ein. ScJiiefferdecker {Bonn). Unna, P. G., Ueber spontanen und künstlichen Trans- port von Zellsubstanzen und über Kochsalz als mikrochemisches Reagens (Monatsh. f. prakt. Dermatol. Bd. XXXIII, 1901, p. 342—352). Verf. unterscheidet bekanntlich zwei verschiedene Bestandtheile des Protoplasma , das wabig (schaumig) gebaute Spougioplasma und das amorph-körnige Granoplasma. Bei Hautkrankheiten und nament- lich bei Granulomen beobachtet man nun häufig einen Protoplasma- transport von den Bindegewebs- und Epithelzellen in die Lymphwege und Blutgefässe. Dieser Transport bezieht sich fast allein auf das Granoplasma. Verf. fand bei Versuchen, dass Neutralsalze und in besonders hohem Grade Kochsalz eine derartige Auflösung des Proto- plasmas herbeiführen, so dass die bekannte Zellstructur völlig verwischt wird. Das Granoplasma leistet dem Einfluss des Kochsalzes viel weniger Widerstand als das Spougioplasma, so dass zunächst in ge- wissem Grade eine Isolirung des Spongioplasmas erfolgt. Die von dem Verf. gebrauchten Salze (Kochsalz, Magnesiumsulfat, Ammonium- sulfat , Natriumsulfat) wirkten alle etwas verschieden auf die Be- standtheile des Protoplasmas und der Kerne ein, man kann also die Durchströmung der Gewebestücke mittels eiweisslösender Medien vor der Härtung zu der histologischen Analyse des Protoplasmas be- nutzen. Verf. bespricht hier nur die mit Kochsalzdurchströmung erhaltenen Präparate. Zuerst legte er die etwa erbsengrossen Stücke frisch in eine mehr oder weniger concentrirte Kochsalzlösung, spülte nach 24 Stunden (Zimmertemperatur oder Brütschrank) oberflächlich in Wasser ab, härtete in absolutem Alkohol, schnitt nach Celloidin- XIX, 2. Referate. ^^95 cinbettung und färbte mit der Methylenblau- GlycerinätLer-Methode. Später machte er von der Erfahrung A. Schmitt's Gebrauch, dass die in Kochsalz löslichen Bestandtheile des Protoplasmas diesem auch noch nach der Behandlung- mit Alkohol und Aether entzogen werden können. Die Extraction des Granoplasmas an Schnitten solcher Haut- stücke, die in Alkohol gehärtet und in Celloidin eingebettet gewesen waren, ging mit derselben Leichtigkeit vor sich wie an frischer Haut. Vermöge der leichteren und vollständigeren Durchspülung der feinen Schnitte ist die Extraction derselben früher beendet und gründlicher. Man kann dieselbe in Reagensgläschen vornehmen , indem man die Schnitte in der concentrirten Kochsalzlösung über Nacht im Brütofen stehen lässt; noch besser ist die ÜNNA'sche Trichtermethode. In dem Stiel eines gewöhnlichen Glastrichters befindet sich unten ein kleiner Wattebausch, der so dicht gestopft wird, dass eingegossenes Wasser sehr langsam hindurchtropft. Darauf kommen, in Wasser suspendirt, die Schnitte (5 bis 10) und in den obersten Theil des Trichterstiels wird wieder ein Wattebausch lose eingeführt, der dazu dient, die Durchspülungsflüssigkeit zu filtriren. Die letztere , hier concentrirte Kochsalzlösung, präparirt man iu einem Fläschchen, welches in seinem Halse den Trichter aufnimmt, und aus dem man den Trichter alle Paar Stunden wieder nachfüllt, wenn er leer gelaufen ist. Es kommt nie zu einer Eintrocknung der Schnitte , auch wenn der Trichter längere Zeit leer ist und im Brutofen steht, da zwischen den beiden Wattebäuschen stets eine kleine Wassersäule verbleibt, die die Schnitte enthält. Die Trichtermethode hat den grossen Vortheil , dass die Flüssigkeit stets in Bewegung ist und die Schnitte dauernd rein und der Besichtigung zugänglich bleiben , so lange mau die Extraction auch vor sich gehen lässt. Von Zeit zu Zeit nimmt man nach Ent- leerung des Trichters und unter Lüftung des oberen Wattebäusch- chens einen Schnitt zur Untersuchung, Färbung etc. heraus. Man kann aber auch die Färbung im Trichter selbst vornehmen, indem man denselben zunächst zur Verdrängung des Salzwassers mit destil- lirtem Wasser füllt und sodann bei der Nachfüllung ein Paar Tropfen der Färbetlüssigkeit dem Trichterwasser zusetzt. Man erhält so langsam (z. B. über Nacht) eine vorzügliche Minimalfärbung. Verf. beschreibt dann die Wirkung der Extraction an einem Schnitt aus dem Anfangsstadium (nach Behandlung der frischen Stücke mit 10- procentiger Kochsalzlösung 12 Stunden lang in der Kälte) und aus dem Endstadium (4tägige oder noch längere Behandlung mit Koch- salzlösung im Brütofen. Er bemerkt dazu, dass durch einprocen- 13* •[96 Referate. XIX, 2. tige Kochsalzlösung das Granoplasma rascher, die Mastzelleiikörnung viel langsamer ausgewaschen wird). Die Mastzellenkörnung wird stark angegriffen ; bei Behandlung des mit polychromer Methyleu- blaulösung gefärbten Alkohol-Celloidinschnitte mit lOprocentiger Koch- salzlösung fängt die rothgefärbte Mastzellenkörnung schon nach 10 Minuten an zu verschwinden und macht einer diffusen Imbibition der Zelle um den Kern mit der sich roth färbenden Substanz Platz. Diese ist noch blass sichtbar, wenn die Schnitte 3 Stunden in der Kochsalzlösung verbleiben, wobei alle Mastzellenkörner verschwunden sind. Nach 12stündiger Behandlung mit Kochsalzl()Sung ist keine Spur von Körnern und diffus gelöster Masse mehr vorhanden. Magne- siumsulfatl(»sung (lOprocentig) löst die Mastzellenkörnung auch auf, aber in viel schwächerem Grade, Ammoniumsulfat (lOprocentig) nur in sehr geringem Maasse. — Man muss die Veränderungen der Ge- webe bei der Kochsalzbehandlung so auffassen , dass durch diese letztere gerade diejenigen Zellsubstanzen entfernt werden , welche aus der polychromen Methylenblaulösung das Blau (und Roth) an sich ziehen , während andere Zellsubstanzen , die eine Vorliebe für das Violett besitzen, nicht von Kochsalz aufgelöst werden. Die Koch- salzmethode ist also eine gewebsanaly tische Methode , welche sich an Sicherheit und Werth mit der KüHXE'schen Verdauuugsmethode messen kann und diese an Einfachheit noch übertrifft. Nach Verf. ist es wahrscheinlich , dass die durch das Kochsalz extrahirten Substanzen der Hauptsache nach als Paranukleoproteide aufzufassen sind. Schiefferdecker [Bonn). Boveri, Th., Zellstudien 4. üeber die Natur der Cen- trosomen (Jenaische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XXXV, 1901, p. 1—220 m. 3 Figg. u. 8 Tfln.). Das zur Untersuchung der Centrosomen bei der Furchung der Eier von Echinus microtuberculatus benutzte Material wurde aus- schliesslich mit Pikrinessigsäure fixirt, da keine andere Fixirungs- flüssigkeit bessere Resultate giebt. Die Einwirkunsgdauer betrug 8 Tage. Die unmittelbar folgende Alkoholbehandlung wurde derart vorgenommen, dass zuerst successive kleine Mengen von öOprocentigem Alkohol zugesetzt wurden, dann ebenso allmälilich TOprocentiger etc. Diese vorsichtige Behandlung wurde angewandt, weil andere Schnitt- serien zeigten, dass auf gewissen Stadien sehr häufig durch Schrumpfung und Zerreissung feine Structureu gänzlich vernichtet werden. Trotz der allem Anschein nach guten Conservirung der Präparate besteht XIX, 2. Referate. 197 aber doch eine gewisse Variabilität der Bilder, besonders in den feinsten Structuren, wodurch man gewarnt wird, „alles was an den einzelnen Präparaten zu sehen ist, als dem lebenden Zustand vijllig ent- sprechend zu betrachten". Als praktisch wichtig hebt Verf. noch hervor, die Erscheinung dass sich anscheinend ganz gleich conservirte Serien von Echinus-Eiern der Eisenhämatoxylin-P^ärbung gegenüber ganz ver- schieden verhalten können: in dem einen Falle lassen sich die Cen- trosomen sehr deutlich darstellen, wogegen ein Nachweis der Cen- triolen nicht gelingt, im anderen Falle bringt die Eisenhämatoxyliu- Methode auf den meisten Stadien nur diese Körner als schwarze Pünktchen zu deutlicher Anschauung. Für Ascaris-Eier bewährte sich als Fixirungsmittel eine Mischung von 100 Th. 70procentigem Alkohol und 5 Th. Eisessig. Von weitgehendem Interesse ist die vom Verf. seiner Arbeit vorausgeschickte Kritik der Eisenhämatoxylin-Färbung. „Der Reiz und grosse Werth derselben liegt darin, dass man mit ihrer Hilfe im Stande ist, gewisse Elemente des mikroskopischen Bildes, die auf andere Weise nur wenig oder bei besonderer Kleinheit gar nicht mehr unterscheidbar sind, in tiefer Schwarzfärbung aus einer fast farblosen Umgebung mit einer nicht zu überbietenden Schärfe hervor- treten zu lassen." Hiermit sind Nachtheile verknüpft, einmal, „dass alle in den schwarzgefärbten Theilen vielleicht noch vorhandenen Structuren verschwinden müssen, zweitens aber, dass alle nicht oder auch vermittels einer Vor- oder Nachtinction anders gefärbten Struc- turen der Umgebung um so weniger gut hervortreten". Von grösserer Wichtigkeit als die genannten Erscheinungen ist eine andere, näm- lich die, dass „ein Eisenhämatoxylin-Bild mit schärfstem Gegensatz gefärbter und ungefärbter Stellen dadurch bedingt sein kann, dass au einer Stelle ein rein mechanisches Hinderniss die Entfärbung, die an anderen chemisch und structurell ganz gleichwerthigen Stelleu sich ohne Schwierigkeit vollzieht, verhindert". So können auch im Innern von Zellen und Geweben Trugbilder entstehen. Mit der dar- gelegten Eigenschaft der Eisenhämatoxyiiu-Methode hängt noch eine weitere ebenfalls besonders wichtige Erscheinung eng zusammen, nämlich die der concentrischen Entfärbung. Verfolgt man die Ent- färbung eines Schnittes unter dem Mikroskop, so kann man zuweilen wahrnehmen, dass sich die oberflächlichen Schichten etwas rascher entfärben als tiefere. Viel ausgeprägter aber zeigt sich die in Rede stehende Erscheinung im Kleinen an gewissen Zellbestandtheilen, vor allem an den Ceutrosomen, weiter aber auch an anderen Theilen der 198 Referate. XIX, 2. Zelle. Verf. möclite diese Tliatsache so erklären, „dass die Eiseii- lösuug' nur sehr langsam im Innern der genannten Zellbestandtheile vor- dringen kann nnd so zuerst den peripheren Schichten die Farbe entzieht, erst allmählich den tieferen". Wichtig ist dann die weitere Thatsache, dass aber die concentrische Entfärbung nicht immer und überall eintritt, sondern dass auch eine diffuse vorkommt, wobei das schwarze Bereich, ohne sich zu verkleinern, allmählich blasser wird. Zuweilen machen sich aber auch noch andere Eigenthümlichkeiten geltend. Die Eisenhäraatoxylin-Färbung zeigt sich also ausserordent- lich variabel und liefert unter Umständen Kunstproducte. Auch die wohl allgemein herrschende Meinung, dass stark entfärbte Prä- parate die zuverlässigsten seien, ist nicht in allen Fällen richtig. Es ist durchaus unzulässig bis zu einem gewissen Grade zu extrahiren, um das so gewonnene Bild ohne weiteres als dem wirklichen Ver- halten entsprechend, anzusehen. „Es ist für jedes neu zu studirende Object, abgesehen von der Coutrole durch andere Methoden, uner- lässlich, durch Entfärbung in Etappen die Wirkungsweise des Ver- fahrens zu erproben." Weiter ist schliesslich noch zu berücksichtigen, dass die Eisenhämatoxylin-Methode auch die Producte pathologischer Veränderungen der Zelle oder die bei der Fixirung auftretenden Ausfällungen unter Umständen in gleicher Schärfe und Klarheit tingirt wie die normalen Zellstructuren. K. ScJioebel (Neapel). Unna, P. G., Glastinte aus Gelanth (Monatsh. f. prakt. Dermatol. Bd. XXXII, 1901, p. 343 f.). Verf. braucht die Glastinte nur, um eine vorläufige Signirung von Präparatenserien auszuführen und ersetzt später die vorläufigen Signaturen an den Präparaten durch Etiquetten. Daher passte es ihm gut, dass die Schrift der Gelanth -Tinte, die in einer bis 2 Mi- nuten vollkommen trocken ist, durch festes Abwischen mit einem trocknen oder feuchten Tuch sich entfernen lässt, während ein leichtes Ueberwischen die Schrift nicht angreift. Die Gelanth -Tinte fliesst leicht aus der Feder, ihre Formel ist: Zinkoxyd 7"5 Gelanth 75 Wasser, destillirt 15-0 Die Bestandtheile werden gemischt. Die Tinte ist in der Schwaan- apotheke in Hamburg in kleinen 30 g enthaltenden Fläschchen vor- räthig. Schiefferdecker {Bonn). XIX, 2. Referate. 199 2. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A. Niedere Thlere. Gienisa, 0., Färbemethoden für Malariaparasiten (Ceii- tralbl. f. Bacteriol. Abth. I, Orig. Bd. XXXII, 1902, No. 4, p. 307). Vou den Zersetziingsproducten des Methyleublans verhält sich Methylenviolett indifferent für die Färbung, dagegen liefert Methylen- azur in Verbindung mit Eosin ausgesprochene RoMANOwsia-Färbung, wobei man bei geringem Ueberschuss von Methylenazur die Farb- flotte öfters benutzen kann und nur solche Niederschläge erhält, die leicht mit Wasser zu entfernen sind. Herstellung reinen Me- thylenblau-freien Azurs aus mit Methylenblau verunreinigtem wie folgt: Aufnehmen des Farbstoffs in Wasser; Ausfällen der Base durch verdünnte Natronlauge ; Ausschütteln mit Aether ; diesen im Scheidetrichter abtrennen; Zusatz von Salzsäurealkohol im Ueber- schuss; abdunsten lassen; das Azurchlorhydrat in Wasser aufnehmen; durch Aussalzen abfiltriren und Nachwaschen mit gesättigter Kocli- salzlösung; von der überschüssigen Salzsäure befreien; trocknen; in absoluten Alkohol aufnehmen, aus diesem mehrmals umkrystalli- siren; Trocknen über Schwefelsäure. Bei Verwendung von reinem Methylenazur mit Methylenblau zu gleichen Theilen erhält man einen schöneren Blauton als mit Azur allein. Grösserer Ueberschuss von Methylenblenblau stört aber den Eintritt der Chromatinfärbung, ebenso Zusatz von Violett, das auch reichliche, schwer auszuwaschende Niederschläge macht. Nach Angaben von Verf. durch Dr. GRtJBLER u. Hollborn (Leipzig, Bayerische Strasse 63) hergestelltes reines Azurchlorhydrat ist als Azur I um 5 M. pro Gramm erhältlich. Mit Methylenblau Höchst ää als Azur 11 zur Blutfärbung kostet das Gramm 2*50 M. Man benutzt für die Färbung O'Spromillige wässerige Lösung (gleichfalls bei Grübler vorräthig), von der ein cc auf 10 cc einer 0"05promilligen wässerigen Eosinlösuug (Eosin Höchst extra) kommt. Färbung der alkoholgehärteten Präparate, Schichtseite nach unten in dieser Farblösung 15 bis 20 Minuten; Wasserspülung, Trocknung an der Luft (Temperaturen über 90*^ zerstören die ■200 Referate. XIX, 2. Chromatinfärbung) und Untersuchung in säurefreiem Balsam oder in Wasser. Das REUTER'sche A- Methylenblau ist nach Giemsa kein einheitlicher Körper , sondern enthält auch Methylviolett. Die von Reuter empfohlene Lösung seines Farbstoflfs in Methylalkohol ist wegen bald eintretender Zersetzung zu verwerfen. Mit Michaelis ist Verf. der Ansicht, dass der Methylenazur die specifische Chromatin- färbuug bedingt, die allerdings durch Eosin verstärkt wird. Das wirksame Princip des Eosins Tetrabromfluorescein (Fluorescein- Resorciuphthalein) ist dabei das Resorcin, an dessen Stelle auch die beiden anderen Dioxybenzole (Brenzkatechin , Hydrochinon) treten Friedherger {Königsberg). Börner, C, Untersuchungen über H ä m o s p o r i d i e n. 1 . Ein Beitrag zur Kenntniss des Genus Haemogre- garina Danilewsky (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXIX, 1901, p. 398—416 m. 1 Ttl.). Die Untersuchungen wurden vorzugsweise an tixirten und ge- färbten Präparaten vorgenommen. Bei der Herstellung von Deckglas- Trockenpräparaten zeigte es sich, dass zwischen Präparaten, die mit Osmiumsäuredämpfen vor dem Trocknen behandelt wurden und ein- fachen Trockenpräparaten kein Unterschied besteht, Verf. konnte zum wenigsten keinen wahrnehmen. Nach dem Trocknen an der Luft wurden die Präparate eine halbe bis eine Stunde mit absolutem Alkohol behandelt. Dass der Alkohol die Fixirung besorgt, glaubt Verf. „u. A. daraus schliesseu zu dürfen , dass an Präparaten , die nicht gehärtet [Verf. meint hiermit die Alkoholbehandlung; Ref.] waren, jene Kernstructuren nicht zu beobachten waren". Nach der Alkohol- behandlung folgte Trocknen und dann Färben. Neben Eisenhämat- oxylin (Heidenhain) und Ilämatoxylin (Delafield) wurde vor allem die RoMANOwsKi'sche Farbflüssigkeit, die die besten Resultate ergab, benutzt. Es wurden gemischt lö-^/g Th. Eosin in O'lprocentiger wässeriger Lösung und 4^« Th. Methylenblau in einprocentiger wäs- seriger Lösung. Nach einer halben bis einer Stunde oder auch nach noch längerer Einwirkungsdauer wird in destillirtem oder gewöhn- lichem mit einer Spur von Essigsäure versetztem Wasser leicht ge- waschen. Nach Trocknen an der Luft erfolgte Einschluss in Canada- E. Schoebel {Neapel). XIX, 2. Referate. 201 Metzner, R., ü n t e r s u c b u u g e n an M e g a s t o m a e n t e r i c u m G R A s s I aus dem K a u i n c h e n d a r m (Zeitsclir. f. wiss. Zool. Bd. LXX, 1901, p. 299—320 m. 1 Tfl.). Das freie Umherschwimmeu im Darm des interessirenden Flagel- laten ist nicht Regel, kommt aber vor. Abscbaben und Abspülen mit physiologischer Kochsalzlösung der festsitzenden Flagellaten hat grosse Nachtbeile : im ersteren Falle erhält man die Protozoen in einer Menge von Schleimbautzellen, Detritus, Schleim etc. eingebettet, so dass die Fixirung und Färbung nur selten gute Bilder liefert ; im zweiten ist selbst bei sparsamer Anwendung der Spülflüssigkeit die Verdünnung doch beträchtlich, und es kommen oft nur wenige Flagel- latenexemplare auf ein Präparat. Und schliesslich ist noch zu be- rücksichtigen, dass körperwarme 0*6- bis O'Sprocentige Kochsalzlösung durchaus nicht als ganz indifferente Flüssigkeit für diese Protozoen anzusehen ist ; arbeitet man nicht rasch, so sterben dieselben bald ab, und bei den rapiden postmortalen Veränderungen giebt die Fixirung solchen Materials natürlich unbefriedigende Bilder. Gelegent- lich fand nun Verf. bei einem Kaninchen, dessen Darm vom Pylorus ab auf 25 bis oO cm keinen Chymus, sondern nur einen ganz klaren, etwas von Galle gefärbten Darmsaft enthielt, in letzterem eine ungeheure Menge freischwimmender Mastigophoren. Das durch Verbluten getödtete Thier wurde annähernd auf Körperwärme er- halten, und es konnten nun beliebig viele Deckglaspräparate vom frischesten Material hergestellt werden. Dies geschah in der Weise, dass immer ein Tropfen des Darmsaftes durch Hin- und Herneigen des Deckglases ausgebreitet wurde, was auf der nicht vollkommen trocknen Fläche (Anhauchen oder Abreiben mit einem feinen Leinen- tuche, in das eine Spur Glycerin eingerieben ist) sehr leicht von statten geht. Nach Prüfung unter dem Mikroskop auf den Gehalt an Flagel- laten, wurden die Deckgläschen mit der Tropfenseite auf die Fixirungs- flüssigkeit gebracht. Die Fixation geschah in einer Kochsalz-Osmium- mischung, die man in folgender Weise bereitet: Eine l"5procentige Kochsalzlösung wird mit Osmiumsäure gesättigt (es lösen sich unge- fähr b'b Theile in 100 Tb.). Von dieser Lösung werden 7 Voll, mit 1 Vol. concentrirter Lösung von doppeltchromsaurem Kali gemischt. Kurz vor dem Gebrauch werden zu 12 cc der Mischung 2 bis 4 oder auch 8 bis 12 Tropfen rauchende Salpetersäure hinzugefügt. Einige Uhrschälchen mit dieser Mischung (No. 1) werden bereit ge- halten, desgleichen einige mit der gleichen Osmium-Kaliumbichromat- Lösung ohne Salpetersäurezusatz (No. 2) und mit Glasglocken über- 202 Referate. XIX, 2. deckt. In der Mischung No. 1 bleiben die Deckgläser 2 Minuten bei Zusatz von 2 bis 4 Tropfen Salpetersäure, 30 Secunden bei Zusatz von 8 und 20 Secunden bei 12 Tropfen. Hieraufkommen die Präpa- rate für 20 bis 30 Minuten in No. 2, dann in destillirtes Wasser, das öfters gewechselt wird und schliesslich in öOprocentigen und TOprocentigen Alkohol. In letzterem können sie einige Zeit auf- bewahrt oder gleich weiter bearbeitet werden. Zur Färbung hat sich am besten eine Lösung von Säurefuchsin in Anilinwasser mit folgender DitFerenzirung in Pikrinalkohol bewährt. Ein passendes Säurefuchsin, das einen schönen rothen, nicht bläulichen Farbton giebt, erhielt Verf. von Dahl u. Co., Chemische Fabrik, Barmen. Mit diesem Präparat erzielt man bei einer ^/^ bis ^/^ gesättigten Anilin- wasserfuchsinlösung recht gute Bilder. Die Färbung geschieht in folgender Weise : Das Deckglas aus TOprocentigem Alkohol wird mit 95procentigem und dann mit absolutem Alkohol abgespült und noch feucht mit der Schichtseite auf die im Uhrschälchen befindliche Farb- lösung gebracht; dann wird bis etwa 55 bis 60^ C. erwärmt und die Farblösung nur einige Minuten auf dieser Temperatur erhalten oder noch eine bis 3 Stunden in den auf etwa 40^ C. eingestellten Thermo- staten gebracht. Nach dem Erkalten hebt man das Deckglas ab und übergiesst mit prikrinsaurem Alkohol. Am besten hält man von diesem zwei Concentrationen vorräthig , die eine bestehend aus gesättigter Pikrinsäurelösung in absolutem Alkohol 1 Vol. -f~ 20procentigen Alkohol 4 Voll., die andere -j- weitere 3 Voll. 20procentigen Alkohols. Man lässt die stärkere Lösung etwa anderthalb bis 2 Minuten auf dem Deckglase, wiederholt dies mehrmals, spült mit absolutem Alkohol ab und coutrolirt in Xylol unter dem Mikroskop den Grad der Differen- zirung. Treten die Kerne noch nicht klar hervor, so spült man wieder mit Alkohol ab, und giebt von der schwächeren oder nach Bedarf auch von der stärkeren Pikrinalkohollösung darauf. Für die bessere Erkennung gewisser Details ist es sogar gut, die Diö'erenzirung so weit zu treiben, dass die Kerne blass, nur mit dunklerem rothen Contur und deutlichen Kernkörperchen am vorderen Ende erscheinen. Die Präparate können dann in Xylol-Damraar eingeschlossen werden, untersucht wurde mit Oelimmersionen bei weit offener Blende und bei künstlichem Lichte. Zur Beleuchtung diente ein Auerbrenner und eine mit dünner Chlorophyllösung (etwa 0*5 cc alkoholischen Chloro- phyllextractes auf 1500 cc destillirten Wassers) gefüllte Schusterkugel. Neben den Dauerpräparaten wurden auch frische Präparate im hängen- den Tropfen untersucht. Auch hier ist es gut, sich einen recht flachen XIX, 2. Referate. 203 Tropfen des Darmsaftes herzustellen, um die Untersuchung mit starken Immersionslinsen ausführen zu können. E. Schoebel [Necqjel). Maas, 0., Die K n o s p e n e n t w i c k 1 u n g der T e t h y a und ihr Vergleich mit der geschlechtlichen Fortpflan- zung der Schwämme (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXX, 1901, p. 263—288 m. 2 Tflu.). Dass über die Entwicklung zur Knospe aus dem mütterlichen Gewebe wenige und recht verschieden lautende Angaben vorliegen, über die Weiterentwicklung des Schwammes aus der Knospe aber so gut wie nichts bekannt ist, hat nach Ansicht des Verf. seinen Grund wohl darin, dass die Tethyen mit ihrer Massenausbildung von Nadeln für die Untersuchung an Schnitten sehr ungünstige Objecte sind, und dass auch das Material von späteren Stadien, als das der massiven Knospe schwer zu erhalten ist. Die Knospen lösen sich wohl ab , gelangen aber im Versuchsaquarium nicht zur Weiterent- wicklung, sondern liegen auf dem Boden umher, ohne sich festzusetzen und gehen allmählich ein. Vielfache Versuche zur Weiterzüchtung durch Unterlage von Steinen etc. blieben immer ohne Erfolg. Verf. hatte nun das Glück, auf der Unterseite von Felsblöcken geeignetes Material zu finden, so dass alle Stadien der histologischen Ausbildung wie der Kammerentwicklung bis zum funktionirenden Schwamm studirt werden konnten. — Die Fixirung geschah mit Pikrinessigsäure, ab- solutem Alkohol , Sublimatalkohol und Sublimatalkoholeisessig. Die Sublimatgemische erwiesen sich günstiger für die unter Umständen folgende Behandlung mit FluorwasserstoflTsäure zur Entkieselung. Es wurden auch Stücke, so gut es eben ging, mitsammt den Nadeln in Schnittserien zerlegt, was nach sorgfältiger Durchtränkung mit hartem Paraffin bei den jungen Scliwämmcheu immerhin noch mit einigem Erfolg möglich ist. Die Vorfärbung geschah meist im Stück mit verschiedenen Carmineu oder besser mit Hämatoxylin, die Nachfärbung der Schnitte bei Carmin mit Anilinblau oder Gentianaviolett , bei Hämatoxylin mit Congoroth. Letzter Farbstoff ist besonders vor- theilhaft zur Ditferenzirung der Zelleinschlüsse von den Kernen. Die verschiedenen Einlagerungen reagiren nach den verschiedenen Fixi- rungsflüssigkeiten und Farbstofi'en durchaus nicht in ganz gleicher Weise. Die schärfsten Bilder ergab eine noch nach der Doppel- färbung angewandte Pikrinsäurebehaudlung der Schnitte im vorletzten Xylolbad. E. Schoebel {Neapel). 204 Eeferate. XIX, 2. Wulfert, F., Die Embryonale ntwic kl iing von Gono- thyraea loveni (Zeitschr. f. wiss. Zool, Bd. LXXI, 1902, p. 296—327 m. 3 Tfln.). üntersiiclit wurden grösstentlieils Schnittserien von Thieren, die in Sublimat - Essigsäure (100 Tb. Sproceutiges Sublimat -Seewasser, 2 Tb. concentrirte Essigsäure) fixirt waren. Zur P'ärbung war P^hr- LiCH'sches Hämatoxylin combinirt mit Orange G (2procentige wässerige Lösung) verwendet worden. Zum Studium speciell der Centrosomen kam auch Material zur Verwendung, das mit schwacher Flemming- scher Lösung fixirt war, und dessen Schnitte mit Heidenhain's Eisen- hämatoxylinmetbode tiugirt waren. E. Schoebel (Neapel). Citron, E., Beiträge zur Kenntniss des feineren Baues von Syncoryne Sarsii (Arch. f. Naturgesch. Jahrg. LXVIII, Bd. I, 1902, p. 1—26 m. 2 Tfln.). Zur Fixirung wurden die ausgestreckten Thiere mit concentrirter Lösung von Sublimat in Seewasser übergössen. Gefärbt wurden die Stücke in verdünntem Alauucarmin und zuweilen die Schnitte mit Gentianaviolett. Zur Untersuchung der Ganglienzellen wurden die Thiere mit halbprocentiger Osmiumsäure Übergossen, dann in Wasser ausgewaschen, mit Holzessig behandelt und nach nochmaligem Aus- waschen in Glycerin eingeschlossen. E. Schoebel {Neapel). Morgenstern, P., Untersuchungen über die Entwicklung von Cordylophora lacustris Allman (Zeitschr. für wiss. ZooL Bd. LXX, 1901, p. 567—591 m. 2 Tfln.). Die Fixirung geschah in FLEMMiNG'scher Flüssigkeit, in Sublimat (5procentig) und in Sublimatessigsäure. Besonders letztere Lösung (5 Th. Sublimat, 2 Th. Essigsäure, 100 Th. Wasser) gab gute Re- sultate. Die FLEMMiNG'sche Lösung verursachte bei unreifen Eiern in fast allen Fällen eine Sclirumpfung des Keimbläschens. Wegen der Uudurchsichtigkeit der Eier konnten die meisten Entwicklungs- stadien nur auf Schnitten untersucht werden. Es erwies sich vortheil- haft, die ganzen Gonophoren zu schneiden, weil das Isoliren der Eier sich nicht ohne sehr grossen Materialverlust ausführen lässt. Die Schnitte wurden mit Ehrlich's Hämatoxylin combinirt mit Orange G gefärbt. E. Schoebel {Neapel). Pauly , R., Untersuchungen über den Bau und die Le- bensweise der Cordylophora lacustris All- XIX, 2. Referate. 205 MAN (Jenaische Zeitsehr. f. Naturw. Bd. XXXVI, 1901 —1902, p. 737—780 m. 4 Tfln.). Als Fixiriingsflüssigkeit diente neben Formol, FLEMMiNG'scber und HERMANN'scher Flüssigkeit vorwiegend eine concentrirte Lösung von Sublimat mit Zusatz von 2 Procent Eisessig. Das Osmiura- material wurde mit Safranin, das Sublimatmaterial in toto mit Alaun- carmin gefärbt. E. Schoebel (Neapel). Bonnevie , K., Ueber Chrom atindiminution bei Nema- toden (Jenaische Zeitsehr. f. Naturwiss. Bd. XXXVI, 1901 —1902, p. 275—288 m. 2 Tfln.). Untersucht wurden Ascaris lumbricoides , Strongylus paradoxus und Rhabdonema nigrovenosa. Nur die erste Art zeigte eine Dimi- nution des Chromatins. Die Untersuchung der Eier von Ascaris lumbricoides bietet insofern Schwierigkeit, als es schwer ist, gut conservirtes Material zu erhalten. Die Eischalen sind so widerstands- fähig, dass sich die befruchteten Eier in vielen Fixirungsflüssigkeiten normal weiter entwickeln. Nur in Alkohol-Essigsäure (70procentiger Alkohol 95 Th., Eisessig 5 Th.) waren die Eier stets nach 6 bis 8 Tagen abgetödtet. Um verschiedene Furchungsstadien zu erhalten, muss man die Eier verschieden lange — es empfiehlt sich 8 bis 20 Tage lang — züchten , ehe man sie in Alkohol-Eisessig bringt. Freilich hat man es auch mit dieser Methode nicht absolut in der Hand, das Absterben auf einem ganz bestimmten Furchungsstadium zu erreichen, und man ist eben genöthigt viel Material zu verarbeiten. Die Untersuchungen wurden hauptsächlich an ganzen Eiern vor- genommen, die in Boraxcarmin oder Delafield's Hämatoxylin gefärbt und in Nelkenöl aufgehellt waren. Um den stark färbbaren und deshalb bei der Beobachtung ganzer Eier sehr störenden äusseren Ueberzug der Schale zu beseitigen , wurden die Eier, bevor sie in Alkohol-Essigsäure kamen, einen Tag in warme Pepsinlösung gebracht. Der Ueberzug verschwindet hier vollständig, — Zur Controle wur- den auch Schnitte durch ganze Eiröliren hergestellt. Auch beim Schneiden bieten die Eischalen grossen Widerstand, und das Einbetten muss sehr langsam (2 bis 3 Wochen) vorgenommen werden. Zur Schnittfärbung wurde Heidenhain's Eisen-Hämatoxylin , Delafield's Hämatoxylin und Boraxcarmin benutzt. E. Schoebel {Neapel). Walleugren, H., Zur Kenntniss des peripheren Nerven- systems der Proboscis bei den Polychäten (Je- 206 Referate. XIX, 2. naische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XXXVI, 1901 — 1902, p. 165—180 ni. 2 Tfln.). Von einer O'lproceutigen Metliylenblaulösuug wurden etwa 5 cc subcutan iujicirt. Die nach 5 Minuten herauspräparirte Proboseis kann dann für 10 bis 15 Minuten auf dem Objectträger in einen Eisschrank mit einer Temperatur von 4" C. Die Nervenelemente waren nach dieser Zeit im allgemeinen gut gefärbt. Die Präparate wurden theils frisch, theils nach Fixirung mit Ammoniumpikrat nach DoGiEL oder mit Ammoniummolybdat nach Bethe untersucht. E. Schoebel {Neapel). Mack, H. V., Das Centrainerve nsystem von Sipunculus nudus L. (Bauch Strang). Mit besonderer Be- rücksichtigung des Stützgewebes (Arb. a. d. Zool. Inst. d. Univ. Wien. Bd. XIII, 1900—1902, p. 237 — 334 m. 17 Figg. u. 5 Tfln.). Zur Untersuchung des lebensfrischen Objectes wurden die Thiere im Aquarium gehalten. Ist dies gut durchlüftet und nur massig mit Sand gefüllt, so können sich die Sipunkeln 3 bis 4 Monate halten. Der Sand muss, da er nie von Fäulnisskeimen frei ist, von Zeit zu Zeit erneuert werden. Absterbende Thiere erscheinen an der Ober- fläche und sind leicht durch ihre anämische Farbe und die sich blasig abhebende Cuticula zu erkennen. Um vollkommen ausgestreckte Thiere für Präparationszwecke zu erhalten, giesst Verf. zeitweilig 75procentigen Alkohol auf das Seewasser und lässt ihn diffundiren (6 bis 8 Stunden). Weniger bewährten sich ihm die Narkosen mit Chloralhydrat, Chloroform oder Aether; brauchbar erwies sich dann noch Cocain in einprocentiger Lösung. Die nicht allzulange dem Betäubungsmittel ausgesetzten Thiere bringt man in frisches Seewasser, was sich zur Section und als Medium zur Untersuchung besser eignet als physiologische Kochsalzlösung. — Zur Vorbereitung für Zupf- präparate des Bauchstranges erwies sich nur MtJLLER'sche Flüssigkeit (Einwirkung mehrere Wochen, nachträgliche Durchfärbung mit Hämat- oxylin) und 20procentige Salpetersäure (24 Stunden, Auswaschen in destillirtem Wasser, Färbung mit Hämatoxylin nach vorhergegangener Alaunbeizung) brauchbar. — Zur Fixirung des Materials für Schnitt- präparate kamen zur Verwendung: Concentrirte Sublimatlösung in 0'5- bis 0'7procentiger Kochsalzlösung (15 bis 20 Stunden), Sublimat- Alkohol nach Apäthy (16 bis 24 Stunden). Nach beiden Fixirungen folgt kurzes Abspülen in Wasser, Auswaschen in Alkohol steigender XIX, 2. Referate. 207 Concentration (30-, 50-, 75procentig), Zusatz von alkoholischer Jod- jodkalinmlösung zum Alkohol von 96 Procent (Vorbehandlung mit wässerig-er Jodjodkaliumlüsung gab regelmässige starke Niederschläge von rothem Quecksilberjodid auf den Objecten, die jedoch in der alkoholischen Jodlösung verschwanden). Weiter kam zur Fixirung zur Verwendung ein Gemisch aus gleichen Theilen ^/^procentiger Osmiumsäure und Sublimat-Kochsalzlösung (wie oben) nach Apathy und 7iPi"0centige Osmiumsäure in Seewasser nach Bethe, Flemming's Gemisch und schliesslich Kaliumbichromat-Essigsäure nach Tellyes- NiczKY (Einwirkung ein Tag, Auswaschen in 96proceutigem Alkokol im Dunkeln). Von diesen verschiedenen Fixirungsflüssigkeiten eignete sich die letztere für die Fixirung des Protoplasmas ganz hervor- ragend, ebenso die einfache ^iPi'ocentige Osmiumsäure. Eine Quellung und nachtheilige Wirkung auf die Kernstructur, wie sie Flemming dem Kaliumbichromat zuschreibt, konnte Verf. nach Tellyesniczky- scher Fixirung nicht constatiren. Die zuweilen auftretenden destruc- tive und schrumpfende Wirkung der concentrirten Sublimatgemische wird durch ihre ungemein „differenzirende Kraft" aufgewogen. Die Flemming' sehen Lösungen bräunten zu intensiv und hinderten so eine gute Schnittfärbung. Am wenigsten bewährten sich Fixirungen mit Pikrinsäure- und Formolgemischen. Alle Fixative müssen länger als üblich einwirken, weil die dicke ümscheiduug des Bauchstranges ihr Eindringen erschwert. — Zur besseren Orientirung für die Schnitt- führung wurden die Bauchmarkstücke mit einem dünnen Streifen der darunterliegenden Musculatur eingebettet. Die Einschmelzung in Paraffin erfolgte mit Chloroform oder Xylol als Vormedium. — Ge- färbt wurden die Objecte zunächst in toto und zwar entweder in stark verdünntem (^lo bis ^/oj DELAFiELo'schen Hämatoxylin 6 bis 8 Tage oder in ApIthy's Hämatom I A 5 Tage. In ersterem Falle Auswaschen in destillirtem Wasser einige Stunden und dann rasch Ueberführung in absoluten Alkohol, im letzteren kurzes Abspülen in destillirtem Wasser, Entwässern in absolutem Alkohol aber nur kurze Zeit, weil auch dieser noch Farbe auszieht. Zum Theil wandte Verf. auch beide Färbungen in der Art combinirt an, dass zuerst wenige Tage mit Delafield's Hämatoxylin vorgefärbt wurde und dann die gleiche Zeit mit Apathy's Hämatein, welches vermöge seiner saueren Eigenschaft eine Differenzirung bewirkt, ohne die Intensität der vorhandenen Färbung zu vermindern. Die Schnitte der in toto gefärbten Stücke wurden zum Theil noch mit salzsaurem Alkohol (einpromillig) bis zur reinen Kernfärbung differenzirt. Zur 208 Referate. XIX, 2. Plasmafärbung wurden verwendet: Eine ziemlich concentrirte Lösung von Rubin S in destillirtem Wasser oder bei Kernfärbung mit Borax- carmin auch Bleu de Lyon. Bei ersterer erhielt man durch ein bis 2 Procent Essigsäurezusatz günstige Resultate. Schnitte von Osmiura- material wurden, wenn überhaupt, mit Safranin tingirt. Die besten Resultate gab jedoch, und zwar nach der Fixiruug in Kaliumbichro- mat-Essigsäure, namentlich für die Gliaimtersuchung die Heidenhain- sche Eisenhämatoxylinfärbung, eventuell combinirt mit Orange oder Rubin. Die ApATHY'sche Nachvergoldung zur Darstellung der Neuro- fibrillen gelang trotz Beobachtung aller vorgeschriebenen Cautelen nicht, sie lieferte nur eine Totalfärbung des Präparates. E. Schoebel (Neapel). NllSSbaiim, M. , lieber Kern und Z e 11 th eilung (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LIX, 1902, p. 647—684 m. 1 Fig. u. 2 Tfln.). Zur Untersuchung dienten die Eier von Rhabditis nigrovenosa. Lebend lassen sich die Eier stundenlang untersuchen, wenn man sie in einen Tropfen Humor aqueus des Wirthsfrosches bringt und mit einem Deckgläschen mit Wachsfüsschen bedeckt. Zur Gewinnung des Materials für Fixirung und Conservatiou lässt man am besten die Genitalschläuche durch einen dicht vor dem hinteren Leibesende ge- machten queren Einschnitt austreten. Wenn dies durch die Contrac- tion des sonst unversehrten Hautmuskelschlauches auf einen saubereu trockenen Objectträger bewerkstelligt ist, bringt man die ganzen Thiere mitsammt dem Objectträger in die Fixirungsflüssigkeit. Das Austreten von Uterus und Eileiter nebst Eiröhre geht auf diese Weise so schnell, dass keine Verdunstung stattfinden kann, und dabei liegt das Präparat so glatt und gestreckt, dass es später bequem eingebettet werden kann und zugleich eine gute Orientirung erlaubt. Bedingung für das Gelingen der Präparation ist die tadellose Zu- sammenziehuug des Hautmuskels; das Thier darf weder mit einer Pincette gequetscht noch an irgend einer anderen Stelle als am hinteren Leibesende durch den angelegten Querschnitt verletzt sein. Die Stadien der Befruchtung und ersten Theilungen liegen in dem Bogen, den der Eileiter beim Uebergang in den Uterus am hinteren Leibesende macht. — Zur Fixirung wurde TOprocentiger Alkohol, Sublimatessigsäure und FLEMMiNG'sche Flüssigkeit verwandt. An- wendung heisser Lösungen hat keinen Vortheil. Besondere Vorsicht ist beim Ueberführen der Präparate aus absolutem Alkohol in Xylol XIX, 2. Referate. 209 iiötliig. Der Wechsel der Flüssigkeit darf nur allmälilich stattfinden, weil sonst Schrumpfungen eintreten. Die Einbettung in Paraffin soll bei höchstens 50^ C. erfolgen. E. Schoebel {Neapel). Gougli, L. H. , Tlie development of Admetus puinilio, Koch: a contribution to the embryology of the P e d i p a 1 p s (Quarterly Journ. Microsc. Sei. vol. XLV, pt. 4, 1902, p. 595—630 w. 2 pltes.). Es war zuerst sehr schwierig, gute Schnitte durch die Eier zu erhalten, da sie eine grosse Menge Dotter enthielten. Nach Paraffin- einbettung zerbröckelte der Dotter aber vor dem Messer. Es wurde daher die folgende Methode angewendet. Die Embryonen kamen durch steigenden Alkohol in absoluten ^ blieben dann einige Tage in Celloidinlösiing und gelangten aus diesem direct in Chloroform. Dies hat den doppelten Vortheil , dass das Celloidin fest wird und die Präparate in Paraffin übertragen werden können. Nach Paraffin- einbettung wurden sie wie gewöhnliche Paraffinpräparate geschnitten. Sie wurden auf dem Objecttrager mit Wasser aufgeklebt. Waren alle Schnitte in diesem auf dem Objecttrager geordnet , so wurde das Wasser mit Fliesspapier schnell abgesogen , worauf sehr dünn- flüssiges Celloidin über die Schnitte gegossen wurde ; man Hess sie trocknen , wobei eine Schrumpfung nicht eintreten konnte , da die Schnitte ja noch in Paraffin eingeschlossen waren. Nach der Trock- nung war das Celloidiuhäutchen sehr dünn. Dann wurde das Paraffin mit Chloroform entfernt, und die Schnitte wurden in gewöhnlicher Weise weiterbehandelt. So erhielt Verf. gute Serienschnitte , ohne dass der Dotter ausbröckelte. Gefärbt wurde immer mit Hämatoxylin und Eosin. Schiefferdecker {Bonn). Hesse, ß., Untersuchungen über die Organe der Licht- empfindung bei niederen Thieren. 7. Von den Arthropod en- Augen (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXX, 1901,p. 347—47.3 m. 2 Figg. u. 6 Tfln.). Zur Fixirung leistete Sublimat-Essigsäure die besten Dienste, da sie besonders die iibrillären Structuren gut erhält. Die Haupt- schwierigkeit bietet sich bei der Schnittanfertiguug durch die Härte des Chitins dar. Am sichersten hilft man sich durch Loslösung der Weichtheile vom Chitin. An gut in absolutem Alkohol gehärteten Objecten lassen sich durch seitlichen Druck mit einem Messerchen die Weichtheile mitsammt der umgebenden Hypodermis von der Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XIX, 2. 14 210 Referate. XIX, 2. Cuticula absprengen. Der Erfolg ist nicht überall gleich befriedigend; am leichtesten gelingt diese Procedur bei Skorpionen und Spinnen ; aber auch bei den Augen der Raupen und Phryganeidenlarven , bei den Stirnaugen der Fliegen, Wanzen u. a., selbst bei den Complex- augen von Periplaneta hat sie Verf. mit Glück angewendet. Wo diese Methode versagte , wie bei grösseren Complexaugen , wurde nach der Einbettung in Paraffin die Cuticula mit einem Messerchen abgeschält und dann aufs Neue eingebettet; für die Untersuchung des Complexauges der Schmetterlinge, soweit sie den Bau der Reti- nula betrifft, ist dieses Verfahren sehr zu empfehlen. Wenn wegen der Kleinheit des Objectes auch nicht in dieser Weise vorzugehen war , musste , wohl oder übel , das Chitin mit geschnitten werden. Verf. fand hierbei eine wesentliche Erleichterung in der Einbettung der Objecte mit Celloidin-Paraffin nach der von Field und Martin angegebenen Weise ^. Zur Färbung der Schnitte wird , speeiell für die Erkennung der Faserstructuren in den Sehzellen, Eisenhämatoxylin nach Heidenhain empfohlen , auch Delafield's Hämatoxylin wurde vielfach verwendet. Nicht selten stellte sich bei der Weiterbehand- lung der Schnitte der Uebelstand ein, dass die chitinigen Theile sich loslösten. Dem beugte Verf. dadurch vor , dass er nach dem Auf- lösen des Paraffins und dem Ueberführen der (auf das Deckglas aufgeklebten) Schnitte in absolutem Alkohol , dieselben mit einer ^/^- bis ^/.^procentigen Lösung von Photoxylin überzog. So gesichert wurden die Präparate eutpigmentirt , gebeizt, gefärbt, differenzirt, und erst vor dem Aufhellen wurde das Photoxylin durch Einlegen in eine Alkohol-Aether-Mischuug wieder entfernt. E. Schoebel (Neapel). Kadic, 0., Studien über das Labium der Coleopteren (Jenaische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XXXVI, 1901—1902, p. 207—228 m. 1 Tfl.). Für Uebersichtsuntersuchungen ist trocknes Material verwendbar, für genaues Studium dürfen aber nur frisch gesammelte in TOprocen- tigem Alkohol conservirte Thiere benutzt werden. Zum Zweck der Präparation des Labium wurde der Kopf zunächst 3 bis 5 Minuten in Kali- oder Natronlauge gekocht. Die Präparation des Labium geschah dann in folgender Weise : Der Kopf wurde auf einen Object- träger gelegt, mit der Pincette gehalten und mit einer spitzen Scheere ^) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XI, 1894, p. 6. XIX, 2. Referate. 2 1 1 die Gcnae dnrchschuitten. Auf diese Weise wird der Kopf in einen dorsalen Theil mit Labiiim und Mandibulae, und einen ventralen mit Labium und Maxillae getlieilt. Nach Abwaschen des so gewonnenen Labium in destillirtem Wasser wird es in einigen Tropfen einer passenden Flüssigkeit weiter präparirt und untersucht. Wasser wird vom Verf. als das beste Uutersuchsmedium empfohlen, Glycerin ist in sofern bequem , als in ihm die Objecte leicht in jeder Lage ge- halten werden können, hat aber den Nachtheil, dass zarte Objecte schrumpfen. Bei Präparatiou und Untersuchung leistete die ZEiss'sche Binocularlupe ganz unersetzliche Dienste , da nur im biuocularen stereoskopischen Sehen das complicirte Relief des Objectes in richtiger Weise zur Anschauung gebracht wird. — Schnittpräparate wurden nur zum Studium der BeschatFenheit des Chitins angefertigt. Die Objecte wurden 4 bis 8 Tage mit 10- bis 20procentiger Salpeter- säure behandelt und dann, wenn sie weich und schneidbar geworden waren, nach gründlichem Waschen in Wasser in der üblichen Weise zum Schneiden hergerichtet. E. Schoebel {Neapel). Aggozzotti, A., Sulla terminazione nervosa motrice nei muscoli striati degli insetti [Ueber die motorischen Nervenendigungen in den quer- gestreiften Muskeln der Insecten] (Atti R. Accad. delle Scienze di Torino vol. XXXVII, 1902, p. 724—732 c. 1 tav.). Zur Darstellung der motorischen Nervenendigungen bediente sich Verf. der von Negro vorgeschlagenen Färbung des frischen Muskel- gewebes ^. Die Muskeln der Beine und Flügel wurden für 24 bis 48 Stunden in das Hämatoxylingemisch gebracht, und nach gehörigem Waschen mit Wasser eventuell mit einem schwachsauren Gemisch aus Glycerin, Wasser und Salzsäure entfärbt. Die Muskelstücke wurden dann auf dem Objectträger zerzupft und in verdünntes Gly- cerin (1 Th. Glycerin, 1 Tb. Wasser) eingeschlossen. Durch vor- sichtiges Klopfen auf das Deckglas lässt sich die Isolirung der Ele- mente noch weiter treiben. E. Schoebel {Neapel). Meves, F., lieber oligopyrene und apyrene Spermien und über ihre Entstehung, nach Beobachtungen 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. VII, 1890, p. 74. 14^ 212 Referate. XIX, 2. an P a 1 u d i n a und P y g a e r a (Arch. f. mikrosk. Aiiat, Bd. LXI, 1902, p. 1—84 mit 30 Figg. u. 8 Tfln.). Die Untersuchungen wurden bauptsächlicli an Material angestellt, welches in HERMANN'schem Gemisch fixirt und mit Eisenhämatoxylin gefärbt war. Wenn auch das HERMANN'sche Gemisch in Bezug auf die Erhaltung der chromatischen Structuren nicht ganz so Gutes wie das FLEMMiNG'sche leistet, wurde doch die Fisirung in ersterem vorgezogen, weil bei Anwendung des letzteren und nachfolgender Tinction mit Eisenhämatoxylin leicht die Mitocbondrien mit gefärbt werden, was aber für die vorliegenden Untersuchungen von grossem Nachtheil gewesen wäre. Von anderen Fixirungsmitteln wurde noch mit einigermassen gutem Erfolg Sublimat- Eisessig und Sublimat- Alkohol-Eisessig angewandt. Zur Färbung wurde für solches Material das EHRLiCH-BiONDi'sche Dreifarbengemisch gebraucht, da man auch bei diesen Fixirungen mit Eisenhämatoxylin leicht Färbung der Mito- cbondrien erhält. Als gänzlich ungeeignet erwies sich reines Subli- mat, da es auf die Zellen des Paludinahodens stark schrumpfend wirkt. E. Schoebel (Neapel). Lange, A., üeber den Bau und die Function der Speichel- drüsen bei den Gastropoden (Anat. Hefte, H. 61, 1902, p. 84—1,53 m. 1 Tfl.). Hauptsächlich wurde untersucht Helix pomatia, zum Vergleiche auch H. nemoralis und H. hortensis , ferner Arion empiricorum und Limax variegatus, von Wasserschnecken Limnaeus stagnalis. Nach mehreren Vorversuchen kam Verf. auf die folgende Präparations- methode. Er warf die Heliciden in ein Gefäss mit Wasser, dem gerade so viel Chromsäure zugesetzt war, dass es rheinweinfarbig aussah, und legte dann einen Deckel auf das Gefäss, der direct mit dem Wasser abschloss , damit keine Luft eintreten konnte. Bald fingen die Thiere an sich vollständig auszustrecken imd im Gefässe umherzukriechen. In diesem Augenblicke erhielten sie eine viertel bis halbe PRAVAz'sche Spritze voll einprocentiger Cocainlösung. Wenn sie sich auch im ersten Augenblicke etwas zusammenzogen, so streckten sie sich doch bald wieder völlig aus und aus dem schlaffen Herab- hängen des Vorderleibes nach 10 bis 15 Minuten konnte man auf die lähmende Wirkung des Cocains schliesseu. Verf. wartete meist noch 5 Minuten und nahm dann die Präparation vor. Bei Arion und Limax legte er meist durch einen seitlichen Längsschnitt die ganzen Eingeweide mit den Speicheldrüsen frei. Auf Cocaininjection XIX, 2. Referate. 213 zieht sich Arion znniichst stark zusammen, dann sieht man, wie die Seite , an der die Injection vorgenommen wurde , stark anschwillt. Allmählich streckt sich das Thier vollständig aus. Curare wirkte nicht , und eine Narkotisirung mit Aether oder Chloroform erwies sich als unpraktisch, ebenso das Tödten der Thiere durch Wasser. — Sobald die Drüsen herauspräparirt waren, kamen einzelne Stücke in die Lösungen von Rabl, Zenker, Hermann und Altmann, ferner in einprocentige Osmiumsäure und absoluten Alkohol. Diese Fixirungs- flüssigkeiten lieferten ausserordentlich verschiedene Bilder, Verf. giebt dafür eine Zusammenstellung in einer Tabelle , weswegen auf das Original verwiesen wird. Das ALTMANN'sche Gemisch erwies sich am besten. Es lässt nicht nur die Zellgranula deutlich hervortreten, sondern man kann auch bei ihm mit Hülfe der verschiedensten Färbungen alle Zellelemente studiren. Die ZENKER'sche , RABL'sche und HEKMANN'sche Mischung sowie die Sublimat-Kochsalzlösung fixiren nur unvollkommen, Osmiumsäure und absoluter Alkohol erwiesen sich als weit besser. Zur Färbung benutzte Verf. zunächst eine Stück- färbung in Alauncarmin und Boraxcarmin (24 Stunden), doch erwies sich diese als mangelhaft. Verdünntes Hämatoxylin (Delafield) ist besser , namentlich an Sublimatpräparaten , die mit FiscHER'schem Eosin nachgefärbt wurden. Aehnlich Hämalaun. Ausgezeichnet wirkte das Eisenalaun-Hämatoxylin nach M. Heidenhain, eventuell mit einer Contrastfärbung durch Eosin oder Bordeaux-Carmin. Auch die Schleim- färbung mit Mucicarmin wurde damit verbunden. Für das Eisenalaun- Hämatoxylin eignen sich am besten die Präparate aus ALTMANN'scher Mischung und Sublimat-Kochsalz. Die Präparate aus HERMANN'scher Lösung wurden mit Gentianaviolett gefärbt und nachfolgender Gram- scher Jodkaliumlösung ; vorzügliche Kernfärbung , aber nie Kern- membran, Protoplasma dunkel, kein Unterschied von Schleim. Körnchen in den Kürnchenzellen blau etc. Was die Schlei m f ä r b u u g e n anlangt, so erhielt Verf. mit Thionin keine befriedigenden Resultate, besser schon bei Bismarckbraun , Mucicarmin ergab gar nichts, am besten zeigte sich verdünntes Hämatoxylin (Delafield). Eingebettet wurde nur in Paraftin. Schiefferdecker {Bonn). Ahting, K., Untersuchungen über die Entwicklung des BojANUs'schen Organs und des Herzens der Lamellibranchier (Jenaische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XXXVI, 1901—1902, p. 181—206 m. .3 Tfln.). Die Untersuchungen wurden an Mytilus edulis ausgeführt. Zur 214 ' Referate. XIX, 2. Fixirung diente Sublimatessigsäure. Dabei ist zu beachten, dass man keinen zu starken Essigsäurezusatz anwendet. Die kleinsten Thiere vertragen recht gut einen Zusatz von einhalb bis ein Procent zur concentrirten Sublimatlösung, die grössten bis zu 2 Procent. Ein stärkerer Essigsäurezusatz ist nicht rathsam, weil sonst durch zu schnelle Kohlensäureentwicklung leicht Gewebezerreissungen vorkom- men. Die unter der Schale gebildeten Gasblasen kann man meistens mit der Pipette fortsaugen. Die Thiere bleiben in der Fixirungs- flüssigkeit bis zur vollständigen Eutkalkung der Schale, die kleinsten Exemplare einen halben Tag, die grössten bis zu 2^/., Tage. Nach gehörigem Auswaschen in destillirtem Wasser wurden die Objecte in toto mit Alauncarmin gefärbt und in gewöhnlicher Weise zum Schneiden vorbereitet. E. Schoebel {Neapel). Smidt, H. , Die intra epithelialen freien Nervenendi- gungen bei H e 1 i x und ihre Beziehungen zu Siunesz eilen und Drüsen (Anat. Anz. Bd. XX, No. 19, 20, 1902, p. 495—506 m. 8 Figg.). Verf. hat seine Untersuchungen durchweg mit der SMiRNOw'schen Modification der Golgi- Methode ausgeführt. Weder die vitale Me- thylenblaufärbung noch die Methoden von Bethe und Apathy gaben irgendwelche befriedigenden Resultate. Auch für die Silberimprägna- tion sind die intraepithelialen freien Nervenendigungen ein ziemlich schwieriges Object, sie differenziren sich z. B. seltener als die Sinnes- zellen. Verf. hat die meisten in jener Gegend vorkommenden Land- und Süsswasserpulmonaten mit der oben genannten Methode bearbeitet, hat aber bislier nur bei den Helixarten (pomatia, nemoralis, hortensis, arbustorum) gute Resultate erzielt. Schiefferdecker {Bonn). Tobler, M., Zur Anatomie vonParmophorus intermedius Reeve (Jenaische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XXXVI, 1901 — 1902, p. 229—274 m. 3 Tfln.). Zur Untersuchung diente älteres Material, das in Sublimat fixirt und in TOprocentigem Alkohol aufbewahrt worden war. Ein Theil erwies sich für mikroskopische Untersuchungen bereits als untauglich. Am geeignetsten für das Studium der gesammten Organisation zeigten sich neben makroskopischen Präparatiouen Querschnittserien. Radula, Fuss und Darminhalt bot beim Schneiden Schwierigkeiten. Die Objecte mussten vor dem Einbetten in Paraffin mit Cedernholzöl (ja nicht mit Xylol) behandelt und lange im Paraffin belassen werden. Die XIX, 2. Referate. 215 Schnitte wurden mit Eiweissglycerin aufgeklebt und entweder mit Hämatoxylin-Eosin oder mit Häraalaun-Eosin gefärbt. Letztere Fär- bung ergab bessere Differenzirung als erstere. E. Schoehei {Neapel). Bottmanu, G., Ueber die Embryonalentwicklung der Radula bei den Mollusken. 1. Di e Entwicklung derRadula bei denCephalopoden (Zeitschr. f. wiss. Zool. Bd. LXX, 1901, p. 236—288 m. 4 Figg. u. 2 Tfln.). Das Material war meist in Sublimat und Cliromosmiumessigsäure fixirt worden. Bei der Einbettung in Paraffin muss der Aufenthalt der Objecte in Xylol beziehungsweise Chloroform und im geschmolze- nen Paraffin möglichst abgekürzt werden, weil sonst der Dotter beim Schneiden durch seine Härte grosse Schwierigkeit bereitet. Ein Ver- weilen von 24 Stunden in absolutem Alkohol, 2 Stunden in Xylol, dann im Einschmelzofen eine halbe Stunde in einer Lösung von Paraffin in Xylol und schliesslich nur eine Stunde in reinem Paraffin erwies sich als genügend. Die Färbung mit Boraxcarmin, Hämatoxylin und Eisenhämatoxylin nach Heidenhain, gaben in einem wichtigen Punkte nämlich betreft's Feststellung der neu abgeschiedenen Theile der Radula im Taschengrunde keine Aufklärung, wohl aber eine Com- bination von Eisenhämatoxylin mit Bismarckbraun. Die mit Eisen- hämatoxylin in der gewöhnlichen Weise tingirten Schnitte wurden in eine Lösung von Bismarckbraun in absolutem Alkohol für einige Minuten gebracht, dann rasch mit absolutem Alkohol abgespült, mit Xylol behandelt und in Canadabalsam eingeschlossen. Es wird die frisch abgesonderte Substanz der jüngsten Zähne intensiv gelbbraun gefärbt, so dass die geringste Spur einer Neubildung sofort zu er- kennen ist. Aber auch auf die übrigen Theile des Präparates wirkte die Nachfärbung mit Bismarckbraun günstig. E. Schoehei (Neapel). B. Wirbelthiere. Burchardt, E., Beiträge zur Kenntuiss des Amphioxus lanceolatus (Jeuaische Zeitschr. f. Naturwiss. Bd. XXXIV, 1900, p. 719—832 m. 9 Tfln.). 216 Referate. XIX, 2. Der grösste Theil des Untersuchungsmaterials war vor langer Zeit in Kleinenberg's Pikrinschwefelsäiire fixirt und iu Alkohol con- servirt worden. Ausserdem kam noch Osmiumsäure- und Pikrin- säurematerial zur Untersuchung. Die Färbung wurde mit den vom Verf. angegebenen Holzessigfarben -^ ausgeführt. Die Färbekraft dieser Carmine lässt sich noch durch Erhöhung des Alaungehaltes, auf 4 Procent in dem einfachen, auf 2 Procent in dem Doppelcarmin verstärken, ebenso auch die Cochenille-Lösung. Bei einer nicht zu kurz dauernden Färbung, 24 bis 48 Stunden, wird das Blut braun gefärbt, wodurch die Verfolgung der Gefässe sehr erleichtert wird, nothwendig ist aber von einem sicheren Gefässdurchschnitt auszugehen, da leider auch die Cölomflüssigkeit in gleicher Weise gerinnt und sich färbt. Zum Einschmelzen in Paraffin kam Xylol als Vormedium zur Verwendung. Das gelbe, überhitzte Paraffin kann Verf. nicht empfehlen. Gewöhnliches weisses Paraffin von etwa 55^0. Schmelz- punkt ist unbedingt vorzuziehen. Nach verschiedenen vom Verf. angestellten Versuchen ist die Paraffiumasse um so brauchbarer, je mehr Paraf